Details of the Researcher

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Junichi Funahashi
Section
Institute of Development, Aging and Cancer
Job title
Associate Professor
Degree

  • Ph D (Nagoya University)

Education 1

  • Nagoya University　Graduate School, Division of Natural Science　分子生物学

    - 1993/09/30

Professional Memberships 2

  • THE MOLECULAR BIOLOGY SOCIETY OF JAPAN

  • JAPANESE SOCIETY OF DEVELOPMENTAL BIOLOGISTS

Research Areas 1

  • Life sciences / Developmental biology / Developmental Biology

Papers 35

  1. Prognostic impact of LILRB4 expression on tumor‐infiltrating cells in resected non‐small cell lung cancer Peer-reviewed

    Sakiko Kumata, Hirotsugu Notsuda, Mei‐Tzu Su, Ryoko Saito‐Koyama, Ryota Tanaka, Yuyo Suzuki, Junichi Funahashi, Shota Endo, Isao Yokota, Toshiyuki Takai, Yoshinori Okada

    Thoracic Cancer　14　(21)　2057-2068　2023/06/08

    Publisher: Wiley

    DOI： 10.1111/1759-7714.14991 　

    ISSN： 1759-7706

    eISSN： 1759-7714

  2. 肺移植後閉塞性細気管支炎に対するCTLA4-Igの線維性閉塞抑制効果の検討 マウス肺内気管移植モデルを用いて

    鈴木 大和, 大石 久, 兼平 雅彦, 渡辺 有為, 野津田 泰嗣, 平間 崇, 鈴木 隆哉, 松田 安史, 佐渡 哲, 野田 雅史, 舟橋 淳一, 桜田 晃, 岡田 克典

    移植　55　(4)　498-498　2021/03

    Publisher: (一社)日本移植学会

    ISSN： 0578-7947

    eISSN： 2188-0034

  3. 肺移植後閉塞性細気管支炎に対するCTLA4-Igの線維性閉塞抑制効果の検討 マウス肺内気管移植モデルを用いて

    鈴木 大和, 大石 久, 兼平 雅彦, 渡辺 有為, 野津田 泰嗣, 平間 崇, 鈴木 隆哉, 松田 安史, 佐渡 哲, 野田 雅史, 舟橋 淳一, 桜田 晃, 岡田 克典

    移植　55　(4)　498-498　2021/03

    Publisher: (一社)日本移植学会

    ISSN： 0578-7947

    eISSN： 2188-0034

  4. 当科における病理病期I期非小細胞肺癌の術後再発症例と外来経過観察の至適期間についての検討

    小塩 弘樹, 野津田 泰嗣, 早坂 一希, 熊田 早希子, 山田 剛裕, 阿部 皓太郎, 鈴木 大和, 田中 遼太, 平間 崇, 渡辺 有為, 江場 俊介, 鈴木 隆哉, 大石 久, 佐渡 哲, 野田 雅史, 舟橋 淳一, 桜田 晃, 岡田 克典

    日本呼吸器外科学会雑誌　34　(3)　MO14-3　2020/08

    Publisher: (NPO)日本呼吸器外科学会

    ISSN： 0919-0945

    eISSN： 1881-4158

  5. 診断未確定の肺部分すりガラス状結節への肺葉切除実施の妥当性について

    小塩 弘樹, 野津田 泰嗣, 早坂 一希, 熊田 早希子, 山田 剛裕, 阿部 皓太郎, 鈴木 大和, 田中 遼太, 平間 崇, 渡辺 有為, 江場 俊介, 鈴木 隆哉, 大石 久, 佐渡 哲, 野田 雅史, 舟橋 淳一, 桜田 晃, 岡田 克典

    日本呼吸器外科学会雑誌　34　(3)　MO26-8　2020/08

    Publisher: (NPO)日本呼吸器外科学会

    ISSN： 0919-0945

    eISSN： 1881-4158

  6. 当科における病理病期I期非小細胞肺癌の術後再発症例と外来経過観察の至適期間についての検討

    小塩 弘樹, 野津田 泰嗣, 早坂 一希, 熊田 早希子, 山田 剛裕, 阿部 皓太郎, 鈴木 大和, 田中 遼太, 平間 崇, 渡辺 有為, 江場 俊介, 鈴木 隆哉, 大石 久, 佐渡 哲, 野田 雅史, 舟橋 淳一, 桜田 晃, 岡田 克典

    日本呼吸器外科学会雑誌　34　(3)　MO14-3　2020/08

    Publisher: (NPO)日本呼吸器外科学会

    ISSN： 0919-0945

    eISSN： 1881-4158

  7. 診断未確定の肺部分すりガラス状結節への肺葉切除実施の妥当性について

    小塩 弘樹, 野津田 泰嗣, 早坂 一希, 熊田 早希子, 山田 剛裕, 阿部 皓太郎, 鈴木 大和, 田中 遼太, 平間 崇, 渡辺 有為, 江場 俊介, 鈴木 隆哉, 大石 久, 佐渡 哲, 野田 雅史, 舟橋 淳一, 桜田 晃, 岡田 克典

    日本呼吸器外科学会雑誌　34　(3)　MO26-8　2020/08

    Publisher: (NPO)日本呼吸器外科学会

    ISSN： 0919-0945

    eISSN： 1881-4158

  8. Targeted disruption of the mouse protein phosphatase ppm1l gene leads to structural abnormalities in the brain Peer-reviewed

    Rie Kusano, Kousuke Fujita, Yasuharu Shinoda, Yuko Nagaura, Hiroshi Kiyonari, Takaya Abe, Toshio Watanabe, Yasuhisa Matsui, Masahiro Fukaya, Hiroyuki Sakagami, Tatsuya Sato, Jun-ichi Funahashi, Motoko Ohnishi, Shinri Tamura, Takayasu Kobayashi

    FEBS LETTERS　590　(20)　3606-3615　2016/10

    DOI： 10.1002/1873-3468.12429 　

    ISSN： 0014-5793

    eISSN： 1873-3468

  9. Inactivation of Sonic Hedgehog Signaling and Polydactyly in Limbs of Hereditary Multiple Malformation, a Novel Type of Talpid Mutant. International-journal Peer-reviewed

    Yoshiyuki Matsubara, Mikiharu Nakano, Kazuki Kawamura, Masaoki Tsudzuki, Jun-Ichi Funahashi, Kiyokazu Agata, Yoichi Matsuda, Atsushi Kuroiwa, Takayuki Suzuki

    Frontiers in cell and developmental biology　4　149-149　2016

    DOI： 10.3389/fcell.2016.00149 　

    More details Close

    Hereditary Multiple Malformation (HMM) is a naturally occurring, autosomal recessive, homozygous lethal mutation found in Japanese quail. Homozygote embryos (hmm-/-) show polydactyly similar to talpid2 and talpid3 mutants. Here we characterize the molecular profile of the hmm-/- limb bud and identify the cellular mechanisms that cause its polydactyly. The hmm-/- limb bud shows a severe lack of sonic hedgehog (SHH) signaling, and the autopod has 4 to 11 unidentifiable digits with syn-, poly-, and brachydactyly. The Zone of Polarizing Activity (ZPA) of the hmm-/- limb bud does not show polarizing activity regardless of the presence of SHH protein, indicating that either the secretion pathway of SHH is defective or the SHH protein is dysfunctional. Furthermore, mesenchymal cells in the hmm-/- limb bud do not respond to ZPA transplanted from the normal limb bud, suggesting that signal transduction downstream of SHH is also defective. Since primary cilia are present in the hmm-/- limb bud, the causal gene must be different from talpid2 and talpid3. In the hmm-/- limb bud, a high amount of GLI3A protein is expressed and GLI3 protein is localized to the nucleus. Our results suggest that the regulatory mechanism of GLI3 is disorganized in the hmm-/- limb bud.

  10. Time-lapse imaging system with shell-less culture chamber Peer-reviewed

    Jun-ichi Funahashi, Harukazu Nakamura

    DEVELOPMENT GROWTH & DIFFERENTIATION　56　(4)　305-309　2014/05

    DOI： 10.1111/dgd.12132 　

    ISSN： 0012-1592

    eISSN： 1440-169X

  11. Role of En2 in the tectal laminar formation of chick embryos Peer-reviewed

    Minoru Omi, Hidekiyo Harada, Yuji Watanabe, Jun-ichi Funahashi, Harukazu Nakamura

    DEVELOPMENT　141　(10)　2131-2138　2014/05

    DOI： 10.1242/dev.102905 　

    ISSN： 0950-1991

    eISSN： 1477-9129

  12. Epithelial-mesenchymal transition as a possible mechanism of semicircular canal morphogenesis in chick inner ear Peer-reviewed

    Yuriko Kobayashi, Harukazu Nakamura, Jun-Ichi Funahashi

    TOHOKU JOURNAL OF EXPERIMENTAL MEDICINE　215　(3)　207-217　2008/07

    DOI： 10.1620/tjem.215.207 　

    ISSN： 0040-8727

    eISSN： 1349-3329

  13. Electroporation in avian embryos Peer-reviewed

    Jun-Ichi Funahashi, Harukazu Nakamura

    Methods in Molecular Biology　461　377-382　2008

    DOI： 10.1007/978-1-60327-483-8_27 　

    ISSN： 1064-3745

  14. Role of Bone morphogenetic protein 4 in zebrafish semicircular canal development. Peer-reviewed

    Omata Yasuhiro, Nojima Yasuhiro, Nakayama Satomi, Okamoto Hitoshi, Nakamura Harukazu, Funahashi Jun-ichi

    Dev Growth Differ　49　(9)　711-719　2007/12

    DOI： 10.1111/j.1440-169X.2007.00964.x 　

    ISSN： 0012-1592

  15. Role of Bone morphogenetic protein 4 in zebrafish semicircular canal development Peer-reviewed

    Yasuhiro Omata, Yasuhiro Nojima, Satomi Nakayama, Hitoshi Okamoto, Harukazu Nakamura, Jun-ichi Funahashi

    DEVELOPMENT GROWTH & DIFFERENTIATION　49　(9)　711-719　2007/12

    DOI： 10.1111/j.1440-169x.2007.00964.x 　

    ISSN： 0012-1592

  16. Cloning and developmental expression of a chick G-protein-coupled receptor SCGPR1 Peer-reviewed

    Noritaka Odani, Samuel L. Pfaff, Harukazu Nakamura, Jun-ichi Funahashi

    GENE EXPRESSION PATTERNS　7　(4)　375-380　2007/02

    DOI： 10.1016/j.modgep.2006.12.003 　

    ISSN： 1567-133X

  17. Dan is required for normal morphogenesis and patterning in the developing chick inner ear. Peer-reviewed

    Yamanishi Takahiro, Katsu Kenjiro, Funahashi Jun-Ichi, Yumoto Eiji, Yokouchi Yuji

    Dev Growth Differ　49　(1)　13-26　2007/01

    DOI： 10.1111/j.1440-169X.2007.00900.x 　

    ISSN： 0012-1592

  18. Dan is required for normal morphogenesis and patterning in the developing chick inner ear Peer-reviewed

    Takahiro Yamanishi, Kenjiro Katsu, Jun-ichi Funahashi, Eiji Yumoto, Yuji Yokouchi

    DEVELOPMENT GROWTH & DIFFERENTIATION　49　(1)　13-26　2007/01

    DOI： 10.1111/j.1440-169x.2007.00900.x 　

    ISSN： 0012-1592

  19. Role of Gbx2 and Otx2 in the formation of cochlear ganglion and endolymphatic duct Peer-reviewed

    Hiromitsu Miyazaki, Toshimitsu Kobayashi, Harukazu Nakamura, Jun-ichi Funahashi

    DEVELOPMENT GROWTH & DIFFERENTIATION　48　(7)　429-438　2006/09

    DOI： 10.1111/j.1440-169x.2006.00879.x 　

    ISSN： 0012-1592

  20. Role of Gbx2 and Otx2 in the formation of cochlear ganglion and endolymphatic duct Peer-reviewed

    Hiromitsu Miyazaki, Toshimitsu Kobayashi, Harukazu Nakamura, Jun-ichi Funahashi

    DEVELOPMENT GROWTH & DIFFERENTIATION　48　(7)　429-438　2006/09

    DOI： 10.1111/j.1440-169x.2006.00879.x 　

    ISSN： 0012-1592

  21. Gain- and loss-of-function in chick embryos by electroporation Peer-reviewed

    H Nakamura, T Katahira, T Sato, Y Watanabe, J Funahashi

    MECHANISMS OF DEVELOPMENT　121　(9)　1137-1143　2004/09

    DOI： 10.1016/j.mod.2004.05.013 　

    ISSN： 0925-4773

  22. Analysis of embryonic motoneuron gene regulation: derepression of general activators function in concert with enhancer factors Peer-reviewed

    SK Lee, LW Jurata, J Funahashi, EC Ruiz, SL Pfaff

    DEVELOPMENT　131　(14)　3295-3306　2004/07

    DOI： 10.1242/dev.01179 　

    ISSN： 0950-1991

  23. Six1 controls patterning of the mouse otic vesicle Peer-reviewed

    H Ozaki, K Nakamura, J Funahashi, K Ikeda, G Yamada, H Tokano, H Okamura, K Kitamura, S Muto, H Kotaki, K Sudo, R Horai, Y Iwakura, K Kawakami

    DEVELOPMENT　131　(3)　551-562　2004/02

    DOI： 10.1242/dev.00943 　

    ISSN： 0950-1991

  24. Role of Pax‐5 in the regulation of a mid‐hindbrain organizer’s activity Peer-reviewed

    Jun‐ichi Funahashi, Tatsuya Okafuji, Hideyo Ohuchi, Sumihare Noji, Hideaki Tanaka, Harukazu Nakamura

    Development Growth and Differentiation　41　(1)　59-72　2002/02

    DOI： 10.1046/j.1440-169X.1999.00401.x 　

    ISSN： 0012-1592

  25. Introduction of DNA into chick embryos by in ovo electroporation

    H Nakamura, J Funahashi

    METHODS　24　(1)　43-48　2001/05

    DOI： 10.1006/meth.2001.1155 　

    ISSN： 1046-2023

  26. Axonal growth of the spinal cord interneurons expressing a homophilic adhesion molecule SC1 ectopically Peer-reviewed

    T Fujii, J Funahashi, R Matsuura, T Izaki, H Nakamura, T Mikawa, H Tanaka

    NEUROSCIENCE RESEARCH　38　(2)　175-181　2000/10

    DOI： 10.1016/S0168-0102(00)00158-9 　

    ISSN： 0168-0102

  27. Misexpression of genes in brain vesicles by in ovo electroporation Peer-reviewed

    H Nakamura, Y Watanabe, J Funahashi

    DEVELOPMENT GROWTH & DIFFERENTIATION　42　(3)　199-201　2000/06

    DOI： 10.1046/j.1440-169X.2000.00501.x 　

    ISSN： 0012-1592

  28. Antagonizing activity of chick Grg4 against tectum-organizing activity Peer-reviewed

    S Sugiyama, J Funahashi, H Nakamura

    DEVELOPMENTAL BIOLOGY　221　(1)　168-180　2000/05

    DOI： 10.1006/dbio.2000.9643 　

    ISSN： 0012-1606

  29. Interaction between Otx2 and Gbx2 defines the organizing center for the optic tectum Peer-reviewed

    T Katahira, T Sato, S Sugiyama, T Okafuji, Araki, I, J Funahashi, H Nakamura

    MECHANISMS OF DEVELOPMENT　91　(1-2)　43-52　2000/03

    DOI： 10.1016/S0925-4773(99)00262-2 　

    ISSN： 0925-4773

  30. Roles of Pax-2 in initiation of the chick tectal development Peer-reviewed

    T Okafuji, J Funahashi, H Nakamura

    DEVELOPMENTAL BRAIN RESEARCH　116　(1)　41-49　1999/08

    DOI： 10.1016/S0165-3806(99)00073-5 　

    ISSN： 0165-3806

  31. Crossregulation between En-2 and Wnt-1 in chick tectal development. Peer-reviewed

    Sugiyama S, Funahashi J, Kitajewski J, Nakamura H

    Development, growth & differentiation　40　(2)　157-166　1998/04

    Publisher: 2

    DOI： 10.1046/j.1440-169X.1998.00005.x 　

    ISSN： 0012-1592

  32. En-2 regulates the expression of the ligands for Eph type tyrosine kinases in chick embryonic tectum Peer-reviewed

    Y Shigetani, J Funahashi, H Nakamura

    NEUROSCIENCE RESEARCH　27　(3)　211-217　1997/03

    DOI： 10.1016/S0168-0102(96)01151-0 　

    ISSN： 0168-0102

  33. THE DELTA-CRYSTALLIN ENHANCER-BINDING PROTEIN DELTA-EF1 IS A REPRESSOR OF E2-BOX-MEDIATED GENE ACTIVATION Peer-reviewed

    R SEKIDO, K MURAI, JI FUNAHASHI, Y KAMACHI, A FUJISAWASEHARA, YI NABESHIMA, H KONDOH

    MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY　14　(9)　5692-5700　1994/09

    DOI： 10.1128/MCB.14.9.5692 　

    ISSN： 0270-7306

  34. DELTA-CRYSTALLIN ENHANCER-BINDING PROTEIN DELTA-EF1 IS A ZINC FINGER-HOMEODOMAIN PROTEIN IMPLICATED IN POSTGASTRULATION EMBRYOGENESIS Peer-reviewed

    J FUNAHASHI, R SEKIDO, K MURAI, Y KAMACHI, H KONDOH

    DEVELOPMENT　119　(2)　433-446　1993/10

    ISSN： 0950-1991

  35. IDENTIFICATION OF NUCLEAR FACTOR DELTA-EF1 AND ITS BINDING-SITE ESSENTIAL FOR LENS-SPECIFIC ACTIVITY OF THE DELTA-1-CRYSTALLIN Peer-reviewed

    J FUNAHASHI, Y KAMACHI, K GOTO, H KONDOH

    NUCLEIC ACIDS RESEARCH　19　(13)　3543-3547　1991/07

    DOI： 10.1093/nar/19.13.3543 　

    ISSN： 0305-1048

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Misc. 6

  1. 肺移植後虚血再灌流肺障害におけるNrf2活性化の効果

    東郷 威男, 星川 康, 田口 恵子, 矢吹 皓, 三友 英紀, 渡邊 龍秋, 松田 安史, 大石 久, 佐渡 哲, 野田 雅史, 舟橋 淳一, 山本 雅之, 岡田 克典

    移植　53　(総会臨時)　398-398　2018/09

    Publisher: (一社)日本移植学会

    ISSN： 0578-7947

  2. 肺移植後虚血再灌流肺障害におけるNrf2活性化の効果

    東郷 威男, 星川 康, 田口 恵子, 矢吹 皓, 三友 英紀, 渡邊 龍秋, 松田 安史, 大石 久, 佐渡 哲, 野田 雅史, 舟橋 淳一, 山本 雅之, 岡田 克典

    移植　53　(総会臨時)　398-398　2018/09

    Publisher: (一社)日本移植学会

    ISSN： 0578-7947

  3. The correlation among the blood concentration of mycophenolic acid, the dosage of mycophenolate mofetil and the number of leukocyte in patients after lung transplantation

    Yabuki Hiroshi, Funahashi Junichi, Okada Yoshinori, Watanabe Tatsuaki, Kikuchi Masafumi, Notsuda Hirotsugu, Niikawa Hiromichi, Matsuda Yasushi, Noda Masafumi, Sakurada Akira, Hoshikawa Yasushi

    Organ Biology　23　(2)　141-144　2016

    Publisher: 一般社団法人 日本臓器保存生物医学会

    ISSN： 1340-5152

    eISSN： 2188-0204

    More details Close

    Mycophenolate mofetil (MMF) has been used as a standard immunosuppressive agent after lung transplantation. MMF is rapidly metabolized to active constituent, mycophenolic acid (MPA), after intake. Gastrointestinal side- effects and leukocytopenia are common adverse effects of MMF. Although, therapeutic drug monitoring (TDM) for calcineurin inhibitors is widely used, the role of TDM for MPA is unclear in lung transplantation. We investigated the correlation among the blood concentration of MPA, the dosage of MMF and the number of leukocyte in lung transplant recipients. The correlation coefficient between the blood concentration of MPA and the dosage of MMF was not significant, so MMF might require TDM. On the other hand, neither the correlation coefficients between the number of leukocyte and the blood concentration of MPA nor the correlation coefficients between the number of leukocyte and the dosage of MMF were not significant. Further investigation is necessary to find the meanings of TDM for MPA after lung transplantation.

  4. Electroporation: Past, present and future Peer-reviewed

    Harukazu Nakamura, Junichi Funahashi

    Development Growth and Differentiation　55　(1)　15-19　2013/01

    DOI： 10.1111/dgd.12012 　

    ISSN： 0012-1592 1440-169X

  5. Gain- and loss-of-function in chick embryos by electroporation

    H Nakamura, T Katahira, T Sato, Y Watanabe, J Funahashi

    MECHANISMS OF DEVELOPMENT　121　(9)　1137-1143　2004/09

    DOI： 10.1016/j.mod.2004.05.013 　

    ISSN： 0925-4773

  6. ニワトリ胚中脳の吻尾極性に関わる遺伝子カスケードの解析

    舟橋 淳一, 杉山 清佳, 原 知永, 仲村 春和

    日本分子生物学会年会プログラム・講演要旨集　19　673-673　1996/08/01

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Presentations 15

  1. Making Lung from human iPS cells Part 2&3, endoderm and mesoderm

    Jun-ichi FUNAHASHI, Yoshinori OKADA

    The 44th Annual Meeting of the Molecular Biology Society of Japan　2021/12/02

  2. Making Lung form human iPS cells; Part 1, endoderm

    FUNAHASHI Jun-ichi

    Joint Annual Meeting of 70th JSCB and 51st JSDB　2018/06/08

  3. Time-lapse imaging system with shell- less culture chamber International-presentation

    FUNAHASHI Jun-ichi

    7th International Chick meeting　2012/11/16

  4. Essential roll of SOX5 in the semicircular canal development of zebrafish

    FUNAHASHI Jun-ichi

    44th Annual Meeting of the JSDB　2011/05/20

  5. SOX5 is required for semicicular canal development in Zebrafish

    Sympei Tanino, Gembu Abe, Koichi Kawakami, Harukazu Nakamura, Jun-ichi Funahashi

    BMB2010　2010/12/10

  6. Confocal 3D Time Lapse Imaging

    FUNAHASHI Jun-ichi

    43rd Annual Meeting for the Japanese Society of Developmental Biologists　2010/06/23

  7. Inner ear development of zebrafish revealed by 3D-timelapse imaging

    FUNAHASHI Jun-ichi

    115JAA　2010/03/30

  8. Gene trap revealed a roll of Sox5 in the morphogenesis of the semicircular canal

    Syumpei Tanino, Gembu Abe, Koichi Kawakami, Harukazu Nakamura, Jun-ichi Funahashi

    MBSJ2009　2009/12/10

  9. Defects of zebrafish inner ear morphogenesis analyzed by crossing with GFP line

    Jun-ichi FUNAHASHI, Hitoshi Okamoto, Koichi Kawakami, Harukazu Nakamura

    BMB2008　2008/12/11

  10. 遺伝子トラップ系統を用いたゼブラフィッシュ三半規管形態形成の解析

    舟橋淳一, 川上浩一, 仲村春和

    第３０回に本分子生物学会年会　2007/12/11

  11. 三次元タイムラプスによるゼブラフィッシュ三半規管形態形成の解析

    舟橋淳一, 川上浩一, 村春

    第13回小型魚類研究会　2007/09/16

  12. 遺伝子トラップ系統を用いたゼブラフィッシュ三半規管形態形成の解析

    ○Jun-ichi Funahashi, Koichi Kawakami, Harukazu Nakamura

    第40回日本発生生物学　2007/05/28

  13. 三半規管形成に異常を示すゼブラフィッシュ突然変異体galleryとBMPシグナルについて

    小又 尉広, 野島 康弘, 中山 里実, 岡本 仁, 仲村 春和, 舟橋 淳一

    第３９回日本発生生物学会大会　2006/05/31

  14. 三半規管発生の組織学的検討

    小林 友理子, 仲村 春和, 舟橋 淳一

    第３９回日本発生生物学会大会　2006/05/31

  15. ニワトリ胚神経系に発現する2E1d遺伝子の機能の解析

    小谷 徳生, 仲村 春和, 舟橋 淳一

    第３９回日本発生生物学会大会　2006/05/31

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Research Projects 16

  1. Lung Organoid culture method concerning meso-endodermal interaction

    Jun-ichi FUNAHASHI

    Offer Organization: Japan Society for the Promotion of Science

    System: Grants-in-Aid for Scientific Research

    Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

    Institution: Tohoku University

    2019/04/01 - 2022/03/31

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    Making organs from human pluripotent stem cells (iPSC) is a challenging approach for developmental biology, cell biology and regenerative medicine. There are several reports that describe induction of organoid such as gastric, intestinal, pancreatic, liver bud and recently lung. In most of the cases, they first tried to induce endoderm, then further differentiation of endoderm and mesenchyme which supports endoderm. However, in normal development, most of the mesenchyme which works for maintenance of differentiated endoderm is derived from mesoderm. We thought that this discrepancy introduces limitation for further differentiation. Based on this idea, we developed step-wise protocol to make highly organized lung form iPSC. As a first step, we attempted to re-produce the lung organoid that was reported before. In the second step, we induced lung mesenchyme from mesoderm which is derived from iPSC. In the last step, these tissues were combined to produce mature lung.

  2. Mechanism of inner ear and semicircular canalmorphogenesis

    JUN-ICHI Funahashi

    Offer Organization: Japan Society for the Promotion of Science

    System: Grants-in-Aid for Scientific Research

    Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

    Institution: Tohoku University

    2009 - 2011

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    Semicircular canals are intriguing model system to study the mechanism of morphogenesis. In this study, two model organisms, zebrafish and chick are used. Utilizing each of its own advantage, cellular and histological analysis was carried out with cutting edge imaging technology. In parallel to these analyses, cloning and functional analysis of the genes related to morphogenesis was done. As a result, it is revealed that Sox5 gene plays a critical roll in semicircular canal morphogenesis.

  3. Analysis of tectal layer formation and mechanisms of retinotectal projection.

    NAKAMURA Harukazu, FUNAHASHI Jun-Ichi, WATANABE Yuji, OMI Minoru

    Offer Organization: Japan Society for the Promotion of Science

    System: Grants-in-Aid for Scientific Research

    Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

    Institution: Tohoku University

    2005 - 2009

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    In lower vertebrates, optic tectum is the visual center and receives retinal fibers in a retinotopic manner. We have shown that Ephrin A2 and A5, which are expressed in the posterior tectum and repel temporal retinal fibers, are induced by Fgf8, but that signal transduction to induce Ephrin A2 and A5 are different. We have elaborated new fiber tracing method, and unraveled new but transient retinotectal pathway which invade deeper layer of the tectum from the first.

  4. Analysis of the mechanism that controls vertebrates'' inner ear/semicircular canal morphogenesis

    FUNAHASHI Jun-ichi

    Offer Organization: Japan Society for the Promotion of Science

    System: Grants-in-Aid for Scientific Research

    Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

    Institution: Tohoku University

    2006 - 2007

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    Vertebrate's semicircular canals in inner ear are intriguing model systems to study the mechanism of morphogenesis, Because their function and conserved among vertebrates. In the semicircular canals of chick embryo, we made a precise immunohistochemical analysis, and got results suggesting that epithelial-mesenchymal transition plays a roll though it had been thought to be the least plausible mechanism. By screening zebrafish mutants, we have isolated a mutant line named gallery that has disorganized semicircular canal. In the wild-type, the formation of semicircular canals begins with the development of protrusions that extend inward form the wall of otic vesicle into the lumen. While in gallery, only one protrusion is formed. We are mapping the responsible gene in genome and will be able to clone the gene in coning year. To study semicircular canal morphogenesis with the resolution of cellular level, we have attempted isolate the fish that specifically express GFP in the otic vesicle. By screening Gal4 gene trap lines, we have identified the line that expresses GFP at the tip of the growing protrusions. We made three-dimensional time-lapse analysis, along with the identification of Gal4 insertion point and cloning the neighboring gene. The cloned gene is a know gene, although it consist of upstream exons. This splicing form might have different expression pattern form conventional splicing form, and we now comparing their expression patterns. We are planning to knock down this specific splicing form and study its function in inner ear morphogenesis.

  5. 脊椎動物内耳の形態形成機構の解析

    舟橋 淳一

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 特定領域研究

    Institution: 東北大学

    2004 - 2005

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    ニワトリ胚を用いた解析 【FRET】三半規管形成過程にプログラム細胞死がどの程度寄与するかを明らかにするため,in ovoでFRET法を用いたcaspase-3活性化のリアルタイム検出を行うシステムを開発してきた.ドナーとアクセプターはMiCi-mKOの組み合わせが最も有望である.また蛍光実体鏡の代わりに正立顕微鏡で低倍率の対物レンズを使用しタイムラプス撮影を行うべく装置の調整中である. 【器官培養】内耳原基(上皮のみ)の器官培養系で半規管形成過程に関わる因子の解析を行った.間充織細胞の増殖や細胞外基質の増加による機械的な圧力を考慮し,ガラスビーズを用いて耳胞に圧力を加えながらの培養を試みたり,間充織から分泌される因子の影響を仮定し,FGFあるいはヒアルロン酸でコートしたガラスビーズを用いてみたが,半規管形成には至らなかった. 【Gbx2-Otx2の相互作用と蝸牛神経節形成】転写制御因子の領域形成への関与を知るため,正常内耳では相補的に発現するGbx2とOtx2を異所的に発現させて,その影響を見た.Gbx2を異所的に発現させるとOtx2の発現は抑制され,逆にOtx2を異所的に発現させると,Gbx2の発現が抑制された.さらに,正常胚では耳胞の腹側部にGbx2もOtx2も発現しない部位が存在し,ここではFgf10が発現しているが,Gbx2あるいはOtx2の異所的な発現により,このFgf10の発現が抑制され,その部位から生ずる蝸牛神経節の形成も抑制された.またFgf10を耳胞で異所的に発現させたところ,その外側に異所的に神経節が形成された. ゼブラフィッシュミュータントを用いた解析 ゼブラフィッシュの半規管形成過程に異常を生ずるミュータントを一昨年度に4系統分離し,表現型の解析と合わせ,原因遺伝子の同定が進行中である.

  6. Mechanizms of Regionalizaion of the tectum and cerebellum and retinotectal projection

    NAKAMURA Harukazu, FUNAHASHI Junichi, WATANABE Yuji

    Offer Organization: Japan Society for the Promotion of Science

    System: Grants-in-Aid for Scientific Research

    Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)

    Institution: Tohoku University

    2003 - 2005

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    The isthmus works as an organizer, and Fgf8 mimics the organizing activity. The isthmic organizer plays a role for the development of the tectum and the cerebellum in the mesencephalon and in the metencephalon, respectively. It was previously shown that strong Fgf8 signal induces cerebellar differentiation. In the present study, we have shown that strong Fgf8 signal activates Ras-ERK signaling cascade. If we shut down this signaling cascade by misexpression of dominant negative form of Ras (DN-Ras), y electroporation the fate of the metencephalon changes to the mesencephalon, and the tectum differentiates in place of the cerebellum. Then, we focused on Sprouty2. Sprouty2 is expressed overlapping to Fgf8, but was indicated as a negative regulator of Ras-ERK signaling cascade. As indicated, Sprouty2 expression was induced rapidly by Fgf8, that is, 2 hours after electroporation of Fgf8 expression vector, and repressed ERK activation. Misexpression of Sprouty2 exerted similar results as that of DN-Ras, that is, fate change of the metencephalon to the mesencephalon. On the other hand, misexpression of dominant negative form of Sprouty2 resulted in anterior shift of the mes-metencephalic boundary. The results indicate the need of fine regulation of Ras-ERK signaling.

  7. 峡部オーガナイザー形成のメカニズム

    仲村 春和, 舟橋 淳一, 片平 立矢

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 特定領域研究

    Institution: 東北大学

    2004 - 2004

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    Fgf8bをニワトリ胚後脳胞〜間脳胞に強制発現させると、Ras-ERKシグナル伝達系が活性化されて中脳胞の発生運命が変わり、小脳として分化する。この際導入したFgf8が直接オーガナイザーとして働いたのか、胚でオーガナイザーの再編が起こっているかを検証した。そのため、マウスFgf8をエレクトロポレーションによりニワトリ胚の後脳胞〜間脳胞に強制発現させ、ニワトリFgf8に特異的なプローブ、マウスFgf8に特異的なプローブを用いてin situハイブリダイゼイションを行い、導入したFgf8,胚のFgf8の発現を時間を追って調べた。その結果、胚の中でオーガナイザーの再編が起こり、最終的に胚の遺伝子によるFgf8がオーガナイザーとして働くことが明らかとなった。このオーガナイザーの再編にはOtx2,Gbx2,Limx1b, Wnt1,Fgf8の相互作用が大きく関与している。 Fgf8がRas-ERKシグナル伝達系を活性化することにより小脳が誘導されるが、その際Ras-ERKシグナルの負の調節因子であるSprouty2が直ちに誘導され、シグナルの流れを適度に調節していることを示した。Sprouty2およびドミナントネガティブ型のSprouty2の強制発現により次のことが明らかとなった。すなわちRas-ERKシグナルが流れすぎると中脳後脳境界が頭側により、Sprouty2により抑制されると尾側によって本来小脳として分化する後脳胞背側は視蓋として分化するようになる。このような領域の運命を調節するシグナルの量は厳密に調節される必要があり、峡部でもSprouty2に加えて、sef, Mkpといった負の調節因子により、2重3重に調節されているようである。

  8. 形態生成機構の基本原理の解明を目指した,ニワトリ三半規管の発生機構の解析

    舟橋 淳一

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 特定領域研究

    Institution: 東北大学

    2002 - 2003

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    1)ニワトリ胚内耳原基での細胞トレーシング (1)deRedの利用 生体での透過率の高い波長域(赤色)の蛍光タンパク質の発現ベクターの利用により,検出感度を高めた.耳胞が閉じる前の発生段階で遺伝子導入して,半規管の形成の最初のステップであるfuse plateの伸長が始まる時期までの細胞の移動が観察できるようになった. (2)fgf10エンハンサー 形態形成は細胞の増殖や移動,細胞死などの現象が密接に関わりながら進行するので,遺伝子の発現パターンを解析する場合,その遺伝子を発現している細胞が移動するのか,移動せずに発現のレベルが変化するのかを区別する必要がある。そこで,マウスfgf10遺伝子の耳特異的な発現制御領域をdsRed遺伝子に繋いだ発現ベクターを構築してエレクトロポレーションを行い,その発現パターンを同一個体中で継時的に観察記録する系を確立した. 2)ゼブラフィッシュ胚の耳胞の形態形成機構の解析 (1)タイムラプス解析 ゼブラフィッシュは発生初期では胚が透明なため,内耳の形態形成過程を継時的に観察しやすい.三半規管に関して言えば,ニワトリ胚と相似の過程をたどると考えられ,これまでの知見を十分に生かす事が出来ると期待される.そこで三半規管形成期のタイムラプス解析を行う系を確立した. (2)ミュータントのスクリーニング 三半規管の形態形成に異常のあるミュータントのスクリーニングを行い,7系統を分離した.その内の一つでは,三半規管のうち側半規管のみが形成されることを明らかにした.これは三つの半規管の形成がそれぞれ独立に制御されることを示唆し,興味深い. 3)共同研究 Six1ノックアウトマウスの内耳形態形成の異常の表現系をPaint-fillにより解析し,単に腹側の構造が失われるだけでなく,正常胚に比べ内リンパ管と内リンパ嚢が極端に拡大していることを明らかにした.

  9. 視蓋の誘導・位置特異性決定の分子機構

    仲村 春和, 佐藤 達也, 渡邉 裕二, 舟橋 淳一, 荒木 功人

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 特定領域研究

    Institution: 東北大学

    1998 - 2003

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    1.これまで、ニワトリ胚での遺伝子発現阻害実験は困難であったが、標的遺伝子とマッチする21ベースのヘアピン型RNA発現ベクターをエレクトロポレーションにより導入することによって可能となった。現在、この方法を用いて視蓋の領域形成のさらなる解析を行っている。 2.中脳胞領域でEnによりその発現が抑制される遺伝子のスクリーニングの過程でcHes5が単離された。,cHes5は中脳胞前側で強く発現しており、En2の発現の強い峡部ではその発現が見られない。実際En2によりcHes5の発現は抑制された。またEn2に対するsiRNAを導入し、En2の発現を抑制すると、峡部でcHes5の発現が誘導されたことから、cHes5は視蓋の極性形成に関与している可能性が示唆された。 3.同じくEnにより発現が抑制される遺伝子としてb2-chimerinが単離された。これも中脳胞領域で興味深い発現をしているので現在機能解析を続けている。 4.ゼブラフィシュでislet3によりその発現が制御され、峡部オーガナイザー活性と関係のある分子としてcanopyファミリーが同定された。ニワトリ胚のCanopy遺伝子の単離を試み、canopy2が得られた。Canpy2は中脳胞前域をカバーするように発現していることから、エレクトロポレーションにより現在その解析を進めている。 6年間の研究期間を通じて、中脳、後脳の領域形成のメカニズムの理解が深まったが、3,4のようにこれからの課題もできたのでさらに研究を展開していく心づもりである。

  10. Organizing signal and the tectal and cerebellar differentiation

    NAKAMURA Harukazu, SATO Tatsuya, WATANABE Yuji, FUNAHASHI Junichi

    Offer Organization: Japan Society for the Promotion of Science

    System: Grants-in-Aid for Scientific Research

    Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)

    Institution: Tohoku University

    2001 - 2002

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    The isthmus works as an organizer, and Fgf8 mimics the organizing activity. The isthmic organizer plays a role for the development of the tectum and the cerebellum in the mesencephalon and in the metencephalon, respectively. It is very interesting that completely different architecture of the tectum and the cerebellum differentiates under a common signal. We paid attention to that among 8 isoforms of Fgf8, Fgf8a and Fgf8b are expressed in the isthmus, and carried out misexpression of Fgf8a and Fgf8b by in ovo electroporation. Fgf8a induced the tectum in the diencephalon as expected. It was surprising that Fgf8b changed the fate of the mesencephalic alar plate to the cerebellum. Fgf8b repressed Otx2 expression in the mesencephalon, but induced expression of Gbx2 and Irx2, which are normally expressed in the metencephalon. The quantitative study revealed that the difference between Fgf8a and Fgf8b could be attributed to the difference in the intensity of the signal. It was suggested that strong signal of Fgf8 turns the gene expression cascade toward the cerebellar differentiation. We were then interested in Ras-ERK pathway as the signal transduction pathway downstream of the Fgf8 signal. In normal embryos ERK is activated at the site where Fgf8 mRNA is localized. Fgf8b activated ERK while Fgf8a or lower dose of Fgf8b did not activate ERK in the mes/metencephalon. Disruption of the Ras-ERK signaling pathway by dominant negative form of Ras (Ras^<S17N>) changed the fate or the metencephalic alar plate from cerebellum to tectum. Ras^<S17N> canceled the effects of Fgf8b, while co-transfection of Fgf8a and Ras^<S17N> exerted additive effects. The results indicate that the presumptive metencephalon receives strong Fgf8 signal that activates the Ras-ERK pathway and differentiates into the cerebellum.

  11. 形態形成機構の基本原理の解明を目指した,ニワトリに内耳の発生機構の解析

    舟橋 淳一

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 特定領域研究(A)

    Institution: 東北大学

    2001 - 2001

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    ●ニワトリ胚内耳原基への遺伝子導入法の開発 細胞トレーシングのためにGFP遺伝子を内耳原基である耳胞へ導入する必要がある.このため局所導入エレクトロポレーションを応用し,耳胞へGFP遺伝子を導入した.その結果,継時的に蛍光を観察することに成功した.さらにエレクトロポレーションの条件を検討し,導入効率は約20%程までに高まった.トレーシングには十分な値である. ●耳胞(蝸牛)の発生運命系譜の解明 蛍光色素の注入による細胞系譜のトレースを行った結果,予定リンパ管領域は,過去の報告より広いことが明らかになった.今後解析を進めることで,さらに詳しい細胞系譜が書けると期待できる. ●長期間のトレース 一般にエレクトロポレーションには一過性の発現ベクターが用いられるが,本課題の目的には,より長期間にわたって導入遺伝子の発現が持続する系が必要である.そこで,次の二つの改良を行った.一つは,導入するGFP自体の細胞に対する毒性を下げることで,汎用されるEGFPの代わりに,ウミシイタケ由来のphrGFPを用いた.第2はベクターの変更である.プラスミドベクターに換えて,ニワトリレトロウィルスベクターにphrGFPを組み込み,エレクトロポレーションすることにした.これらにより,長期間にわたり安定したGFPの発現を観察し続けることが出来るようになった.現時点で,導入後最長7日後までGFPの蛍光が観察できている.

  12. 視蓋発生における遺伝子ネットワークの研究

    仲村 春和, 荒木 功人, 舟橋 淳一

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 重点領域研究

    Institution: 東北大学

    1997 - 1997

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    視覚の中枢である中脳視蓋の位置特異性の形成にEn遺伝子が重要な役割を果たすことが我々の研究により示されたが、本研究では視蓋発生におけるEnを中心とした遺伝子発現制御のカスケードを追究した。in ovoエレクトロポレーション法によりニワトリ胚に極めて高率に外来遺伝子を発現させることができるようになった。 中脳胞後ろ側で強く発現する遺伝子のスクリーニングの過程でPax-2,Pax-5遺伝子がクローニングされた。in ovoエレクトロポレーションによりPax-5を異所的に発現させると、視蓋は前の方に伸びまた至るところで小さな膨らみが見られた。Pax-5の異所的発現部位ではEn-2,Wnt-1,Fgf8遺伝子の発現が誘導され、Otx2遺伝子の発現は抑制された。Fgf8とPax-5の関係を見るつもりでFgf8を異所的に発現させると、Pax-5の発現が誘導された。Fgf8には視蓋の誘導作用があることが示されているので、Fgf8とPax-5は相互に作用しつつ視蓋の誘導に働いていることが示唆された。 Pax-2はPax-5とサブファミリーをなす遺伝子であるが、これを異所的に発現させると、視蓋の前の方への伸びはPax-5よりも大きかったが、Fgf8の誘導は間脳部でしかおこらず、Otx-2の抑制もなかった。2つの遺伝子は重複して機能している可能性が高いが、Pax2は視蓋の誘導に大きく働き、Pax-2が視蓋の維持と極性形成により重要だろうと考えられた。

  13. 網膜視蓋投射形成の分子機構

    仲村 春和, 荒木 功人, 舟橋 淳一

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 重点領域研究

    Institution: 東北大学

    1997 - 1997

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    ニワトリの視覚の中枢は中脳視蓋であるが、的確な回路が形成されるためにまず視蓋としてのコンパートメントが決定され、その中での位置特異性が決定される必要がある。視蓋の後ろとしての位置特異性の形成にEn遺伝子が重要な役割を果たすことを示したが、本研究は視蓋発生においてEnを中心とした遺伝子発現制御のカスケードを明らかにする目的で行われた。 中脳後脳境界部から中脳胞後ろにかけて強く発現しているPax-5遺伝子のcDNAがクローニングされた。これを発現ベクターpMiwに組み込みin ovoエレクトロポレーションで視蓋原基から間脳胞まで異所的に発現させると、視蓋が前の方まで膨らみ、中脳部では至るところで小さな膨らみが見られた。Pax-5の発現部位でEn-2,Wnt-1遺伝子の発現が誘導された。興味深いことに視蓋の誘導に働くことが示されているFgf-8遺伝子の発現も誘導した。このことよりPax-5遺伝子は視蓋発生でかなり上位のヒエラルキーにある遺伝子だということができる。Fgf8とPax-5相互の関係を調べる目的で、Fgf8を異所的に発現させると、Pax-5が誘導された。また後の発生段階で視蓋後ろに限局して発現し、耳側網膜繊維を反発することによって視神経の標的選択に関与している分子Elf-1の発現もPax-5により誘導された。前脳から中脳後脳境界部まで発現しているOtx2の発現は抑制した。 これらの結果よりPax-5はその下流の遺伝子の発現を誘導することにより視蓋のorganizing centerで大きな役割を果たす遺伝子だということが示唆された。

  14. ニワトリ胚中脳の吻尾極性形成に関わる遺伝子カスケードの解析

    舟橋 淳一

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 奨励研究(A)

    Institution: 東北大学

    1996 - 1996

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    本研究では,ニワトリ胚の中脳(視蓋)における吻尾極性形成に関わる遺伝子発現調節のカスケードの解析を,強制発現系を用いて行った.当初はレトロウィルスベクターを使用していたが,期待したほどの発現が得られなかったため,本年度の後半から別の方法を検討した結果,in ovoエレクトロポレーションが有効であることを見いだした.そこでPax-5あるいはEn-2, FGF8の強制発現ベクターをエレクトロポーレーションにより孵卵2日目のニワトリ胚の中脳に導入して,それぞれが他の遺伝子の発現に及ぼす影響を見た.この結果,(1)Pax-5は同一の細胞内でFGF8の発現を誘導すること,(2)さらにPax-5はEn-2の発現も誘導するが,その範囲はより広い領域にわたり,可溶性のFGF8タンパクが拡散しその影響により発現が誘導されたと考えられること,(3)同様にPax-5はWnt-1の発現も誘導するが,その発現パターンから,FGF8の発現を介さず,単一の細胞内での遺伝子間の相互作用による誘導である可能性が高いこと,(4)逆にFGF8もPax-5の発現を誘導することを見いだした.En-2の強制発現による影響に関しては現在検討中である.これらの事実はショウジョウバエにおける遺伝子カスケードが必ずしも脊椎動物では保存されておらず,より複雑なネットワークを作っていることを示すものである.またここで取り上げた遺伝子は全て中脳の尾側から後脳の吻側にかけて峡部(isthmus)を中心にして発現しているが,単純にどの遺伝子がカスケードの最上部に位置するとは結論づけられず,別のより上位の因子の存在を仮定するか,別の位置情報を与えるメカニズムを仮定する必要があることをも示していて興味深い.

  15. 網膜視藍投射形成の分子機構

    仲村 春和, 船橋 淳一

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 重点領域研究

    Institution: 東北大学

    1996 - 1996

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    網膜視藍投射が正確に行われるために、網膜、視藍それぞれが発生の初期に位置特異性を獲得し、それぞれ対応するもの同士でシナプスを形成すると考えられる。一方、網膜耳側の線維は視藍尾側の膜成分に反発される、それにはEphタイプの膜受容体型チロシンキナーゼのリガンド-レセプターのシステムが関与しているらしいことがわかってきた。我々の研究でenが視藍に尾側としての位置特異性を付与することが示されている。本年度は、視藍の吻尾軸に沿った位置特異性獲得過程での遺伝子発現制御のカスゲ-ドと、視藍に発現しているEph型チロシンキナーゼのリガンドであるElf-やRAGSがenの支配下にあるかどうかに焦点を当てて実験を行った。 レトロウイルスペクターにen-2を組み込みE2胚で強制発現させると、en-2の異所的発現部位で、Elf-, RAGSの発現が誘導された。enを強制発現させると、耳側網膜線維が視藍に侵入できないことがあるが、これはenによりElf-1やRAGSが誘発されたためだと考える。 レトロウイルスによるen-2の強制発現で、間脳部にwnt-1の発現が誘導された。またwnt-1産生細胞を脳胞壁に埋め込むと、間脳の前端で終脳に近いところで、en-2の発現が誘導された。このことはショウジョウバエでのen/wnt-1の相互作用がニワトリ神経系の発生においても保存されていることを示しており興味深い。

  16. 網膜視蓋投射形成の分子機構

    仲村 春和, 舟橋 淳一

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 重点領域研究

    Institution: 東北大学

    1995 - 1995

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    視蓋の吻尾極性の形成にはengrailed(en)遺伝子が重要な働きをしていることが、我々の研究により明らかにされている。本研究ではenを中心とする遺伝子発現制御のカスケードを明らかにする目的で中脳胞(視蓋原基)の吻側、尾側それぞれのcDNAライブラリーを作製し、サブトラクション法によりそれぞれで特異的な発現する遺伝子をクローニングし、レトロウイルスベクターを用いた強制発現法によりen遺伝子との関係を追究した。 サブトラクションにより、中脳後脳境界部で発現している遺伝子としてpax-5がクローニングされた。pax-5遺伝子は孵卵2日目(E2)で10体節期頃には中脳後脳境界部に発現しており、E4では中脳後脳境界部で強く、前の方に向かうに従って弱いという勾配を持って発現している。en-2の発現と重なるような発現パターンであるが、発現の開始はen-2の方がちょっと早い。pax-5はショウジョウバエのペアルール遺伝子pairedと相同な遺伝子であり、ショウジョウバエでのヒエラルキーではenよりも上位にあると思われる。そこでpax-5をRCASレトロウイスルベクターに組み込み強制発現させて、enの発現パターンを調べてみた。pax-5を強制発現させた後、en-2の発現を抗en抗体による免疫染色で、pax-5の発現をin situハイブリダイゼイションで検出した。おもにwhole mountによる染色を行った。 レトロウイルスによる強制発現により視蓋原基の前の方でもパッチ状に強く発現しているところが見られた。pax-5を異所的に強制発現させられた一部の細胞でenの異所的な発現が見られた。enの異所的発現は間脳の背側の一部の細胞で見られた。ここではいくつかの細胞がpax-5,en-2両遺伝子ともに発現していた。この実験結果はpax-5はen-2を発現させるよう促進的に働く因子であることを示している。ただし、pax-5を発現したすべての細胞がen-2を発現したわけではないのでen-2の発現にはpax-5とさらに別の制御因子が働く必要があることを示唆している。

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