Details of the Researcher

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Reja Shahi Imam
Section
Frontier Research Institute for Interdisciplinary Sciences
Job title
Specially Appointed Assistant Professor(Research)
e-Rad No.
40972708

Research Interests 6

  • Protein degradation

  • Proximity labeling

  • Fluorogenic probe

  • Biosensors

  • Protein Labeling

  • Chemical Biology

Misc. 1

  1. 新規可逆結合型タグ蛍光プローブの1分子イメージングへの応用

    粟津 利邦, 簑島 維文, Shahi Imam Reja, 神原 丈敏, 菊地 和也, 岡田 康志

    72回　3-2　2020/06/01

    Publisher: (一社)日本細胞生物学会

Research Projects 2

  1. Activatable Fluorogenic Probes for Real-Time Imaging of Cytotoxic T Cell and Tumor Cell Activity

    REJA SHAHI・IMAM

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 基盤研究(C)

    Institution: 大阪大学

    2026/04/01 - 2029/03/31

  2. がん細胞転移を可視化するシステインプロテアーゼ蛍光プローブ

    菊地 和也, REJA SHAHI

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 特別研究員奨励費

    Institution: 大阪大学

    2018/04 - 2020/03

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    本年度はタンパク質を超解像で解析するため、蛍光の点滅を1分子単位で取得するイメージング法を利用したタンパク質ラベル化プローブの開発に取り組んだ。具体的には、標的タンパク質にラベル化する時は蛍光を発し、解離すると蛍光を発しない可逆性のラベル化プローブを設計した。このプローブには、標的タンパク質に対して特異的かつ可逆に結合が起こること、ならびに結合時のみに蛍光を発することが求められる。 融合発現可能なタグとして機能する標的タンパク質として、疎水性ポケットを有し、疎水性の匂い物質をリガンドとして可逆的に結合するOdorant Binding Protein (OBP)を選択した。リガンドとしては中程度のアルキル鎖長を有する脂肪酸を選択した。蛍光色素として、環境応答性を示す7-ジメチルアミノクマリン及びその誘導体を選択し、脂肪酸と連結しプローブを設計、合成した。OBPの組み換えタンパク質に対し、結合特性、蛍光特性を評価したところ、プローブを加えた際に蛍光強度の上昇が見られ、結合に伴い発蛍光性を有することが明らかとなった。またその結合定数はμM以上のオーダーであり、可逆的な結合に適した範囲の強さであることが分かった。また、リガンドおよびOBP配列の検討を行い、脂肪酸のアルキル鎖の最適化とOBPの結合ポケットにおけるアミノ酸変異によって結合時に20倍以上の蛍光上昇が観察された。このプローブを用いて生細胞におけるイメージングを行ったところ、細胞内局所に発現させたOBPをプローブにより迅速にラベル化できることが確認できた。さらに、洗浄操作によりプローブが解離し、蛍光シグナルが観察されなくなったことから、プローブが可逆的にタンパク質と結合し蛍光をスイッチさせることを示した。