研究者詳細

顔写真

フナハシ　ジユンイチ
舟橋　淳一
Junichi Funahashi
所属
加齢医学研究所　腫瘍制御研究部門　呼吸器外科学分野
職名
准教授
学位

  • 理学博士 （名古屋大学）

学歴 1

  • 名古屋大学　理学研究科　分子生物学

    ～ 1993年9月30日

所属学協会 2

  • 日本分子生物学会

  • 日本発生生物学会

研究分野 1

  • ライフサイエンス / 発生生物学 / 発生生物学

論文 35

  1. Prognostic impact of LILRB4 expression on tumor‐infiltrating cells in resected non‐small cell lung cancer 査読有り

    Sakiko Kumata, Hirotsugu Notsuda, Mei‐Tzu Su, Ryoko Saito‐Koyama, Ryota Tanaka, Yuyo Suzuki, Junichi Funahashi, Shota Endo, Isao Yokota, Toshiyuki Takai, Yoshinori Okada

    Thoracic Cancer　14　(21)　2057-2068　2023年6月8日

    出版者・発行元： Wiley

    DOI： 10.1111/1759-7714.14991 　

    ISSN：1759-7706

    eISSN：1759-7714

  2. 肺移植後閉塞性細気管支炎に対するCTLA4-Igの線維性閉塞抑制効果の検討 マウス肺内気管移植モデルを用いて

    鈴木 大和, 大石 久, 兼平 雅彦, 渡辺 有為, 野津田 泰嗣, 平間 崇, 鈴木 隆哉, 松田 安史, 佐渡 哲, 野田 雅史, 舟橋 淳一, 桜田 晃, 岡田 克典

    移植　55　(4)　498-498　2021年3月

    出版者・発行元： (一社)日本移植学会

    ISSN：0578-7947

    eISSN：2188-0034

  3. 肺移植後閉塞性細気管支炎に対するCTLA4-Igの線維性閉塞抑制効果の検討 マウス肺内気管移植モデルを用いて

    鈴木 大和, 大石 久, 兼平 雅彦, 渡辺 有為, 野津田 泰嗣, 平間 崇, 鈴木 隆哉, 松田 安史, 佐渡 哲, 野田 雅史, 舟橋 淳一, 桜田 晃, 岡田 克典

    移植　55　(4)　498-498　2021年3月

    出版者・発行元： (一社)日本移植学会

    ISSN：0578-7947

    eISSN：2188-0034

  4. 当科における病理病期I期非小細胞肺癌の術後再発症例と外来経過観察の至適期間についての検討

    小塩 弘樹, 野津田 泰嗣, 早坂 一希, 熊田 早希子, 山田 剛裕, 阿部 皓太郎, 鈴木 大和, 田中 遼太, 平間 崇, 渡辺 有為, 江場 俊介, 鈴木 隆哉, 大石 久, 佐渡 哲, 野田 雅史, 舟橋 淳一, 桜田 晃, 岡田 克典

    日本呼吸器外科学会雑誌　34　(3)　MO14-3　2020年8月

    出版者・発行元： (NPO)日本呼吸器外科学会

    ISSN：0919-0945

    eISSN：1881-4158

  5. 診断未確定の肺部分すりガラス状結節への肺葉切除実施の妥当性について

    小塩 弘樹, 野津田 泰嗣, 早坂 一希, 熊田 早希子, 山田 剛裕, 阿部 皓太郎, 鈴木 大和, 田中 遼太, 平間 崇, 渡辺 有為, 江場 俊介, 鈴木 隆哉, 大石 久, 佐渡 哲, 野田 雅史, 舟橋 淳一, 桜田 晃, 岡田 克典

    日本呼吸器外科学会雑誌　34　(3)　MO26-8　2020年8月

    出版者・発行元： (NPO)日本呼吸器外科学会

    ISSN：0919-0945

    eISSN：1881-4158

  6. 当科における病理病期I期非小細胞肺癌の術後再発症例と外来経過観察の至適期間についての検討

    小塩 弘樹, 野津田 泰嗣, 早坂 一希, 熊田 早希子, 山田 剛裕, 阿部 皓太郎, 鈴木 大和, 田中 遼太, 平間 崇, 渡辺 有為, 江場 俊介, 鈴木 隆哉, 大石 久, 佐渡 哲, 野田 雅史, 舟橋 淳一, 桜田 晃, 岡田 克典

    日本呼吸器外科学会雑誌　34　(3)　MO14-3　2020年8月

    出版者・発行元： (NPO)日本呼吸器外科学会

    ISSN：0919-0945

    eISSN：1881-4158

  7. 診断未確定の肺部分すりガラス状結節への肺葉切除実施の妥当性について

    小塩 弘樹, 野津田 泰嗣, 早坂 一希, 熊田 早希子, 山田 剛裕, 阿部 皓太郎, 鈴木 大和, 田中 遼太, 平間 崇, 渡辺 有為, 江場 俊介, 鈴木 隆哉, 大石 久, 佐渡 哲, 野田 雅史, 舟橋 淳一, 桜田 晃, 岡田 克典

    日本呼吸器外科学会雑誌　34　(3)　MO26-8　2020年8月

    出版者・発行元： (NPO)日本呼吸器外科学会

    ISSN：0919-0945

    eISSN：1881-4158

  8. Targeted disruption of the mouse protein phosphatase ppm1l gene leads to structural abnormalities in the brain. 査読有り

    渡邊 利雄, Rie Kusano, Kousuke Fujita, Yasuharu Shinoda, Yuko Nagaura, Hiroshi Kiyonari, Takaya Abe, Toshio Watanabe, Yasuhisa Matsui, Masahiro Fukaya, Hiroyuki Sakagami, Tatsuya Sato, Jun-ichi Funahashi, Motoko Ohnishi, Shinri Tamura, Takayasu Kobayashi

    FEBS Letters　590　(20)　3606-3615　2016年10月

    DOI： 10.1002/1873-3468.12429 　

    ISSN：0014-5793

    eISSN：1873-3468

  9. Inactivation of Sonic Hedgehog Signaling and Polydactyly in Limbs of Hereditary Multiple Malformation, a Novel Type of Talpid Mutant. 国際誌 査読有り

    Yoshiyuki Matsubara, Mikiharu Nakano, Kazuki Kawamura, Masaoki Tsudzuki, Jun-Ichi Funahashi, Kiyokazu Agata, Yoichi Matsuda, Atsushi Kuroiwa, Takayuki Suzuki

    Frontiers in cell and developmental biology　4　149-149　2016年

    DOI： 10.3389/fcell.2016.00149 　

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    Hereditary Multiple Malformation (HMM) is a naturally occurring, autosomal recessive, homozygous lethal mutation found in Japanese quail. Homozygote embryos (hmm-/-) show polydactyly similar to talpid2 and talpid3 mutants. Here we characterize the molecular profile of the hmm-/- limb bud and identify the cellular mechanisms that cause its polydactyly. The hmm-/- limb bud shows a severe lack of sonic hedgehog (SHH) signaling, and the autopod has 4 to 11 unidentifiable digits with syn-, poly-, and brachydactyly. The Zone of Polarizing Activity (ZPA) of the hmm-/- limb bud does not show polarizing activity regardless of the presence of SHH protein, indicating that either the secretion pathway of SHH is defective or the SHH protein is dysfunctional. Furthermore, mesenchymal cells in the hmm-/- limb bud do not respond to ZPA transplanted from the normal limb bud, suggesting that signal transduction downstream of SHH is also defective. Since primary cilia are present in the hmm-/- limb bud, the causal gene must be different from talpid2 and talpid3. In the hmm-/- limb bud, a high amount of GLI3A protein is expressed and GLI3 protein is localized to the nucleus. Our results suggest that the regulatory mechanism of GLI3 is disorganized in the hmm-/- limb bud.

  10. Time-lapse imaging system with shell-less culture chamber 査読有り

    Jun-ichi Funahashi, Harukazu Nakamura

    DEVELOPMENT GROWTH & DIFFERENTIATION　56　(4)　305-309　2014年5月

    DOI： 10.1111/dgd.12132 　

    ISSN：0012-1592

    eISSN：1440-169X

  11. Role of En2 in the tectal laminar formation of chick embryos 査読有り

    Minoru Omi, Hidekiyo Harada, Yuji Watanabe, Jun-ichi Funahashi, Harukazu Nakamura

    DEVELOPMENT　141　(10)　2131-2138　2014年5月

    DOI： 10.1242/dev.102905 　

    ISSN：0950-1991

    eISSN：1477-9129

  12. Epithelial-mesenchymal transition as a possible mechanism of semicircular canal morphogenesis in chick inner ear 査読有り

    Yuriko Kobayashi, Harukazu Nakamura, Jun-Ichi Funahashi

    TOHOKU JOURNAL OF EXPERIMENTAL MEDICINE　215　(3)　207-217　2008年7月

    DOI： 10.1620/tjem.215.207 　

    ISSN：0040-8727

    eISSN：1349-3329

  13. Electroporation in avian embryos 査読有り

    Jun-Ichi Funahashi, Harukazu Nakamura

    Methods in Molecular Biology　461　377-382　2008年

    DOI： 10.1007/978-1-60327-483-8_27 　

    ISSN：1064-3745

  14. Role of Bone morphogenetic protein 4 in zebrafish semicircular canal development. 査読有り

    Omata Yasuhiro, Nojima Yasuhiro, Nakayama Satomi, Okamoto Hitoshi, Nakamura Harukazu, Funahashi Jun-ichi

    Dev Growth Differ　49　(9)　711-719　2007年12月

    DOI： 10.1111/j.1440-169X.2007.00964.x 　

    ISSN：0012-1592

  15. Role of Bone morphogenetic protein 4 in zebrafish semicircular canal development 査読有り

    Yasuhiro Omata, Yasuhiro Nojima, Satomi Nakayama, Hitoshi Okamoto, Harukazu Nakamura, Jun-ichi Funahashi

    DEVELOPMENT GROWTH & DIFFERENTIATION　49　(9)　711-719　2007年12月

    DOI： 10.1111/j.1440-169x.2007.00964.x 　

    ISSN：0012-1592

  16. Cloning and developmental expression of a chick G-protein-coupled receptor SCGPR1 査読有り

    Noritaka Odani, Samuel L. Pfaff, Harukazu Nakamura, Jun-ichi Funahashi

    GENE EXPRESSION PATTERNS　7　(4)　375-380　2007年2月

    DOI： 10.1016/j.modgep.2006.12.003 　

    ISSN：1567-133X

  17. Dan is required for normal morphogenesis and patterning in the developing chick inner ear. 査読有り

    Yamanishi Takahiro, Katsu Kenjiro, Funahashi Jun-Ichi, Yumoto Eiji, Yokouchi Yuji

    Dev Growth Differ　49　(1)　13-26　2007年1月

    DOI： 10.1111/j.1440-169X.2007.00900.x 　

    ISSN：0012-1592

  18. Dan is required for normal morphogenesis and patterning in the developing chick inner ear 査読有り

    Takahiro Yamanishi, Kenjiro Katsu, Jun-ichi Funahashi, Eiji Yumoto, Yuji Yokouchi

    DEVELOPMENT GROWTH & DIFFERENTIATION　49　(1)　13-26　2007年1月

    DOI： 10.1111/j.1440-169x.2007.00900.x 　

    ISSN：0012-1592

  19. Role of Gbx2 and Otx2 in the formation of cochlear ganglion and endolymphatic duct 査読有り

    Hiromitsu Miyazaki, Toshimitsu Kobayashi, Harukazu Nakamura, Jun-ichi Funahashi

    DEVELOPMENT GROWTH & DIFFERENTIATION　48　(7)　429-438　2006年9月

    DOI： 10.1111/j.1440-169x.2006.00879.x 　

    ISSN：0012-1592

  20. Role of Gbx2 and Otx2 in the formation of cochlear ganglion and endolymphatic duct 査読有り

    Hiromitsu Miyazaki, Toshimitsu Kobayashi, Harukazu Nakamura, Jun-ichi Funahashi

    DEVELOPMENT GROWTH & DIFFERENTIATION　48　(7)　429-438　2006年9月

    DOI： 10.1111/j.1440-169x.2006.00879.x 　

    ISSN：0012-1592

  21. Gain- and loss-of-function in chick embryos by electroporation 査読有り

    H Nakamura, T Katahira, T Sato, Y Watanabe, J Funahashi

    MECHANISMS OF DEVELOPMENT　121　(9)　1137-1143　2004年9月

    DOI： 10.1016/j.mod.2004.05.013 　

    ISSN：0925-4773

  22. Analysis of embryonic motoneuron gene regulation: derepression of general activators function in concert with enhancer factors 査読有り

    SK Lee, LW Jurata, J Funahashi, EC Ruiz, SL Pfaff

    DEVELOPMENT　131　(14)　3295-3306　2004年7月

    DOI： 10.1242/dev.01179 　

    ISSN：0950-1991

  23. Six1 controls patterning of the mouse otic vesicle 査読有り

    H Ozaki, K Nakamura, J Funahashi, K Ikeda, G Yamada, H Tokano, H Okamura, K Kitamura, S Muto, H Kotaki, K Sudo, R Horai, Y Iwakura, K Kawakami

    DEVELOPMENT　131　(3)　551-562　2004年2月

    DOI： 10.1242/dev.00943 　

    ISSN：0950-1991

  24. Role of Pax‐5 in the regulation of a mid‐hindbrain organizer’s activity 査読有り

    Jun‐ichi Funahashi, Tatsuya Okafuji, Hideyo Ohuchi, Sumihare Noji, Hideaki Tanaka, Harukazu Nakamura

    Dev Growth Differ　41　(1)　59-72　2002年2月

    DOI： 10.1046/j.1440-169X.1999.00401.x 　

    ISSN：0012-1592

  25. Introduction of DNA into chick embryos by in ovo electroporation

    H Nakamura, J Funahashi

    METHODS　24　(1)　43-48　2001年5月

    DOI： 10.1006/meth.2001.1155 　

    ISSN：1046-2023

  26. Axonal growth of the spinal cord interneurons expressing a homophilic adhesion molecule SC1 ectopically 査読有り

    T Fujii, J Funahashi, R Matsuura, T Izaki, H Nakamura, T Mikawa, H Tanaka

    NEUROSCIENCE RESEARCH　38　(2)　175-181　2000年10月

    DOI： 10.1016/S0168-0102(00)00158-9 　

    ISSN：0168-0102

  27. Misexpression of genes in brain vesicles by in ovo electroporation 査読有り

    H Nakamura, Y Watanabe, J Funahashi

    DEVELOPMENT GROWTH & DIFFERENTIATION　42　(3)　199-201　2000年6月

    DOI： 10.1046/j.1440-169X.2000.00501.x 　

    ISSN：0012-1592

  28. Antagonizing activity of chick Grg4 against tectum-organizing activity 査読有り

    S Sugiyama, J Funahashi, H Nakamura

    DEVELOPMENTAL BIOLOGY　221　(1)　168-180　2000年5月

    DOI： 10.1006/dbio.2000.9643 　

    ISSN：0012-1606

  29. Interaction between Otx2 and Gbx2 defines the organizing center for the optic tectum 査読有り

    T Katahira, T Sato, S Sugiyama, T Okafuji, Araki, I, J Funahashi, H Nakamura

    MECHANISMS OF DEVELOPMENT　91　(1-2)　43-52　2000年3月

    DOI： 10.1016/S0925-4773(99)00262-2 　

    ISSN：0925-4773

  30. Roles of Pax-2 in initiation of the chick tectal development 査読有り

    T Okafuji, J Funahashi, H Nakamura

    DEVELOPMENTAL BRAIN RESEARCH　116　(1)　41-49　1999年8月

    DOI： 10.1016/S0165-3806(99)00073-5 　

    ISSN：0165-3806

  31. Crossregulation between En-2 and Wnt-1 in chick tectal development. 査読有り

    Sugiyama S, Funahashi J, Kitajewski J, Nakamura H

    Development, growth & differentiation　40　(2)　157-166　1998年4月

    出版者・発行元： 2

    DOI： 10.1046/j.1440-169X.1998.00005.x 　

    ISSN：0012-1592

  32. En-2 regulates the expression of the ligands for Eph type tyrosine kinases in chick embryonic tectum 査読有り

    Y Shigetani, J Funahashi, H Nakamura

    NEUROSCIENCE RESEARCH　27　(3)　211-217　1997年3月

    DOI： 10.1016/S0168-0102(96)01151-0 　

    ISSN：0168-0102

  33. THE DELTA-CRYSTALLIN ENHANCER-BINDING PROTEIN DELTA-EF1 IS A REPRESSOR OF E2-BOX-MEDIATED GENE ACTIVATION 査読有り

    R SEKIDO, K MURAI, JI FUNAHASHI, Y KAMACHI, A FUJISAWASEHARA, YI NABESHIMA, H KONDOH

    MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY　14　(9)　5692-5700　1994年9月

    DOI： 10.1128/MCB.14.9.5692 　

    ISSN：0270-7306

  34. DELTA-CRYSTALLIN ENHANCER-BINDING PROTEIN DELTA-EF1 IS A ZINC FINGER-HOMEODOMAIN PROTEIN IMPLICATED IN POSTGASTRULATION EMBRYOGENESIS 査読有り

    J FUNAHASHI, R SEKIDO, K MURAI, Y KAMACHI, H KONDOH

    DEVELOPMENT　119　(2)　433-446　1993年10月

    ISSN：0950-1991

  35. Identification of nuclear factor δEF1 and its binding site essential for lens-specific activity of the δ1-crystallin. 査読有り

    舟橋 淳一

    Nucleic Acids Research　19　(13)　3543-3547　1991年7月

    DOI： 10.1093/nar/19.13.3543 　

    ISSN：0305-1048

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MISC 6

  1. 肺移植後虚血再灌流肺障害におけるNrf2活性化の効果

    東郷 威男, 星川 康, 田口 恵子, 矢吹 皓, 三友 英紀, 渡邊 龍秋, 松田 安史, 大石 久, 佐渡 哲, 野田 雅史, 舟橋 淳一, 山本 雅之, 岡田 克典

    移植　53　(総会臨時)　398-398　2018年9月

    出版者・発行元： (一社)日本移植学会

    ISSN： 0578-7947

  2. 肺移植後虚血再灌流肺障害におけるNrf2活性化の効果

    東郷 威男, 星川 康, 田口 恵子, 矢吹 皓, 三友 英紀, 渡邊 龍秋, 松田 安史, 大石 久, 佐渡 哲, 野田 雅史, 舟橋 淳一, 山本 雅之, 岡田 克典

    移植　53　(総会臨時)　398-398　2018年9月

    出版者・発行元： (一社)日本移植学会

    ISSN： 0578-7947

  3. 肺移植後患者におけるミコフェノール酸モフェチル血中濃度測定の検討

    矢吹 皓, 船橋 淳一, 岡田 克典, 渡邉 龍秋, 菊地 正史, 野津田 泰嗣, 新井川 弘道, 松田 安史, 野田 雅史, 桜田 晃, 星川 康

    Organ Biology　23　(2)　141-144　2016年

    出版者・発行元： 一般社団法人 日本臓器保存生物医学会

    ISSN： 1340-5152

    eISSN： 2188-0204

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    Mycophenolate mofetil (MMF) has been used as a standard immunosuppressive agent after lung transplantation. MMF is rapidly metabolized to active constituent, mycophenolic acid (MPA), after intake. Gastrointestinal side- effects and leukocytopenia are common adverse effects of MMF. Although, therapeutic drug monitoring (TDM) for calcineurin inhibitors is widely used, the role of TDM for MPA is unclear in lung transplantation. We investigated the correlation among the blood concentration of MPA, the dosage of MMF and the number of leukocyte in lung transplant recipients. The correlation coefficient between the blood concentration of MPA and the dosage of MMF was not significant, so MMF might require TDM. On the other hand, neither the correlation coefficients between the number of leukocyte and the blood concentration of MPA nor the correlation coefficients between the number of leukocyte and the dosage of MMF were not significant. Further investigation is necessary to find the meanings of TDM for MPA after lung transplantation.

  4. Electroporation: Past, present and future 査読有り

    Harukazu Nakamura, Junichi Funahashi

    Development Growth and Differentiation　55　(1)　15-19　2013年1月

    DOI： 10.1111/dgd.12012 　

    ISSN： 0012-1592 1440-169X

  5. Gain- and loss-of-function in chick embryos by electroporation

    H Nakamura, T Katahira, T Sato, Y Watanabe, J Funahashi

    MECHANISMS OF DEVELOPMENT　121　(9)　1137-1143　2004年9月

    DOI： 10.1016/j.mod.2004.05.013 　

    ISSN： 0925-4773

  6. ニワトリ胚中脳の吻尾極性に関わる遺伝子カスケードの解析

    舟橋 淳一, 杉山 清佳, 原 知永, 仲村 春和

    日本分子生物学会年会プログラム・講演要旨集　19　673-673　1996年8月1日

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講演・口頭発表等 15

  1. iPS細胞から肺を作る；内胚葉と中胚葉の共培養

    舟橋 淳一, 岡田 克典

    第44回日本分子生物学会年会　2021年12月2日

  2. Making Lung form human iPS cells; Part 1, endoderm

    舟橋 淳一

    Joint Annual Meeting of 70th JSCB and 51st JSDB　2018年6月8日

  3. Time-lapse imaging system with shell- less culture chamber 国際会議

    舟橋 淳一

    7th International Chick meeting　2012年11月16日

  4. ゼブラフィッシュ三半規管形成に必須な SOX5 の機能

    舟橋 淳一

    第 44 回日本発生生物学会年会　2011年5月20日

  5. 三半規管形成機構におけるSox5の機能解析

    谷野 俊平, 阿部 玄武, 川上 浩一, 仲村 春和, 舟橋 淳一

    BMB2010　2010年12月10日

  6. 共焦点三次元タイムラプス・イメージング

    舟橋 淳一

    日本発生生物学会第 43 回大会　2010年6月23日

  7. 三次元タイムラプスで観るゼブラフィッシュ内耳の形態形成

    舟橋 淳一, 川上 浩一, 仲村 春和

    第115回日本解剖学会総会・全国学術集会　2010年3月30日

  8. ゼブラフィッシュ三半規管の形態形成における Sox5 の役割

    谷野 俊平, 阿部 玄武, 川上 浩一, 仲村 春和, 舟橋 淳一

    第３２回日本分子生物学会年会　2009年12月10日

  9. 内耳で GFP を発現するゼブラフィッシュ系統を用いた変異系統の形態形成異常の解析

    舟橋 淳一, 岡本 仁, 川上 浩一, 仲村 春和

    BMB2008　2008年12月11日

  10. 遺伝子トラップ系統を用いたゼブラフィッシュ三半規管形態形成の解析

    舟橋淳一, 川上浩一, 仲村春和

    第３０回に本分子生物学会年会　2007年12月11日

  11. 三次元タイムラプスによるゼブラフィッシュ三半規管形態形成の解析

    舟橋淳一, 川上浩一, 村春

    第13回小型魚類研究会　2007年9月16日

  12. 遺伝子トラップ系統を用いたゼブラフィッシュ三半規管形態形成の解析

    ○Jun-ichi Funahashi, Koichi Kawakami, Harukazu Nakamura

    第40回日本発生生物学　2007年5月28日

  13. 三半規管形成に異常を示すゼブラフィッシュ突然変異体galleryとBMPシグナルについて

    小又 尉広, 野島 康弘, 中山 里実, 岡本 仁, 仲村 春和, 舟橋 淳一

    第３９回日本発生生物学会大会　2006年5月31日

  14. 三半規管発生の組織学的検討

    小林 友理子, 仲村 春和, 舟橋 淳一

    第３９回日本発生生物学会大会　2006年5月31日

  15. ニワトリ胚神経系に発現する2E1d遺伝子の機能の解析

    小谷 徳生, 仲村 春和, 舟橋 淳一

    第３９回日本発生生物学会大会　2006年5月31日

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共同研究・競争的資金等の研究課題 16

  1. 胚葉間の相互作用を意識した、ヒトiPS細胞由来の肺類器官(肺様体)培養法の開発

    舟橋 淳一

    提供機関：Japan Society for the Promotion of Science

    制度名：Grants-in-Aid for Scientific Research

    研究種目：Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

    研究機関：Tohoku University

    2019年4月1日 ～ 2022年3月31日

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    これまでのiPS細胞から様々な臓器を作り出そうという研究には、臓器構築には内胚葉由来の上皮細胞だけでなく、中胚葉由来の組織も必要であるという観点が欠落していた。そこでまず、iPS細胞から中胚葉へと分化誘導した細胞（間充織前駆細胞）を得た。これとは別に同じiPS細胞から内胚葉を誘導し、さらに未熟な段階のorganoidまで分化させた。続いて、間充織前駆細胞をMatrigel中に分散させ、内胚葉由来のorganoidをその中に包埋することで共培養を行った結果、内胚葉由来organoidを単独でMatrigelに包埋した場合と比較して、肺organoidの形態形成が促進されるという結果を得た。

  2. 脊椎動物内耳・三半規管の形態形成機構の解析

    舟橋 淳一

    提供機関：Japan Society for the Promotion of Science

    制度名：Grants-in-Aid for Scientific Research

    研究種目：Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

    研究機関：Tohoku University

    2009年 ～ 2011年

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    脊椎動物の内耳の三半規管は、その機能と形態が密接に結びついているため、生き物の形づくりの仕組みを研究する対象として非常に魅力的な器官である。本課題では、ニワトリとゼブラフィッシュをモデル生物として用いて、それぞれの利点を最大限に利用しつつ、細胞レベルと組織レベルでの研究を最新の画像解析技術などを駆使して行うとともに、三半規管の形づくりに関わる遺伝子のクローニングと機能解析も進めてきた。そして、Sox5という遺伝子が、三半規管の形づくりに非常に重要な働きをしている事をつきとめた。

  3. 中脳視蓋の層形成と回路形成機構の解析

    仲村 春和, 舟橋 淳一, 渡邉 裕二, 尾身 実

    提供機関：Japan Society for the Promotion of Science

    制度名：Grants-in-Aid for Scientific Research

    研究種目：Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

    研究機関：Tohoku University

    2005年 ～ 2009年

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    視蓋は鳥類以下の脊椎動物の視覚の中枢で、視神経線維の位置特異的な投射を受ける。視蓋の位置特異性の決定に関して、視蓋で、耳側網膜からの線維を反発するEphrinA2とA5を指標にして解析したところ、視蓋、小脳のオーガナイザーとして働くFgf8が大きな役割を果たすこと、しかしその細胞内シグナルトランスダクションは異なっていること明らかになった。また、神経線維の新しいトレース法を考案し、その方法で視神経線維をラベルした結果、胚時期の一過的なものではあるが、今まで報告のない新しい網膜視蓋投射経路が見つかった。

  4. 脊椎動物内耳・三半規管の形態形成機構の解析

    舟橋 淳一

    提供機関：Japan Society for the Promotion of Science

    制度名：Grants-in-Aid for Scientific Research

    研究種目：Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

    研究機関：Tohoku University

    2006年 ～ 2007年

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    脊椎動物の内耳背側にある三半規管は、その三次元的構造と機能が密接に結びついているうえ、脊椎動物の種に関わらず基本的な形態が共通しているので、形態形成機構の解析のモデル系として魅力的な器官である。この研究計画では、この三半規管の形態形成のメカニズムの一端を、複数のモデル動物を使って明らかにする事を目指した。 ニワトリ胚の三半規管の形態形成について、免疫組織科学による詳細な解析を行った結果、これまでの定説とは異なり、上皮間充織転換が重要な役割を果たしている可能性が示された。 ゼブラフィッシュ三半規管形成は耳胞内部へ上皮が前方、側方、後方、腹側の4カ所から突出する事で始まる。研究代表者らが同定した変異系統galleryでは、これらの突出のうち側方のみしか形成されない。この原因遺伝子のマッピングを進め、20年度中にはポジショナルクローニングが出来る目処が立った。原因遺伝子が同定できれば、突出形成のメカニズム解明の糸口になると期待される。 いっぽう、国立遺伝学研究所の川上浩一博士との共同研究で同定された、耳胞の上皮突出の先端でGFPを発現するトランスジェニック魚について、3Dタイムラプス解析を行うとともに、Gal4が挿入された遺伝子領域の同定を行い、遺伝子のクローニングを行った。得られた遺伝子は既知の遺伝子ではあったが、これまで知られていたスプライシング型とは異なり、より上流に位置するエクソンを使っていた。既知のスプライシング型と今回同定されたスプライシング型では、胚における発現パターンが異なる可能性があり、現在確認中である。今後、このスプライシング型を特異的にノックダウンする事などにより、内耳の形態形成における役割を探って行くことで、今まで知られていなかったこの遺伝子の機能が明らかになることが期待出来る。

  5. 脊椎動物内耳の形態形成機構の解析

    舟橋 淳一

    2004年 ～ 2005年

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    ニワトリ胚を用いた解析 【FRET】三半規管形成過程にプログラム細胞死がどの程度寄与するかを明らかにするため,in ovoでFRET法を用いたcaspase-3活性化のリアルタイム検出を行うシステムを開発してきた.ドナーとアクセプターはMiCi-mKOの組み合わせが最も有望である.また蛍光実体鏡の代わりに正立顕微鏡で低倍率の対物レンズを使用しタイムラプス撮影を行うべく装置の調整中である. 【器官培養】内耳原基(上皮のみ)の器官培養系で半規管形成過程に関わる因子の解析を行った.間充織細胞の増殖や細胞外基質の増加による機械的な圧力を考慮し,ガラスビーズを用いて耳胞に圧力を加えながらの培養を試みたり,間充織から分泌される因子の影響を仮定し,FGFあるいはヒアルロン酸でコートしたガラスビーズを用いてみたが,半規管形成には至らなかった. 【Gbx2-Otx2の相互作用と蝸牛神経節形成】転写制御因子の領域形成への関与を知るため,正常内耳では相補的に発現するGbx2とOtx2を異所的に発現させて,その影響を見た.Gbx2を異所的に発現させるとOtx2の発現は抑制され,逆にOtx2を異所的に発現させると,Gbx2の発現が抑制された.さらに,正常胚では耳胞の腹側部にGbx2もOtx2も発現しない部位が存在し,ここではFgf10が発現しているが,Gbx2あるいはOtx2の異所的な発現により,このFgf10の発現が抑制され,その部位から生ずる蝸牛神経節の形成も抑制された.またFgf10を耳胞で異所的に発現させたところ,その外側に異所的に神経節が形成された. ゼブラフィッシュミュータントを用いた解析 ゼブラフィッシュの半規管形成過程に異常を生ずるミュータントを一昨年度に4系統分離し,表現型の解析と合わせ,原因遺伝子の同定が進行中である.

  6. 視蓋・小脳の領域化及び網膜視蓋投射機構のメカニズム

    仲村 春和, 舟橋 淳一, 渡邉 裕二, 片平 立矢, 佐藤 達也

    提供機関：Japan Society for the Promotion of Science

    制度名：Grants-in-Aid for Scientific Research

    研究種目：Grant-in-Aid for Scientific Research (A)

    研究機関：Tohoku University

    2003年 ～ 2005年

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    本研究プロジェクトが立ち上がる前に強いオーガナイザーとして働くFgf8の強いシグナルは小脳分化を誘導するということが分かっていたが、本プロジェクトの過程で小脳分化にはFgf8がRas-EFKシグナル経路を活性化することが明らかとなった。すなわち、ドミナントネガティブ型のRas (DN-Ras)をエレクトロポレーション法により、中脳_後脳部に強制発現すると後脳胞の発生運命が中脳に変わり、後脳部では小脳に変わって視蓋が分化する。 さらに、Fgf8と重複して発現し、Fgf8によりその発現も誘導されるSpr out y2の解析を行った。Spr out y2はFgf8によりその発現が迅速に誘導されること、Ras-EFKキナーゼ経路の負の制御因子として働くことが示された。またSpr out y2を強制発現すると、DN-Rasの強制発現同様Ras-EFKシグナル経路の活性化が抑制され、後脳胞の発生運命が中脳化することが分かった。さらにドミナントネガティブ型のSpr out y2の強制発現と併せて考えると、Ras-EFKシグナル系は非常に強いシグナルであり、細かい制御が必要であるということを示唆していると思われる。実際、Ras-EFKシグナルが強すぎると中脳後脳境界は前により、弱すぎると後によることになる。 今後の課題としては小脳分化にはRas-EFKシグナルの下流でどのような転写因子が活性化されるかということ、視蓋の分化にはどのようなシグナル系が活性化されるかということであろう。

  7. 峡部オーガナイザー形成のメカニズム

    仲村 春和, 舟橋 淳一, 片平 立矢

    2004年 ～ 2004年

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    Fgf8bをニワトリ胚後脳胞〜間脳胞に強制発現させると、Ras-ERKシグナル伝達系が活性化されて中脳胞の発生運命が変わり、小脳として分化する。この際導入したFgf8が直接オーガナイザーとして働いたのか、胚でオーガナイザーの再編が起こっているかを検証した。そのため、マウスFgf8をエレクトロポレーションによりニワトリ胚の後脳胞〜間脳胞に強制発現させ、ニワトリFgf8に特異的なプローブ、マウスFgf8に特異的なプローブを用いてin situハイブリダイゼイションを行い、導入したFgf8,胚のFgf8の発現を時間を追って調べた。その結果、胚の中でオーガナイザーの再編が起こり、最終的に胚の遺伝子によるFgf8がオーガナイザーとして働くことが明らかとなった。このオーガナイザーの再編にはOtx2,Gbx2,Limx1b, Wnt1,Fgf8の相互作用が大きく関与している。 Fgf8がRas-ERKシグナル伝達系を活性化することにより小脳が誘導されるが、その際Ras-ERKシグナルの負の調節因子であるSprouty2が直ちに誘導され、シグナルの流れを適度に調節していることを示した。Sprouty2およびドミナントネガティブ型のSprouty2の強制発現により次のことが明らかとなった。すなわちRas-ERKシグナルが流れすぎると中脳後脳境界が頭側により、Sprouty2により抑制されると尾側によって本来小脳として分化する後脳胞背側は視蓋として分化するようになる。このような領域の運命を調節するシグナルの量は厳密に調節される必要があり、峡部でもSprouty2に加えて、sef, Mkpといった負の調節因子により、2重3重に調節されているようである。

  8. 形態生成機構の基本原理の解明を目指した,ニワトリ三半規管の発生機構の解析

    舟橋 淳一

    2002年 ～ 2003年

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    1)ニワトリ胚内耳原基での細胞トレーシング (1)deRedの利用 生体での透過率の高い波長域(赤色)の蛍光タンパク質の発現ベクターの利用により,検出感度を高めた.耳胞が閉じる前の発生段階で遺伝子導入して,半規管の形成の最初のステップであるfuse plateの伸長が始まる時期までの細胞の移動が観察できるようになった. (2)fgf10エンハンサー 形態形成は細胞の増殖や移動,細胞死などの現象が密接に関わりながら進行するので,遺伝子の発現パターンを解析する場合,その遺伝子を発現している細胞が移動するのか,移動せずに発現のレベルが変化するのかを区別する必要がある。そこで,マウスfgf10遺伝子の耳特異的な発現制御領域をdsRed遺伝子に繋いだ発現ベクターを構築してエレクトロポレーションを行い,その発現パターンを同一個体中で継時的に観察記録する系を確立した. 2)ゼブラフィッシュ胚の耳胞の形態形成機構の解析 (1)タイムラプス解析 ゼブラフィッシュは発生初期では胚が透明なため,内耳の形態形成過程を継時的に観察しやすい.三半規管に関して言えば,ニワトリ胚と相似の過程をたどると考えられ,これまでの知見を十分に生かす事が出来ると期待される.そこで三半規管形成期のタイムラプス解析を行う系を確立した. (2)ミュータントのスクリーニング 三半規管の形態形成に異常のあるミュータントのスクリーニングを行い,7系統を分離した.その内の一つでは,三半規管のうち側半規管のみが形成されることを明らかにした.これは三つの半規管の形成がそれぞれ独立に制御されることを示唆し,興味深い. 3)共同研究 Six1ノックアウトマウスの内耳形態形成の異常の表現系をPaint-fillにより解析し,単に腹側の構造が失われるだけでなく,正常胚に比べ内リンパ管と内リンパ嚢が極端に拡大していることを明らかにした.

  9. 視蓋の誘導・位置特異性決定の分子機構

    仲村 春和, 佐藤 達也, 渡邉 裕二, 舟橋 淳一, 荒木 功人

    1998年 ～ 2003年

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    1.これまで、ニワトリ胚での遺伝子発現阻害実験は困難であったが、標的遺伝子とマッチする21ベースのヘアピン型RNA発現ベクターをエレクトロポレーションにより導入することによって可能となった。現在、この方法を用いて視蓋の領域形成のさらなる解析を行っている。 2.中脳胞領域でEnによりその発現が抑制される遺伝子のスクリーニングの過程でcHes5が単離された。,cHes5は中脳胞前側で強く発現しており、En2の発現の強い峡部ではその発現が見られない。実際En2によりcHes5の発現は抑制された。またEn2に対するsiRNAを導入し、En2の発現を抑制すると、峡部でcHes5の発現が誘導されたことから、cHes5は視蓋の極性形成に関与している可能性が示唆された。 3.同じくEnにより発現が抑制される遺伝子としてb2-chimerinが単離された。これも中脳胞領域で興味深い発現をしているので現在機能解析を続けている。 4.ゼブラフィシュでislet3によりその発現が制御され、峡部オーガナイザー活性と関係のある分子としてcanopyファミリーが同定された。ニワトリ胚のCanopy遺伝子の単離を試み、canopy2が得られた。Canpy2は中脳胞前域をカバーするように発現していることから、エレクトロポレーションにより現在その解析を進めている。 6年間の研究期間を通じて、中脳、後脳の領域形成のメカニズムの理解が深まったが、3,4のようにこれからの課題もできたのでさらに研究を展開していく心づもりである。

  10. オーガナイジングシグナルと視蓋・小脳分化のコンピテンス

    仲村 春和, 佐藤 達也, 渡邉 裕二, 舟橋 淳一, 木村 淳, 杉山 清佳

    提供機関：Japan Society for the Promotion of Science

    制度名：Grants-in-Aid for Scientific Research

    研究種目：Grant-in-Aid for Scientific Research (B)

    研究機関：Tohoku University

    2001年 ～ 2002年

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    中脳胞背側は視蓋へと分化し、後脳胞背側は小脳へと分化する。視蓋と小脳ではその構造、分化様式は全く異なるが,両者は峡部で境を接しており,峡部からのオーガナイジングシグナルによって分化する。オーガナイジングシグナルとしてFgf8が有力視されている。同じオーガナイジングシグナルを受け取って、どうして中脳胞では視蓋が、後脳胞では小脳が分化するかということは非常に興味深い。 Fgf8にはスプライシングの違いにより8つのイソフォームが存在するが、峡部ではFgf8aとFgf8bが発現している。そこで、Fgf8aとFgf8bを強制発現させたところ、Fgf8aでは間脳胞に視蓋が誘導されるが、Fgf8bの場合は中脳胞の背側がすべて小脳へと分化した。定量的な実験の結果、このFgf8aとFgf8bの違いはシグナルの強弱に帰し、強いFgf8シグナルを受け取るところが小脳として分化することを明らかにした。 強いFgf8シグナルによりどのような細胞内シグナル伝達系が活性化されるかの研究を行った。Ras-ERKシグナル経路に着目し、活性化ERKに対する抗体による活性化ERKの分布をみると、Fgf8mRNAの発現している領域でERKは燐酸化されていた。ドミナントネガティブ型のRasを強制発現すると、後脳胞はその発生運命を変え、小脳ではなく、視蓋として分化した。Fgf8bとドミナントネガティブ型Rasの共発現ではFgf8bの効果はうち消されたが、Fgf8aとの共発現では相乗的な効果が得られた。このことはRas-ERK経路はFgf8bの下流で活性化され、Fgf8aの下流ではないことを示唆している。 これらのことより、Fgf8の強いシグナルにより、Ras-ERKシグナル経路が活性化されると小脳分化に働くこと、視蓋の分化には別のシグナルトランスダクションシステムが活性化されることが示唆された。

  11. 形態形成機構の基本原理の解明を目指した,ニワトリに内耳の発生機構の解析

    舟橋 淳一

    2001年 ～ 2001年

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    ●ニワトリ胚内耳原基への遺伝子導入法の開発 細胞トレーシングのためにGFP遺伝子を内耳原基である耳胞へ導入する必要がある.このため局所導入エレクトロポレーションを応用し,耳胞へGFP遺伝子を導入した.その結果,継時的に蛍光を観察することに成功した.さらにエレクトロポレーションの条件を検討し,導入効率は約20%程までに高まった.トレーシングには十分な値である. ●耳胞(蝸牛)の発生運命系譜の解明 蛍光色素の注入による細胞系譜のトレースを行った結果,予定リンパ管領域は,過去の報告より広いことが明らかになった.今後解析を進めることで,さらに詳しい細胞系譜が書けると期待できる. ●長期間のトレース 一般にエレクトロポレーションには一過性の発現ベクターが用いられるが,本課題の目的には,より長期間にわたって導入遺伝子の発現が持続する系が必要である.そこで,次の二つの改良を行った.一つは,導入するGFP自体の細胞に対する毒性を下げることで,汎用されるEGFPの代わりに,ウミシイタケ由来のphrGFPを用いた.第2はベクターの変更である.プラスミドベクターに換えて,ニワトリレトロウィルスベクターにphrGFPを組み込み,エレクトロポレーションすることにした.これらにより,長期間にわたり安定したGFPの発現を観察し続けることが出来るようになった.現時点で,導入後最長7日後までGFPの蛍光が観察できている.

  12. 視蓋発生における遺伝子ネットワークの研究

    仲村 春和, 荒木 功人, 舟橋 淳一

    1997年 ～ 1997年

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    視覚の中枢である中脳視蓋の位置特異性の形成にEn遺伝子が重要な役割を果たすことが我々の研究により示されたが、本研究では視蓋発生におけるEnを中心とした遺伝子発現制御のカスケードを追究した。in ovoエレクトロポレーション法によりニワトリ胚に極めて高率に外来遺伝子を発現させることができるようになった。 中脳胞後ろ側で強く発現する遺伝子のスクリーニングの過程でPax-2,Pax-5遺伝子がクローニングされた。in ovoエレクトロポレーションによりPax-5を異所的に発現させると、視蓋は前の方に伸びまた至るところで小さな膨らみが見られた。Pax-5の異所的発現部位ではEn-2,Wnt-1,Fgf8遺伝子の発現が誘導され、Otx2遺伝子の発現は抑制された。Fgf8とPax-5の関係を見るつもりでFgf8を異所的に発現させると、Pax-5の発現が誘導された。Fgf8には視蓋の誘導作用があることが示されているので、Fgf8とPax-5は相互に作用しつつ視蓋の誘導に働いていることが示唆された。 Pax-2はPax-5とサブファミリーをなす遺伝子であるが、これを異所的に発現させると、視蓋の前の方への伸びはPax-5よりも大きかったが、Fgf8の誘導は間脳部でしかおこらず、Otx-2の抑制もなかった。2つの遺伝子は重複して機能している可能性が高いが、Pax2は視蓋の誘導に大きく働き、Pax-2が視蓋の維持と極性形成により重要だろうと考えられた。

  13. 網膜視蓋投射形成の分子機構

    仲村 春和, 荒木 功人, 舟橋 淳一

    1997年 ～ 1997年

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    ニワトリの視覚の中枢は中脳視蓋であるが、的確な回路が形成されるためにまず視蓋としてのコンパートメントが決定され、その中での位置特異性が決定される必要がある。視蓋の後ろとしての位置特異性の形成にEn遺伝子が重要な役割を果たすことを示したが、本研究は視蓋発生においてEnを中心とした遺伝子発現制御のカスケードを明らかにする目的で行われた。 中脳後脳境界部から中脳胞後ろにかけて強く発現しているPax-5遺伝子のcDNAがクローニングされた。これを発現ベクターpMiwに組み込みin ovoエレクトロポレーションで視蓋原基から間脳胞まで異所的に発現させると、視蓋が前の方まで膨らみ、中脳部では至るところで小さな膨らみが見られた。Pax-5の発現部位でEn-2,Wnt-1遺伝子の発現が誘導された。興味深いことに視蓋の誘導に働くことが示されているFgf-8遺伝子の発現も誘導した。このことよりPax-5遺伝子は視蓋発生でかなり上位のヒエラルキーにある遺伝子だということができる。Fgf8とPax-5相互の関係を調べる目的で、Fgf8を異所的に発現させると、Pax-5が誘導された。また後の発生段階で視蓋後ろに限局して発現し、耳側網膜繊維を反発することによって視神経の標的選択に関与している分子Elf-1の発現もPax-5により誘導された。前脳から中脳後脳境界部まで発現しているOtx2の発現は抑制した。 これらの結果よりPax-5はその下流の遺伝子の発現を誘導することにより視蓋のorganizing centerで大きな役割を果たす遺伝子だということが示唆された。

  14. ニワトリ胚中脳の吻尾極性形成に関わる遺伝子カスケードの解析

    舟橋 淳一

    1996年 ～ 1996年

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    本研究では,ニワトリ胚の中脳(視蓋)における吻尾極性形成に関わる遺伝子発現調節のカスケードの解析を,強制発現系を用いて行った.当初はレトロウィルスベクターを使用していたが,期待したほどの発現が得られなかったため,本年度の後半から別の方法を検討した結果,in ovoエレクトロポレーションが有効であることを見いだした.そこでPax-5あるいはEn-2, FGF8の強制発現ベクターをエレクトロポーレーションにより孵卵2日目のニワトリ胚の中脳に導入して,それぞれが他の遺伝子の発現に及ぼす影響を見た.この結果,(1)Pax-5は同一の細胞内でFGF8の発現を誘導すること,(2)さらにPax-5はEn-2の発現も誘導するが,その範囲はより広い領域にわたり,可溶性のFGF8タンパクが拡散しその影響により発現が誘導されたと考えられること,(3)同様にPax-5はWnt-1の発現も誘導するが,その発現パターンから,FGF8の発現を介さず,単一の細胞内での遺伝子間の相互作用による誘導である可能性が高いこと,(4)逆にFGF8もPax-5の発現を誘導することを見いだした.En-2の強制発現による影響に関しては現在検討中である.これらの事実はショウジョウバエにおける遺伝子カスケードが必ずしも脊椎動物では保存されておらず,より複雑なネットワークを作っていることを示すものである.またここで取り上げた遺伝子は全て中脳の尾側から後脳の吻側にかけて峡部(isthmus)を中心にして発現しているが,単純にどの遺伝子がカスケードの最上部に位置するとは結論づけられず,別のより上位の因子の存在を仮定するか,別の位置情報を与えるメカニズムを仮定する必要があることをも示していて興味深い.

  15. 網膜視藍投射形成の分子機構

    仲村 春和, 船橋 淳一

    1996年 ～ 1996年

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    網膜視藍投射が正確に行われるために、網膜、視藍それぞれが発生の初期に位置特異性を獲得し、それぞれ対応するもの同士でシナプスを形成すると考えられる。一方、網膜耳側の線維は視藍尾側の膜成分に反発される、それにはEphタイプの膜受容体型チロシンキナーゼのリガンド-レセプターのシステムが関与しているらしいことがわかってきた。我々の研究でenが視藍に尾側としての位置特異性を付与することが示されている。本年度は、視藍の吻尾軸に沿った位置特異性獲得過程での遺伝子発現制御のカスゲ-ドと、視藍に発現しているEph型チロシンキナーゼのリガンドであるElf-やRAGSがenの支配下にあるかどうかに焦点を当てて実験を行った。 レトロウイルスペクターにen-2を組み込みE2胚で強制発現させると、en-2の異所的発現部位で、Elf-, RAGSの発現が誘導された。enを強制発現させると、耳側網膜線維が視藍に侵入できないことがあるが、これはenによりElf-1やRAGSが誘発されたためだと考える。 レトロウイルスによるen-2の強制発現で、間脳部にwnt-1の発現が誘導された。またwnt-1産生細胞を脳胞壁に埋め込むと、間脳の前端で終脳に近いところで、en-2の発現が誘導された。このことはショウジョウバエでのen/wnt-1の相互作用がニワトリ神経系の発生においても保存されていることを示しており興味深い。

  16. 網膜視蓋投射形成の分子機構

    仲村 春和, 舟橋 淳一

    1995年 ～ 1995年

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    視蓋の吻尾極性の形成にはengrailed(en)遺伝子が重要な働きをしていることが、我々の研究により明らかにされている。本研究ではenを中心とする遺伝子発現制御のカスケードを明らかにする目的で中脳胞(視蓋原基)の吻側、尾側それぞれのcDNAライブラリーを作製し、サブトラクション法によりそれぞれで特異的な発現する遺伝子をクローニングし、レトロウイルスベクターを用いた強制発現法によりen遺伝子との関係を追究した。 サブトラクションにより、中脳後脳境界部で発現している遺伝子としてpax-5がクローニングされた。pax-5遺伝子は孵卵2日目(E2)で10体節期頃には中脳後脳境界部に発現しており、E4では中脳後脳境界部で強く、前の方に向かうに従って弱いという勾配を持って発現している。en-2の発現と重なるような発現パターンであるが、発現の開始はen-2の方がちょっと早い。pax-5はショウジョウバエのペアルール遺伝子pairedと相同な遺伝子であり、ショウジョウバエでのヒエラルキーではenよりも上位にあると思われる。そこでpax-5をRCASレトロウイスルベクターに組み込み強制発現させて、enの発現パターンを調べてみた。pax-5を強制発現させた後、en-2の発現を抗en抗体による免疫染色で、pax-5の発現をin situハイブリダイゼイションで検出した。おもにwhole mountによる染色を行った。 レトロウイルスによる強制発現により視蓋原基の前の方でもパッチ状に強く発現しているところが見られた。pax-5を異所的に強制発現させられた一部の細胞でenの異所的な発現が見られた。enの異所的発現は間脳の背側の一部の細胞で見られた。ここではいくつかの細胞がpax-5,en-2両遺伝子ともに発現していた。この実験結果はpax-5はen-2を発現させるよう促進的に働く因子であることを示している。ただし、pax-5を発現したすべての細胞がen-2を発現したわけではないのでen-2の発現にはpax-5とさらに別の制御因子が働く必要があることを示唆している。

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