Details of the Researcher

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Takayasu Kobayashi
Section
Support Center for Laboratory Animal and Gene Researches
Job title
Associate Professor
Degree

  • 医学博士 (Tohoku University)

e-Rad No.
10221970

Research History 7

  • 2021/04 - Present
    Tohoku University

  • 2015/10 - 2021/03
    Tohoku University　准教授

  • 2009/08 - 2015/09
    Tohoku University　准教授

  • 2007/04 - 2009/07
    Tohoku University

  • 1993/04 - 2007/03
    Tohoku University　助手

  • 1997/08 - 2000/07
    University of Dundee　Postdoctoral fellow

  • 1991/07 - 1993/03
    Tohoku University

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Education 3

  • Tohoku University　Graduate School, Division of Medicine　physiology

    1987/04 - 1991/03

  • 東北大学大学院　農学研究科　博士前期課程

    1985/04 - 1987/03

  • Tohoku University　Faculty of Agriculture　agricultural chemistry

    1981/04 - 1985/03

Committee Memberships 2

  • 日本ホスファターゼ研究会　世話人

    2011/10 - Present

  • 日本生化学会東北支部　幹事

    2004/04 - 2007/03

Professional Memberships 3

  • 日本プロティンホスファターゼ研究会(2000/11-)

  • 日本分子生物学会(2000/10-)

  • 日本生化学会(2000/10-)

Research Interests 3

  • protein kinase

  • PP2C

  • Protein phosphatase

Research Areas 1

  • Life sciences / Molecular biology / Biochemistry

Awards 1

  1. 奨励賞

    2009/05/09　日本生化学会東北支部　プロテインホスファターゼ２Cの細胞における機能

Papers 74

  1. Armadillo domain of ARID1A directly interacts with DNA-PKcs to couple chromatin remodeling with nonhomologous end joining (NHEJ) pathway. International-journal

    Shin-Ichiro Kanno, Takayasu Kobayashi, Reiko Watanabe, Akihiro Kurimasa, Kozo Tanaka, Akira Yasui, Ayako Ui

    Nucleic acids research　53　(5)　2025/02/27

    DOI： 10.1093/nar/gkaf150 　

    More details Close

    The SWI/SNF chromatin-remodeling complex that comprises multiple subunits orchestrates diverse cellular processes, including gene expression, DNA repair, and DNA replication, by sliding and releasing nucleosomes. AT-interacting domain-rich protein 1A (ARID1A) and ARID1B (ARID1A/B), a pivotal subunit, have significant relevance in cancer management because they are frequently mutated in a broad range of cancer types. To delineate the protein network involving ARID1A/B, we investigated the interactions of this with other proteins under physiological conditions. The ARID domain of ARID1A/B interacts with proteins involved in transcription and DNA/RNA metabolism. Several proteins are responsible for genome integrity maintenance, including DNA-dependent protein kinase catalytic subunit (DNA-PKcs), bound to the armadillo (ARM) domain of ARID1A/B. Introducing a knock-in mutation at the binding amino acid of DNA-PKcs in HCT116 cells reduced the autophosphorylation of DNA-PKcs and the recruitment of LIG4 in response to ionizing radiation. Our findings suggest that within the SWI/SNF complex, ARID1A couples DNA double-strand break repair processes with chromatin remodeling via the ARM domains to directly engage with DNA-PKcs to maintain genome stability.

  2. Effect of glycosaminoglycan structure on all-trans-retinoic acid-induced neural differentiation of P19 embryonal carcinoma cells

    Ikuko Kakizaki, Takayasu Kobayashi, Shinri Tamura, Hiroshi Akagi, Keiichi Takagaki

    Biochemical and Biophysical Research Communications　570　169-174　2021/09

    Publisher: Elsevier BV

    DOI： 10.1016/j.bbrc.2021.07.012 　

    ISSN： 0006-291X

  3. Time-Series Transcriptome Analysis Reveals the miR-27a-5p-Ppm1l Axis as a New Pathway Regulating Macrophage Alternative Polarization After Myocardial Infarction

    Shinichi Goto, Genki Ichihara, Yoshinori Katsumata, Seien Ko, Atsushi Anzai, Kohsuke Shirakawa, Jin Endo, Masaharu Kataoka, Hidenori Moriyama, Takahiro Hiraide, Hiroki Kitakata, Takayasu Kobayashi, Keiichi Fukuda, Motoaki Sano

    Circulation Journal　85　(6)　929-938　2021/05/25

    Publisher: Japanese Circulation Society

    DOI： 10.1253/circj.cj-20-0783 　

    ISSN： 1346-9843

    eISSN： 1347-4820

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    BACKGROUND: Timely differentiation of monocytes into M2-like macrophages is important in the cardiac healing process after myocardial infarction (MI), but molecular mechanisms governing M2-like macrophage differentiation at the transcriptional level after MI have not been fully understood.Methods and Results:A time-series microarray analysis of mRNAs and microRNAs in macrophages isolated from the infarcted myocardium was performed to identify the microRNAs involved in regulating the process of differentiation to M2-like macrophages. Correlation analysis revealed 7 microRNAs showing negative correlations with the progression of polarity changes towards M2-like subsets. Next, correlation coefficients for the changes in expression of mRNAs and miRNAs over time were calculated for all combinations. As a result, miR-27a-5p was extracted as a possible regulator of the largest number of genes in the pathway for the M2-like polarization. By selecting mouse mRNAs and human mRNAs possessing target sequences of miR-27a-5p and showing expression patterns inversely correlated with that of miR-27a-5p, 8 potential targets of miR-27a-5p were identified, includingPpm1l. Using the mouse bone marrow-derived macrophages undergoing differentiation into M2-like subsets by interleukin 4 stimulation, we confirmed that miR-27a-5p suppressed M2-related genes by negatively regulatingPpm1lexpression. CONCLUSIONS: Ppm1land miR-27a-5p may be the key molecules regulating M2-like polarization, with miR-27a-5p inhibiting the M2-like polarization through downregulation ofPpm1lexpression.

  4. A heterozygous deficiency in protein phosphatase Ppm1b results in an altered ovulation number in mice. International-journal Peer-reviewed

    Ishii N, Homma T, Watanabe R, Kimura N, Ohnishi M, Kobayashi T, Fujii J

    Molecular medicine reports　19　(6)　5353-5360　2019/06

    DOI： 10.3892/mmr.2019.10194 　

    ISSN： 1791-2997

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    Ppm1b, a metal‑dependent serine/threonine protein phosphatase, catalyzes the dephosphorylation of a variety of phosphorylated proteins. Ppm1b‑/‑ mouse embryos die at the fertilized oocyte stage, whereas Ppm1b+/‑ mice with a C57BL/6 background exhibit no phenotypic abnormalities. Because the C57BL/6 strain produces a limited number of pups, in an attempt to produce Ppm1b‑/‑ mice, congenic Ppm1b+/‑ mice with an ICR background were established, which are more fertile and gave birth to more pups. As a result, however, no Ppm1b‑/‑ offspring were obtained when pairs of Ppm1b+/‑ ICR mice were bred again. Ppm1b+/‑ male and female ICR mice were analyzed from the viewpoint of fecundity. The Ppm1b haploinsufficiency had no effect on testicular weight or the number of sperm in male mice. Despite the fact that the levels of Ppm1b protein in the ovaries of sexually mature Ppm1b+/‑ mice were decreased compared with those of Ppm1b+/+ mice, there appeared to be no significant difference in the histological appearance of the ovaries, litter sizes or plasma progesterone levels at the estrous stage. When superovulation was induced by stimulation using a hormone treatment, the number of ovulated oocytes were the same for Ppm1b+/‑ and Ppm1b+/+ mice at 4 weeks of age when the estrous cycle did not proceed, however, the number of ovulated oocytes was lower in sexually mature Ppm1b+/‑ mice at 11 weeks of age compared with Ppm1b+/+ mice in the first and the second superovulation cycles. These collective results suggest that follicle development is excessive in Ppm1b+/‑ mice, and that this leads to a partial depletion of matured follicles and a corresponding decrease in the number of ovulated oocytes.

  5. A novel indole compound MA-35 attenuates renal fibrosis by inhibiting both TNF-α and TGF-β1 pathways Peer-reviewed

    Hisato Shima, Kensuke Sasaki, Takehiro Suzuki, Chikahisa Mukawa, Ten Obara, Yuki Oba, Akihiro Matsuo, Takayasu Kobayashi, Eikan Mishima, Shun Watanabe, Yasutoshi Akiyama, Koichi Kikuchi, Tetsuro Matsuhashi, Yoshitsugu Oikawa, Fumika Nanto, Yukako Akiyama, Hsin-Jung Ho, Chitose Suzuki, Daisuke Saigusa, Atsushi Masamune, Yoshihisa Tomioka, Takao Masaki, Sadayoshi Ito, Ken-Ichiro Hayashi, Takaaki Abe

    Scientific Reports　7　(1)　1884-1884　2017/12/01

    Publisher: Nature Publishing Group

    DOI： 10.1038/s41598-017-01702-7 　

    ISSN： 2045-2322

  6. Targeted disruption of the mouse protein phosphatase ppm1l gene leads to structural abnormalities in the brain Peer-reviewed

    Rie Kusano, Kousuke Fujita, Yasuharu Shinoda, Yuko Nagaura, Hiroshi Kiyonari, Takaya Abe, Toshio Watanabe, Yasuhisa Matsui, Masahiro Fukaya, Hiroyuki Sakagami, Tatsuya Sato, Jun-ichi Funahashi, Motoko Ohnishi, Shinri Tamura, Takayasu Kobayashi

    FEBS LETTERS　590　(20)　3606-3615　2016/10

    DOI： 10.1002/1873-3468.12429 　

    ISSN： 0014-5793

    eISSN： 1873-3468

  7. Mammalian Bcnt/Cfdp1, a potential epigenetic factor characterized by an acidic stretch in the disordered N-terminal and Ser(250) phosphorylation in the conserved C-terminal regions Peer-reviewed

    Shintaro Iwashita, Takehiro Suzuki, Takeshi Yasuda, Kentaro Nakashima, Taiichi Sakamoto, Toshiyuki Kohno, Ichiro Takahashi, Takayasu Kobayashi, Yoshiko Ohno-Iwashita, Shinobu Imajoh-Ohmi, Si-Young Song, Naoshi Dohmae

    BIOSCIENCE REPORTS　35　(4)　e00228　2015/08

    DOI： 10.1042/BSR20150111 　

    ISSN： 0144-8463

    eISSN： 1573-4935

  8. Exonic Mutations in the SLC12A3 Gene Cause Exon Skipping and Premature Termination in Gitelman Syndrome Peer-reviewed

    Yoichi Takeuchi, Eikan Mishima, Hisato Shima, Yasutoshi Akiyama, Chitose Suzuki, Takehiro Suzuki, Takayasu Kobayashi, Yoichi Suzuki, Tomohiro Nakayama, Yasuhiro Takeshima, Norma Vazquez, Sadayoshi Ito, Gerardo Gamba, Takaaki Abe

    JOURNAL OF THE AMERICAN SOCIETY OF NEPHROLOGY　26　(2)　271-279　2015/02

    DOI： 10.1681/ASN.2013091013 　

    ISSN： 1046-6673

    eISSN： 1533-3450

  9. The Expression of Fn14 via Mechanical Stress-activated JNK Contributes to Apoptosis Induction in Osteoblasts Peer-reviewed

    Hiroyuki Matsui, Naoto Fukuno, Yoshiaki Kanda, Yusuke Kantoh, Toko Chida, Yuko Nagaura, Osamu Suzuki, Hideki Nishitoh, Kohsuke Takeda, Hidenori Ichijo, Yasuhiro Sawada, Keiichi Sasaki, Takayasu Kobayashi, Shinri Tamura

    JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY　289　(10)　6438-6450　2014/03

    DOI： 10.1074/jbc.M113.536300 　

    ISSN： 0021-9258

    eISSN： 1083-351X

  10. N-Myristoylation is essential for protein phosphatases PPM1A and PPM1B to dephosphorylate their physiological substrates in cells Peer-reviewed

    Toko Chida, Masakatsu Ando, Tasuku Matsuki, Yutaro Masu, Yuko Nagaura, Teruko Takano-Yamamoto, Shinri Tamura, Takayasu Kobayashi

    BIOCHEMICAL JOURNAL　449　(3)　741-749　2013/02

    DOI： 10.1042/BJ20121201 　

    ISSN： 0264-6021

  11. Acyl-CoA binding domain containing 3 (ACBD3) recruits the protein phosphatase PPM1L to ER-Golgi membrane contact sites Peer-reviewed

    Yasuharu Shinoda, Kohsuke Fujita, Satoko Saito, Hiroyuki Matsui, Yusuke Kanto, Yuko Nagaura, Kohji Fukunaga, Shinri Tamura, Takayasu Kobayashi

    FEBS LETTERS　586　(19)　3024-3029　2012/09

    DOI： 10.1016/j.febslet.2012.06.050 　

    ISSN： 0014-5793

  12. TGF-beta-activated kinase 1 mediates mechanical stress-induced IL-6 expression in osteoblasts Peer-reviewed

    Naoto Fukuno, Hiroyuki Matsui, Yoshiaki Kanda, Osamu Suzuki, Kunihiro Matsumoto, Keiichi Sasaki, Takayasu Kobayashi, Shinri Tamura

    BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS　408　(2)　202-207　2011/05

    DOI： 10.1016/j.bbrc.2011.02.127 　

    ISSN： 0006-291X

  13. Mechanical stress modulates bone remodeling signals Peer-reviewed

    Hiroyuki Matsui, Naoto Fukuno, Osamu Suzuki, Kohsuke Takeda, Hidenori Ichijo, Takayasu Kobayashi, Shinri Tamura, Keiichi Sasaki

    INTERFACE ORAL HEALTH SCIENCE 2009　129-+　2010

    DOI： 10.1007/978-4-431-99644-6_21 　

  14. A mechanism for the suppression of interleukin-1-induced nuclear factor kappa B activation by protein phosphatase 2C eta-2 Peer-reviewed

    Takeaki Henmi, Kazutaka Amano, Yuko Nagaura, Kunihiro Matsumoto, Seishi Echigo, Shinri Tamura, Takayasu Kobayashi

    BIOCHEMICAL JOURNAL　423　71-78　2009/10

    DOI： 10.1042/BJ20090208 　

    ISSN： 0264-6021

  15. Mechanical stress induces the activation of TAK1 and its downstream pathways in pre-osteoblastic cells Peer-reviewed

    Naoto Fukuno, Hiroyuki Matsui, Osamu Suzuki, Keiichi Sasaki, Takayasu Kobayashi, Shinri Tamura

    20th Anniversary MHS 2009 and Micro-Nano Global COE - 2009 International Symposium on Micro-NanoMechatronics and Human Science　383-384　2009

    DOI： 10.1109/MHS.2009.5351995 　

  16. Phosphorylation of protein phosphatase 2C zeta by c-Jun NH2-terminal kinase at Ser(92) attenuates its phosphatase activity Peer-reviewed

    Kenjiro Awano, Kazutaka Amano, Yuko Nagaura, Shin-ichiro Kanno, Seishi Echigo, Shinri Tamura, Takayasu Kobayashi

    BIOCHEMISTRY　47　(27)　7248-7255　2008/07

    DOI： 10.1021/bi800067p 　

    ISSN： 0006-2960

  17. Protein phosphatase 2C epsilon is an endoplasmic reticulum integral membrane protein that dephosphorylates the ceramide transport protein CERT to enhance its association with organelle membranes Peer-reviewed

    Satoko Saito, Hiroyuki Matsui, Miyuki Kawano, Keigo Kumagai, Nario Tomishige, Kentaro Hanada, Seishi Echigo, Shinri Tamura, Takayasu Kobayashi

    JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY　283　(10)　6584-6593　2008/03

    DOI： 10.1074/jbc.M707691200 　

    ISSN： 0021-9258

  18. Loading of mechanical stress to osteoblasts may induce cytokine cross talks between osteoblasts and monocytes/macrophages in a JNK/p38-dependent manner Peer-reviewed

    Hiroyuki Matsui, Naoto Fukuno, Keiichi Sasaki, Osamu Suzuki, Takayasu Kobayashi, Shinri Tamura

    2008 International Symposium on Micro-NanoMechatronics and Human Science, MHS 2008　379-380　2008

    DOI： 10.1109/MHS.2008.4752481 　

  19. Regulation of apoptosis signal-regulating kinase 1 by protein phosphatase 2C epsilon Peer-reviewed

    Jun-ichi Saito, Shinnosuke Toriumi, Kenjiro Awano, Hidenori Ichijo, Keiichi Sasaki, Takayasu Kobayashi, Shinri Tamura

    BIOCHEMICAL JOURNAL　405　(3)　591-596　2007/08

    DOI： 10.1042/BJ20070231 　

    ISSN： 0264-6021

  20. Disruption of the mouse protein Ser/Thr phosphatase 2C beta gene leads to early pre-implantation lethality Peer-reviewed

    Masato Sasaki, Motoko Ohnishi, Fumi Tashiro, Hitoshi Niwa, Akira Suzuki, Jun-ichi Miyazaki, Takayasu Kobayashi, Shinri Tamura

    MECHANISMS OF DEVELOPMENT　124　(6)　489-499　2007/07

    DOI： 10.1016/j.mod.2007.04.001 　

    ISSN： 0925-4773

  21. Bioinformatics-based cyclopedic search for novel JNK binding molecules. Peer-reviewed

    Tada-aki Kudo, Takayasu Kobayashi, Shinri Tamura

    Tohoku Univ. Dent. J.　26　(1)　1-11　2007/06

    ISSN： 0287-3915

  22. The magnitude and duration of cyclic stretch affect JNK and p38 activation in MC3T3-E1 pre-osteoblastic cells Peer-reviewed

    Hiroyuki Matsui, Naoto Fukuno, Keiichi Sasaki, Osamu Suzuki, Takayasu Kobayashi, Shinri Tamura

    2007 INTERNATIONAL SYMPOSIUM ON MICRO-NANO MECHATRONICS AND HUMAN SCIENCE, VOLS 1 AND 2　183-+　2007

    ISSN： 2474-378X

    eISSN： 2474-3798

  23. Negative regulation of protein phosphatase 2Cβ by ISG15 conjugation Peer-reviewed

    Tomoharu Takeuchi, Takayasu Kobayashi, Shinri Tamura, Hideyoshi Yokosawa

    FEBS Letters　580　(18)　4521-4526　2006/08/07

    DOI： 10.1016/j.febslet.2006.07.032 　

    ISSN： 0014-5793

  24. PP2C family members play key roles in regulation of cell survival and apoptosis Peer-reviewed

    S Tamura, S Toriumi, J Saito, K Awano, T Kudo, T Kobayashi

    CANCER SCIENCE　97　(7)　563-567　2006/07

    DOI： 10.1111/j.1349-7006.2006.00219.x 　

    ISSN： 1347-9032

  25. Catalyst-controlled asymmetric synthesis of fostriecin and 8-epi-fostriecin Peer-reviewed

    K Maki, R Motoki, K Fujii, M Kanai, T Kobayashi, S Tamura, M Shibasaki

    JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY　127　(48)　17111-17117　2005/12

    DOI： 10.1021/ja0562043 　

    ISSN： 0002-7863

  26. Activation mechanism of c-Jun amino-terminal kinase in the course of neural differentiation of P19 embryonic carcinoma cells Peer-reviewed

    S Akiyama, T Yonezawa, TA Kudo, MG Li, H Wang, M Ito, K Yoshioka, J Ninomiya-Tsuji, K Matsumoto, R Kanamaru, S Tamura, T Kobayashi

    JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY　279　(35)　36616-36620　2004/08

    DOI： 10.1074/jbc.M406610200 　

    ISSN： 0021-9258

  27. Protein Phosphatase-2C alpha as a positive regulator of insulin sensitivity through direct activation of phosphatidylinositol 3-kinase in 3T3-L1 adipocytes Peer-reviewed

    T Yoshizaki, H Maegawa, K Egawa, S Ugi, Y Nishio, T Imamura, T Kobayashi, S Tamura, JM Olefsky, A Kashiwagi

    JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY　279　(21)　22715-22726　2004/05

    DOI： 10.1074/jbc.M313745200 　

    ISSN： 0021-9258

  28. Molecular cloning of PP2C eta, a novel member of the protein phosphatase 2C family Peer-reviewed

    KI Komaki, K Katsura, M Ohnishi, MG Li, M Sasaki, M Watanabe, T Kobayashi, S Tamura

    BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA-GENE STRUCTURE AND EXPRESSION　1630　(2-3)　130-137　2003/11

    DOI： 10.1016/j.bbaexp.2003.09.004 　

    ISSN： 0167-4781

  29. Structural and functional characterization of mouse glutamate decarboxylase 67 gene promoter. International-journal

    Takashi Kobayashi, Satoe Ebihara, Kenji Ishii, Takayasu Kobayashi, Michiharu Nishijima, Shunro Endo, Akira Takaku, Hiroyuki Sakagami, Hisatake Kondo, Fumi Tashiro, Jun-ichi Miyazaki, Kunihiko Obata, Shinri Tamura, Yuchio Yanagawa

    Biochimica et biophysica acta　1628　(3)　156-68　2003/08/25

    ISSN： 0006-3002

    More details Close

    Neuronal expression of the mouse glutamate decarboxylase 67 (mGAD67) gene occurs exclusively in neurons that synthesize and release GABA (GABAergic neurons). This gene is also expressed in pancreatic islet cells and testicular spermatocytes. In order to elucidate the molecular mechanisms underlying the regulation of mGAD67 gene expression, we isolated and characterized the 5'-flanking region of this gene. Sequence analysis of a 10.2-kb DNA fragment of this gene containing a promoter region (8.4 kb) and noncoding exons 0A and 0B revealed the presence of numerous potential neuron-specific cis-regulatory elements. Functional analysis of the 5'-flanking region of exons 0A and 0B by transient transfection into cultured cells revealed that the region -98 to -52 close to exon 0A is important for the transcriptional activity of both exons 0A and 0B. In addition, we used transgenic mice to examine the expression pattern conferred by the 10.2 kb DNA fragment of the mGAD67 gene fused to the bacterial lacZ reporter gene. Transgene expression was observed in neurons of particular brain regions containing abundant GABAergic neurons such as the basal ganglia, in pancreatic islet cells and in testicular spermatocytes and spermatogonia. These results suggest that the 10.2 kb DNA fragment of the mGAD67 gene contains regulatory elements essential for its targeted expression in GABAergic neurons, islet cells and spermatocytes.

  30. Structural and functional characterization of mouse glutamate decarboxylase 67 gene promoter Peer-reviewed

    T Kobayashi, S Ebihara, K Ishii, T Kobayashi, M Nishijima, S Endo, A Takaku, H Sakagami, H Kondo, F Tashiro, J Miyazaki, K Obata, S Tamura, Y Yanagawa

    BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA-GENE STRUCTURE AND EXPRESSION　1628　(3)　156-168　2003/08

    DOI： 10.1016/S0167-4781(03)000138-6 　

    ISSN： 0167-4781

  31. Regulation of the interleukin-1-induced signaling pathways by a novel member of the protein phosphatase 2C family (PP2C epsilon) Peer-reviewed

    MG Li, K Katsura, H Nomiyama, K Komaki, J Ninomiya-Tsuji, K Matsumoto, T Kobayashi, S Tamura

    JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY　278　(14)　12013-12021　2003/04

    DOI： 10.1074/jbc.M211474200 　

    ISSN： 0021-9258

  32. A novel protein phosphatase 2C family member (PP2C zeta) is able to associate with ubiquitin conjugating enzyme 9 Peer-reviewed

    M Kashiwaba, K Katsura, M Ohnishi, M Sasaki, H Tanaka, Y Nishimune, T Kobayashi, S Tamura

    FEBS LETTERS　538　(1-3)　197-202　2003/03

    DOI： 10.1016/S0014-5793(03)00153-4 　

    ISSN： 0014-5793

  33. Activation mechanism of c-Jun amino-terminal kinase in the course of endodermal differentiation of P19 embryonic carcinoma cells Peer-reviewed

    T Kudo, Y Sakamoto, S Tamura, T Kobayashi

    FEBS LETTERS　539　(1-3)　29-33　2003/03

    DOI： 10.1016/S0014-5793(03)00179-0 　

    ISSN： 0014-5793

  34. K+ channel activation by all three isoforms of serum- and glucocorticoid-dependent protein kinase SGK Peer-reviewed

    N Gamper, S Fillon, Y Feng, B Friedrich, PA Lang, G Henke, SM Huber, T Kobayashi, P Cohen, F Lang

    PFLUGERS ARCHIV-EUROPEAN JOURNAL OF PHYSIOLOGY　445　(1)　60-66　2002/10

    DOI： 10.1007/s00424-002-0873-2 　

    ISSN： 0031-6768

  35. 新規プロテインホスファターゼ2Cファミリーメンバー(PP2Cε)cDNAのクローニングと解析

    李 明光, 桂 幸次, 小牧 健一郎, 柏葉 光宏, 野見山 尚之, 小林 孝安, 田村 眞理

    生化学　74　(8)　1047-1047　2002/08

    Publisher: (公社)日本生化学会

    ISSN： 0037-1017

  36. IGF-1 up-regulates K+ channels via PI3-kinase, PDK1 and SGK1 Peer-reviewed

    N Gamper, S Fillon, SM Huber, Y Feng, T Kobayashi, P Cohen, F Lang

    PFLUGERS ARCHIV-EUROPEAN JOURNAL OF PHYSIOLOGY　443　(4)　625-634　2002/02

    DOI： 10.1007/s00424-001-0741-5 　

    ISSN： 0031-6768

  37. Regulation of stress-activated protein kinase signaling pathways by protein phosphatases Peer-reviewed

    S Tamura, M Hanada, M Ohnishi, K Katsura, M Sasaki, T Kobayashi

    EUROPEAN JOURNAL OF BIOCHEMISTRY　269　(4)　1060-1066　2002/02

    DOI： 10.1046/j.0014-2956.2002.02754.x 　

    ISSN： 0014-2956

  38. Activation of c-Jun amino-terminal kinase is required for retinoic acid-induced neural differentiation of P19 embryonal carcinoma cells Peer-reviewed

    H Wang, S Ikeda, S Kanno, LM Guang, M Ohnishi, M Sasaki, T Kobayashi, S Tamura

    FEBS LETTERS　503　(1)　91-96　2001/08

    DOI： 10.1016/S0014-5793(01)02699-0 　

    ISSN： 0014-5793

  39. Structure of the mouse glutamate decarboxylase 65 gene and its promoter: Preferential expression of its promoter in the GABAergic neurons of transgenic mice Peer-reviewed

    K Makinae, T Kobayashi, T Kobayashi, H Shinkawa, H Sakagami, H Kondo, F Tashiro, J Miyazaki, K Obata, S Tamura, Y Yanagawa

    JOURNAL OF NEUROCHEMISTRY　75　(4)　1429-1437　2000/10

    DOI： 10.1046/j.1471-4159.2000.0751429.x 　

    ISSN： 0022-3042

  40. Characterization of the structure and regulation of two novel isoforms of serum- and glucocorticoid-induced protein kinase Peer-reviewed

    T Kobayashi, M Deak, N Morrice, P Cohen

    BIOCHEMICAL JOURNAL　344　(1)　189-197　1999/11

    DOI： 10.1042/0264-6021:3440189 　

    ISSN： 0264-6021

  41. Alternative promoters direct tissue-specific expression of the mouse protein phosphatase 2C beta gene Peer-reviewed

    M Ohnishi, N Chida, T Kobayashi, H Wang, S Ikeda, M Hanada, Y Yanagawa, K Katsura, A Hiraga, S Tamura

    EUROPEAN JOURNAL OF BIOCHEMISTRY　263　(3)　736-745　1999/08

    DOI： 10.1046/j.1432-1327.1999.00580.x 　

    ISSN： 0014-2956

  42. Enrichment and efficient screening of ES cells containing a targeted mutation: the use of DT-A gene with the polyadenylation signal as a negative selection maker Peer-reviewed

    Y Yanagawa, T Kobayashi, M Ohnishi, T Kobayashi, S Tamura, T Tsuzuki, M Sanbo, T Yagi, F Tashiro, J Miyazaki

    TRANSGENIC RESEARCH　8　(3)　215-221　1999/06

    DOI： 10.1023/A:1008914020843 　

    ISSN： 0962-8819

  43. Activation of serum- and glucocorticoid-regulated protein kinase by agonists that activate phosphatidylinositide 3-kinase is mediated by 3-phosphoinositide-dependent protein kinase-1 (PDK1) and PDK2 Peer-reviewed

    T Kobayashi, P Cohen

    BIOCHEMICAL JOURNAL　339　(2)　319-328　1999/04

    DOI： 10.1042/0264-6021:3390319 　

    ISSN： 0264-6021

  44. Functional counterparts of mammalian protein kinases PDK1 and SGK in budding yeast Peer-reviewed

    Casamayor, A Torrance, PD Kobayashi, T Thorner, J Alessi, DR

    CURRENT BIOLOGY　9　(4)　186-197　1999/02/25

    DOI： 10.1016/S0960-9822(99)80088-8 　

  45. Regulation of GABAergic cell-specific gene transcription Peer-reviewed

    Y Yanagawa, T Kobayashi, K Ishii, H Sakagami, H Kondo, F Tashiro, JI Miyazaki, S Tamura

    NEURAL DEVELOPMENT-BOOK　2　435-439　1999

  46. Isoform-specific phosphorylation of fission yeast type 2C protein phosphatase Peer-reviewed

    T Kobayashi, M Sadaie, M Ohnishi, H Wang, S Ikeda, M Hanada, Y Yanagawa, T Nakajima, S Tamura

    BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS　251　(1)　296-300　1998/10

    DOI： 10.1006/bbrc.1998.9467 　

    ISSN： 0006-291X

    eISSN： 1090-2104

  47. Selective suppression of stress-activated protein kinase pathway by protein phosphatase 2C in mammalian cells Peer-reviewed

    M Hanada, T Kobayashi, M Ohnishi, S Ikeda, H Wang, K Katsura, Y Yanagawa, A Hiraga, R Kanamaru, S Tamura

    FEBS LETTERS　437　(3)　172-176　1998/10

    DOI： 10.1016/S0014-5793(98)01229-0 　

    ISSN： 0014-5793

  48. Isoform specific phosphorylation of protein phosphatase 2C expressed in COS7 cells Peer-reviewed

    T Kobayashi, K Kusuda, M Ohnishi, H Wang, S Ikeda, M Hanada, Y Yanagawa, S Tamura

    FEBS LETTERS　430　(3)　222-226　1998/07

    DOI： 10.1016/S0014-5793(98)00604-8 　

    ISSN： 0014-5793

  49. Mutational analysis of the domain structure of mouse protein phosphatase 2C beta Peer-reviewed

    K Kusuda, T Kobayashi, S Ikeda, M Ohnishi, N Chida, Y Yanagawa, R Shineha, T Nishihira, S Satomi, A Hiraga, S Tamura

    BIOCHEMICAL JOURNAL　332　(1)　243-250　1998/05

    DOI： 10.1042/bj3320243 　

    ISSN： 0264-6021

  50. Structure and alternative promoters of the mouse glutamic acid decarboxylase 67 gene Peer-reviewed

    Y Yanagawa, T Kobayashi, T Kamei, K Ishii, M Nishijima, A Takaku, T Kobayashi, S Tamura

    BIOCHEMICAL JOURNAL　326　(2)　573-578　1997/09

    DOI： 10.1042/bj3260573 　

    ISSN： 0264-6021

  51. Specificity of different isoforms of protein phosphatase-2A and protein phosphatase-2C studied using site-directed mutagenesis of HMG-CoA reductase Peer-reviewed

    YP Ching, T Kobayashi, S Tamura, DG Hardie

    FEBS LETTERS　411　(2-3)　265-268　1997/07

    DOI： 10.1016/S0014-5793(97)00712-6 　

    ISSN： 0014-5793

  52. Differentiation-dependent enhanced expression of protein phosphatase 2C beta in germ cells of mouse seminiferous tubules Peer-reviewed

    S Kato, T Kobayashi, K Kusuda, Y Nishina, Y Nishimune, K Yomogida, M Yamamoto, H Sakagami, H Kondo, M Ohnishi, N Chida, Y Yanagawa, S Tamura

    FEBS LETTERS　396　(2-3)　293-297　1996/11

    DOI： 10.1016/0014-5793(96)01119-2 　

    ISSN： 0014-5793

  53. Okadaic acid suppresses neural differentiation-dependent expression of the neurofilament-L gene in P19 embryonal carcinoma cells by post-transcriptional modification Peer-reviewed

    Y Sasahara, T Kobayashi, H Onodera, M Onoda, M Ohnishi, S Kato, K Kusuda, H Shima, M Nagao, H Abe, Y Yanagawa, A Hiraga, S Tamura

    JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY　271　(42)　25950-25957　1996/10

    DOI： 10.1074/jbc.271.42.25950 　

    ISSN： 0021-9258

  54. Purification and characterization of protein phosphatase 2C in rat parotid acinar cells: Two forms of Mg2+-activated histone phosphatase and phosphorylation by cAMP-dependent protein kinase Peer-reviewed

    N Yokoyama, T Kobayashi, S Tamura, H Sugiya

    ARCHIVES OF BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS　331　(1)　1-8　1996/07

    DOI： 10.1006/abbi.1996.0275 　

    ISSN： 0003-9861

  55. The mouse protein phosphatase 2C beta (Ppm1b) gene maps to the distal part of mouse chromosome 17 Peer-reviewed

    T Watanabe, M Ohnishi, T Kobayashi, M Oishi, S Tamura

    GENOMICS　33　(1)　147-149　1996/04

    DOI： 10.1006/geno.1996.0175 　

    ISSN： 0888-7543

  56. Enhanced UV sensitivity of yeast cells induced by overexpression of Mg2+-dependent protein phosphatase alpha (type 2C alpha) Peer-reviewed

    T Kobayashi, A Yasui, M Ohnishi, S Kato, Y Sasahara, K Kusuda, N Chida, Y Yanagawa, A Hiraga, S Tamura

    MUTATION RESEARCH-DNA REPAIR　362　(3)　213-217　1996/04

    DOI： 10.1016/0921-8777(95)00036-4 　

    ISSN： 0921-8777

  57. Localization of the mouse protein serine/threonine phosphatase 2C beta gene to chromosome 17E 4-5 Peer-reviewed

    M Ohnishi, K Nakagawara, M Mori, T Kobayashi, S Kato, YJ Sasahara, K Kusuda, N Chida, T Kobayashi, Y Yanagawa, A Hiraga, T Takeuchi, S Tamura

    GENOMICS　32　(1)　134-136　1996/02

    DOI： 10.1006/geno.1996.0089 　

    ISSN： 0888-7543

  58. UP-REGULATION OF PROTEIN-SERINE THREONINE PHOSPHATASE TYPE 2C DURING 1-ALPHA,25-DIHYDROXYVITAMIN D-3-INDUCED MONOCYTIC DIFFERENTIATION OF LEUKEMIC HL-60 CELLS Peer-reviewed

    M NISHIKAWA, SB OMAY, K NAKAI, H KIHIRA, T KOBAYASHI, S TAMURA, H SHIKU

    FEBS LETTERS　375　(3)　299-303　1995/11

    DOI： 10.1016/0014-5793(95)01209-W 　

    ISSN： 0014-5793

  59. PP2C phosphatase activity is coupled to cAMP-mediated pathway in rat parotid acinar cells Peer-reviewed

    N Yokoyama, T Kobayashi, S Tamura, H Sugiya

    BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY INTERNATIONAL　36　(4)　845-853　1995/07

    ISSN： 1039-9712

  60. MOLECULAR-CLONING AND EXPRESSION OF MOUSE MG2+-DEPENDENT PROTEIN PHOSPHATASE BETA-4 (TYPE 2C-BETA-4) Peer-reviewed

    S KATO, T TERASAWA, T KOBAYASHI, M OHNISHI, Y SASAHARA, K KUSUDA, Y YANAGAWA, A HIRAGA, Y MATSUI, S TAMURA

    ARCHIVES OF BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS　318　(2)　387-393　1995/04

    DOI： 10.1006/abbi.1995.1244 　

    ISSN： 0003-9861

  61. A NEW CLASS OF DNA PHOTOLYASES PRESENT IN VARIOUS ORGANISMS INCLUDING APLACENTAL MAMMALS Peer-reviewed

    A YASUI, APM EKER, S YASUHIRA, H YAJIMA, T KOBAYASHI, M TAKAO, A OIKAWA

    EMBO JOURNAL　13　(24)　6143-6151　1994/12

    ISSN： 0261-4189

  62. THE CDNA SEQUENCE ENCODING MOUSE MG2+-DEPENDENT PROTEIN PHOSPHATASE-ALPHA Peer-reviewed

    S KATO, T KOBAYASHI, T TERASAWA, M OHNISHI, Y SASAHARA, R KANAMARU, S TAMURA

    GENE　145　(2)　311-312　1994/08

    DOI： 10.1016/0378-1119(94)90026-4 　

    ISSN： 0378-1119

  63. CHARACTERIZATION OF MULTIPLE MOLECULAR-FORMS OF MG2+-DEPENDENT PROTEIN PHOSPHATASE FROM SACCHAROMYCES-CEREVISIAE Peer-reviewed

    T MURAKAMI, T KOBAYASHI, T TERASAWA, M OHNISHI, S KATO, Y SASAHARA, M ITOH, T NAKANO, S TAMURA

    JOURNAL OF BIOCHEMISTRY　115　(4)　762-766　1994/04

    DOI： 10.1093/oxfordjournals.jbchem.a124407 　

    ISSN： 0021-924X

  64. INVOLVEMENT OF TYPE 2C PHOSPHATASE IN THE DEPHOSPHORYLATION OF 26 KDA PHOSPHOPROTEIN IN RAT PAROTID ACINAR-CELLS Peer-reviewed

    N YOKOYAMA, MH YOKOYAMA, T KOBAYASHI, S TAMURA, S FURUYAMA, H SUGIYA

    BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS　200　(1)　497-503　1994/04

    DOI： 10.1006/bbrc.1994.1476 　

    ISSN： 0006-291X

  65. MOLECULAR-CLONING OF A NOVEL ISOTYPE OF MG2+-DEPENDENT PROTEIN PHOSPHATASE BETA (TYPE-2C-BETA) ENRICHED IN BRAIN AND HEART Peer-reviewed

    T TERASAWA, T KOBAYASHI, T MURAKAMI, M OHNISHI, S KATO, O TANAKA, H KONDO, H YAMAMOTO, T TAKEUCHI, S TAMURA

    ARCHIVES OF BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS　307　(2)　342-349　1993/12

    DOI： 10.1006/abbi.1993.1598 　

    ISSN： 0003-9861

  66. PHOSPHORYLATION OF MG2+-DEPENDENT PROTEIN PHOSPHATASE-ALPHA (TYPE-2C-ALPHA) BY CASEIN KINASE-II Peer-reviewed

    T KOBAYASHI, S KANNO, T TERASAWA, T MURAKAMI, M OHNISHI, K OHTSUKI, A HIRAGA, S TAMURA

    BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS　195　(1)　484-489　1993/08

    DOI： 10.1006/bbrc.1993.2069 　

    ISSN： 0006-291X

    eISSN： 1090-2104

  67. Expression of rat type 2Cα protein phosphatase in Saccharomyces cerevisiae cells Peer-reviewed

    Kobayasi T, Yasui A Terasawa T, Murakami T, Onoda, M, Ohnishi M, Tamura S

    Adv. Prot. Phosphatases 7　477-487　1993/04

  68. DEPHOSPHORYLATION OF AUTOPHOSPHORYLATED CA2+/CALMODULIN-DEPENDENT PROTEIN KINASE-II BY PROTEIN PHOSPHATASE-2C Peer-reviewed

    K FUKUNAGA, T KOBAYASHI, S TAMURA, E MIYAMOTO

    JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY　268　(1)　133-137　1993/01

    ISSN： 0021-9258

  69. ENHANCED EXPRESSION OF TYPE-2C PROTEIN PHOSPHATASE GENE DURING MYOGENIC DIFFERENTIATION OF C3H10T1/2 CELLS Peer-reviewed

    S OHISHI, M ENDO, T KOBAYASHI, T TERASAWA, T MURAKAMI, M ONODA, M OHNISHI, T ITOH, S TSUIKI, S TAMURA

    BIOCHEMISTRY INTERNATIONAL　28　(2)　345-351　1992/10

    ISSN： 0158-5231

  70. ALTERATION OF THE LEVEL OF PROTEIN PHOSPHATASE 2C (IA) MESSENGER-RNA DURING THE COURSE OF DIFFERENTIATION OF SKELETAL-MUSCLE CELLS Peer-reviewed

    S OHISHI, T KOBAYASHI, T TERASAWA, T MURAKAMI, M ONODA, S TSUIKI, S TAMURA

    TOHOKU JOURNAL OF EXPERIMENTAL MEDICINE　168　(2)　279-282　1992/10

    DOI： 10.1620/tjem.168.279 　

    ISSN： 0040-8727

    eISSN： 1349-3329

  71. MITOCHONDRIAL-DNA REPAIR BY PHOTOLYASE Peer-reviewed

    A YASUI, H YAJIMA, T KOBAYASHI, APM EKER, A OIKAWA

    MUTATION RESEARCH　273　(2)　231-236　1992/03

    DOI： 10.1016/0921-8777(92)90084-G 　

    ISSN： 0921-8262

  72. INCREASED UV SENSITIVITY OF ESCHERICHIA-COLI-CELLS AFTER INTRODUCTION OF FOREIGN PHOTOLYASE GENES Peer-reviewed

    T KOBAYASHI, M TAKAO, A OIKAWA, A YASUI

    MUTATION RESEARCH　236　(1)　27-34　1990/07

    DOI： 10.1016/0921-8777(90)90029-5 　

    ISSN： 0921-8262

  73. TANDEM ARRANGEMENT OF PHOTOLYASE AND SUPEROXIDE-DISMUTASE GENES IN HALOBACTERIUM-HALOBIUM Peer-reviewed

    M TAKAO, T KOBAYASHI, A OIKAWA, A YASUI

    JOURNAL OF BACTERIOLOGY　171　(11)　6323-6329　1989/11

    DOI： 10.1128/jb.171.11.6323-6329.1989 　

    ISSN： 0021-9193

  74. MOLECULAR CHARACTERIZATION OF A GENE ENCODING A PHOTOLYASE FROM STREPTOMYCES-GRISEUS Peer-reviewed

    T KOBAYASHI, M TAKAO, A OIKAWA, A YASUI

    NUCLEIC ACIDS RESEARCH　17　(12)　4731-4744　1989/06

    DOI： 10.1093/nar/17.12.4731 　

    ISSN： 0305-1048

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Misc. 19

  1. 神経系細胞への分化に及ぼすグリコサミノグリカンの影響

    柿崎 育子, 小林 孝安, 田村 眞理, 高垣 啓一

    応用糖質科学　8　(3)　50-50　2018/08

    Publisher: (一社)日本応用糖質科学会

    ISSN： 2185-6427

  2. [Regulation of cellular functions by protein phosphatase PPM family members].

    Kobayashi, Takayasu

    生化学　87　(5)　525-530　2015/10

    Publisher: 日本生化学会

    ISSN： 0037-1017

  3. メカニカルストレスによる骨芽細胞シグナル伝達路活性化メカニズムの分子生物学的解析

    福野 直人, 松井 裕之, 神田 佳明, 鈴木 治, 小林 孝安, 田村 眞理, 佐々木 啓一

    日本補綴歯科学会誌　3　(特別号)　314-314　2011/05

    Publisher: (公社)日本補綴歯科学会

    ISSN： 1883-4426

  4. 骨芽細胞のJNKおよびp38は骨メカノバイオロジーにおいて破骨細胞とのサイトカインクロストークに寄与する

    松井 裕之, 福野 直人, 神田 佳明, 鈴木 治, 武田 弘資, 一條 秀範, 佐々木 啓一, 小林 孝安, 田村 眞理

    日本生化学会大会・日本分子生物学会年会合同大会講演要旨集　83回・33回　1T2-9　2010/12

    Publisher: (公社)日本生化学会

  5. Molecular Biological Analysis of the Response to Mechanical Stress in Mouse Pre-osteoblastic Cell

    MATSUI H, FUKUNO N, KOBAYASHI T, SUZUKI O, TAMURA S, SASAKI K

    52　(117)　128-128　2008/06/06

  6. 情報生物学的手法による新規JNK結合分子の網羅的探索

    工藤忠明, 小林孝安, 田村眞理

    東北大学歯学雑誌　26　(1)　1-11　2007

  7. Molecular Biological Analysis of the Response to Mechanical Stress in Mouse Pre-osteoblastic Cell

    MATSUI H, SAITO J, KOBAYASHI T, TAMURA S, SASAKI K

    50　(115)　233-233　2006/07/08

  8. PP2C family members play key roles in regulation of cell survival and apoptosis

    S Tamura, S Toriumi, J Saito, K Awano, T Kudo, T Kobayashi

    CANCER SCIENCE　97　(7)　563-567　2006/07

    DOI： 10.1111/j.1349-7006.2006.00219.x 　

    ISSN： 1347-9032

  9. Regulation of stress-activated signal pathways by protein phosphatase 2C

    T Kobayashi, M Sasaki, S Tamura

    SEIKAGAKU　77　(10)　1274-1280　2005/10

    ISSN： 0037-1017

  10. 哺乳動物細胞プロテインホスファターゼ2Cファミリーメンバーによる細胞機能の調節 (化学と生物)

    田村眞理, 佐々木雅人, 工藤忠明, 齋藤淳一, 鳥海晋之介, 粟野健二郎, 小林孝安

    化学と生物　43　(6)　378-386　2005/06

    Publisher: Japan Society for Bioscience, Biotechnology, and Agrochemistry

    DOI： 10.1271/kagakutoseibutsu1962.43.378 　

    ISSN： 0453-073X

  11. ストレス応答とプロテインホスファターゼ2C (特集:プロテインホスファターゼ研究の最近の進歩)

    小林 孝安, 佐々木 雅人, 田村 眞理

    生化学　77　(10)　1274-1280　2005

    Publisher: 日本生化学会

    ISSN： 0037-1017

  12. Spatial regulation of JNK signaling pathway by BMPRII

    Tada-aki Kudo, Takayasu Kobayashi, Ming Guang Lil, Hidenori Ichijo, Kohei Miyazono, Shinri Tamura

    CELL STRUCTURE AND FUNCTION　29　78-78　2004/05

    ISSN： 0386-7196

    eISSN： 1347-3700

  13. Regulation of stress‐activated protein kinase signaling pathways by protein phosphatases. Peer-reviewed

    田村真理, 花田雅人, 佐々木雅人, 小牧健一郎, 米沢貴之, 小林孝安

    蛋白質 核酸 酵素　47　(5)　568-575　2002/04/01

    ISSN： 0039-9450

  14. Regulation of stress-activated protein kinase signaling pathways by protein phosphatases

    S Tamura, M Hanada, M Ohnishi, K Katsura, M Sasaki, T Kobayashi

    EUROPEAN JOURNAL OF BIOCHEMISTRY　269　(4)　1060-1066　2002/02

    DOI： 10.1046/j.0014-2956.2002.02754.x 　

    ISSN： 0014-2956

  15. Enhanced UV sensitivity of fission yeast cells induced by overexpression of PP2C

    SADAIE Mahito, YASUHIRA Shinji, KOBAYASHI Takayasu, NAKAJIMA Tasuku, YASUI Akira, TAMURA Shinri

    21　555-555　1998/12/01

  16. プロテインホスファターゼ２Ａ、２Ｃによる細胞機能の制御 (細胞工学)

    小林孝安, 笹原洋二, 大西素子, 千田尚毅, 田村眞理

    細胞工学　16　(2)　194-200　1997

  17. 神経細胞の機能制御とプロテインセリン/スレオニンホスファターゼ (蛋白質 核酸 酵素)

    小林孝安, 笹原洋二, 柳川右千夫, 田村眞理

    蛋白質 核酸 酵素　42　(3)　439-445　1997

  18. Okadaic acid suppresses neural differentiation-dependent expression of neurofilament-L gene in P19 embryonal carcinoma cells by posttranscriptional modification.

    Y Sasahara, T Kobayashi, M Ohnishi, S Kato, K Kusuda, Y Yanagawa, S Tamura

    MOLECULAR BIOLOGY OF THE CELL　7　74-74　1996/12

    ISSN： 1059-1524

  19. プロテインホスファターゼ2Cbeta cDNA のクローニングと解析

    寺澤孝幸, 小林孝安, 田村眞理

    加齢医学研究所雑誌　46　(1)　58-64　1994

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Books and Other Publications 5

  1. イラストで徹底理解する シグナル伝達キーワード事典

    山本雅, 仙波憲太郎, 山梨裕司, 小林孝安, 村田陽二, 的崎尚, 田村眞理

    羊土社　2012/08/15

  2. Interface Oral Health Science 2009

    Sasano T, Suzuki O Stashenko, P, Sasaki K, Takahashi N, ed, Matsui H, Fukuno, N Suzuki, O, Takeda, K Ichijo, H, Kobayashi T Tamura, S, Sasaki K

    Springer　2010/05

  3. Topics in Current Genetics Vol.5

    J. Arino, D.R. Alexander, ed. Tamura, S Li, MG Komaki, K, Sasaki M, Kobayashi T

    Springer-Verlag Berlin Heidelbeg　2004/02/20

  4. Methods in Molecular Biology Vol.93 Protein Phosphatase Protocols

    John W. Ludlow, ed. Kobayashi T Kusuda, K Ohnishi M Chida, N, Tamura S

    Humana Press　1998/06/15

  5. シグナル伝達実験法

    宇井理生, d, 小林孝安, 大西素子, 田村眞理

    羊土社　1996/08

Presentations 78

  1. プロテインホスファターゼPPM1Lの肥満形成への関与のメカニズムの解明

    第89回 日本生化学会大会　2016/09/25

  2. Two post-translational modifications in mammalian B cnt/Cfdp1, a potential epigenetic factor: S250 phosphorylation and K268 acetylation in the conserved C-terminal region

    第88回日本生化学会大会/第38回日本分子生物学会年会　2015/12/01

  3. ノックアウトマウスを用いたプロテインホスファターゼPPM1Lの新規機能解明

    日本生化学会東北支部会第81回例会　2015/05/09

  4. Targeted disruption of the mouse protein phosphatase PPM1L gene leads to structural abnormalities in the brain

    11th International Conference on Protein Phosphatases　2014/11/12

  5. リン酸化クロマチン構成因子Bcnt/Cfdp1の多様性の分子基盤

    第87回日本生化学会大会　2014/10/15

  6. プ口テインホスファターゼPPM1Lの欠損は大脳皮質において軸索線維の異常を引き起こす

    第87回日本生化学会大会　2014/10/15

  7. ノックアウトマウスを用いたPP2Cεの新規機能解明

    第5回日本プロテインホスファターゼ研究会学術集会　2014/02/02

  8. N-ミリストイル化はPP2CαおよびPP2Cβの生理的基質の認識に必須である

    第86回日本生化学会年会　2013/09/11

  9. セリンスレオニンホスファターゼPP2C ε のゴルジ体局在タンパク質GCP60との機能連関

    日本生化学会東北支部会第79回例会　2013/05/11

  10. N-ミリストイル化はPP2CαおよびPP2Cβの生理的基質の認識に必須である

    日本生化学会東北支部会第79回例会　2013/05/11

  11. Targeted disruption of the mouse protein phosphatase 2Cε gene leads to structural abnormalities in the brain

    10th International Conference on Protein Phosphatases　2013/02/07

  12. Golgi complex-associated protein of 60 kDa (GCP60) recruits the protein phosphatase PPM1L to ER-Golgi membrane contact sites

    10th International Conference on Protein Phosphatases　2013/02/07

  13. Golgi complex-associated protein of 60 kDa (GCP60) recruits the protein phosphatase PPM1L to ER-Golgi membrane contact sites

    第35回日本分子生物学会年会　2012/12/11

  14. ノックアウトマウスを用いたPP2Cεの新規機能解明

    第35回日本分子生物学会年会　2012/12/11

  15. PP2Cε依存的なセラミド輸送におけるGCP60の機能の検討

    第63回日本薬理学会北部会　2012/09/14

  16. プロテインホスファターゼPP2Cεによる小胞体ストレス応答の制御

    永浦裕子, 千田透子, 神藤佑亮, 松井裕之, 藤田宏介, 篠田康晴, 田村眞理, 小林孝安

    日本生化学会東北支部第78回例会・シンポジウム　2012/05/26

  17. N-ミリストイル化はPP2CαおよびPP2Cβの機能発揮に必須である

    小林孝安, 千田透子, 安藤正勝, 松木佑, 枡悠太郎, 高橋祐輝, 神藤佑亮, 永浦裕子, 田村眞理

    第5回日本プロテインホスファターゼ研究会学術集会　2012/01/19

  18. N-ミリストイル化ｇはPP2CαおよびPP2Cβの機能発揮に必須である

    小林孝安, 千田透子, 安藤正勝, 松木佑, 枡悠太郎, 高橋裕輝, 神藤佑亮, 永浦裕子, 田村眞理

    日本生化学会東北支部第77回例会・シンポジウム　2011/07/23

  19. AMPK activated protein kinase(AMPK) is Regulated by Multiple Protein Phosphatases International-presentation

    小林孝安, 千田透子, 安藤正勝, 松木佑, 枡悠太郎, 神藤佑亮, 永浦裕子, 田村眞理

    発がんスパイラル第1回国際シンポジウム＆第9回国際プロテインホスファターゼカンファランス　2011/02/01

  20. 骨芽細胞のJNKおよびp38は骨メカノバイオロジーにおいて破骨細胞とのサイトカインクロストークに寄与する

    松井裕之, 福野直人, 神田佳明, 鈴木治, 武田弘資, 一條秀憲, 佐々木啓一, 小林孝安, 田村眞理

    第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会 合同大会　2010/12/07

  21. 骨芽細胞のJNKおよびp38は骨メカノバイオロジーにおいて破骨細胞とのサイトカインクロストークに寄与する

    松井裕之, 福野直人, 神田佳明, 鈴木治, 武田弘資, 一條秀憲, 佐々木啓一, 小林孝安, 田村眞理

    第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会 合同大会　2010/12/07

  22. AMPK activated protein kinase(AMPK)の脱リン酸化を担うプロテインホスファターゼの解析

    小林孝安, 千田透子, 安藤正勝, 松木佑, 枡悠太郎, 高橋祐輝, 神藤祐亮, 永浦裕子, 田村眞理

    第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会 合同大会　2010/12/07

  23. PP2

    小林孝安, 粟野健二郎, 菅野新一郎, 永浦裕子, 田村眞理

    日本　2010/05/08

  24. 骨芽細胞におけるメカニカルストレスセンサー分子

    松井裕之, 福野直人, 神田佳明, 鈴木治, 佐々木啓一, 小林孝安, 田村眞理

    SI2009 第10回計測自動制御学会システムインテグレーション部門講演会　2009/12/24

  25. TAK1 is activated by cyclic mechanical strain loading to pre-osteoblastic cells

    福野直人, 松井裕之, 鈴木治, 佐々木啓一, 石谷太, 松本邦弘, 小林孝安, 田村眞理

    第32回日本分子生物学会年会　2009/12/09

  26. プロテインホスファターゼ２CζのJNKによる負の制御機構

    小林孝安, 粟野健次郎, 永浦裕子, 菅野新一郎, 田村眞理

    第32回日本分子生物学会年会　2009/12/09

  27. プロテインホスファターゼ２CζはJNKにより負の制御を受ける

    小林孝安, 粟野健次郎, 菅野新一郎, 永浦裕子, 田村眞理

    第4回日本プロテインホスファターゼ研究会学術集会　2009/11/13

  28. Mechanical stress Induced the Activation of TAK1 and its Downstream Pathways in Pre-osteoblastic Cells International-presentation

    Fukuno N, Matsui H, Suzuki O, Sasaki K, Kobayashi T, Tamura S

    第20回マイクロ・ナノメカトロニクスとヒューマンサイエンスに関する2009年国際シンポジウム（MHS2009 & Micro-Nano Global COE）　2009/11/08

  29. リン酸化によるＰＰの制御機構？２CζのJNKにより負の制御を受ける？

    小林孝安, 粟野健次郎, 菅野新一郎, 永浦裕子, 田村眞理

    第82回日本生化学会大会　2009/10/21

  30. プロテインホスファターゼ２CηによるIL-1依存性NF-κB活性化の選択的制御機構

    小林孝安, 永浦裕子, 逸見健明, 田村眞理

    第68回日本癌学会学術総会　2009/10/01

  31. Phosphorylation of protein phosphatase 2Czeta by c-Jun NH2-terminal kinase at Ser92 attenuates its phosphatase activity International-presentation

    Kobayashi T

    EMBO Confernce Series ”EuroPhosphatases 2009”　2009/07/14

  32. Role of protein phosphatase in regulation of cell survival and apoptosis International-presentation

    Takayasu Kobayashi

    4th International Symposium of Institutes Network　2009/01/31

  33. メカニカルストレスによる骨芽細胞SAPK活性化の機構と意義

    松井裕之, 福野直人, 鈴木治, 佐々木啓一, 武田弘資, 一條秀憲, 小林孝安, 田村眞理

    第31回日本分子生物学会第81回日本生化学会合同大会　2008/12/09

  34. Loading of Mechanical Stress to Osteoblasts May Induce Cytokine Cross Talks Osteoblasts & Monocytes/Macrophages in a JNK/p38-dependent Manner International-presentation

    Matsui H, Fukuno N, sasaki K, Suzuki O, Kobayashi T, Tamura S

    MHS2008　2008/11/06

  35. Protein phosphatase 2C delta/ILKAPpositively regulates p53 function

    永浦裕子, 小林孝安, 田村眞理

    第67回日本癌学会学術総会　2008/10/28

  36. A mechanism for the Selective Suppression of IL-1-induced NF-kappaB Activation by Protein Phoshatase 2Ceta-2 International-presentation

    Henmi T, Echigo S, Kobayashi T, Tamura S

    FASEB2008　2008/07/13

  37. 新規プロテインホスファターゼ２ＣメンバーであるPP2C-etaによるNF-kappaB経路の制御機構

    小林孝安, 永浦裕子, 越後成志, 田村眞理

    日本生化学会東北支部第74回例会・シンポジウム　2008/05/17

  38. プロテインホスファターゼ２Ｃの多彩な機能

    小林孝安, 斉藤聡子, 逸見健明, 天野一宇, 草野理恵, 松井裕之, 永浦裕子, 田村眞理

    第30回日本分子生物学会年会・第80回日本生化学会大会合同大会　2007/12/11

  39. PP2CetaによるIL-1-kappaB経路に対する選択的抑制

    逸見健明, 天野一宇, 越後成志, 小林孝安, 田村眞理

    第30回日本分子生物学会年会・第80回日本生化学会大会合同大会　2007/12/11

  40. PP2CdeltaおよびPP2CepsilonによるROS誘導性アポトーシスの制御

    天野一宇, 永浦裕子, 逸見健明, 草野理恵, 小関健由, 一條秀憲, 小林孝安, 田村眞理

    第30回日本分子生物学会年会・第80回日本生化学会大会合同大会　2007/12/11

  41. The Magnitude and duration of cyclic Stretch Affect JNK and p38 Activation in MC3T3-E1 Pre-Osteoblastic Cells International-presentation

    松井裕之, 福野直人, 佐々木啓一, 鈴木治, 小林孝安, 田村眞理

    MHS2007&Micro-Nano COE　2007/11/11

  42. Dephosphorylation of ceramide transporter (CERT) by PP2Cε resulted in enhanced association between CERT and VAP-A.

    Satoko Saito, Shinri Tamura, Takayasu Kobayashi

    日本癌学会学術総会　2007/10/03

  43. Dephosphorylation of ceramide transporter (CERT) by PP2Cε resulted in enhanced association between CERT and VAP-A. International-presentation

    Satoko Saito, Hiroyuki Matsui, Takayasu Kobayashi, Shinri Tamura

    EuroPhosphatase Conference　2007/07/28

  44. メカニカルストレスによる骨芽細胞のストレス応答シグナル伝達経路の活性化と骨モデリングにおける意義

    松井裕之, 福野直人, 小林孝安, 鈴木治, 佐々木啓一, 田村眞理

    第4回東北大学バイオサイエンスシンポジウム　2007/06/04

  45. PP2Cεの新規の機能：PP2Cεは小胞体上でセラミド輸送タンパク質を脱リン酸化する

    斉藤聡子, 河野美由紀, 熊谷圭悟, 花田賢太郎, 越後成志, 田村眞理, 小林孝安

    日本生化学会東北支部例会　2007/05/12

  46. PP2Cεの新規の機能：PP2Cεは小胞体上でセラミド輸送タンパク質を脱リン酸化する

    斉藤聡子, 河野美由紀, 花田賢太郎, 越後成志, 田村眞理, 小林孝安

    日本プロティンホスファターゼ研究会第3回国内集会　2007/03/30

  47. RANKL/RANKシグナル伝達経路におけるPP2CbetaおよびPP2Cepsilonの役割

    三好信寛, 佐々木一洋, 小林孝安, 禹済泰, 永井和夫, 田村眞理, 大西素子

    日本プロティンホスファターゼ研究会第3回国内集会　2007/03/30

  48. プロティンホスファターゼ2Cファミリーによる細胞の生存と死の制御

    小林孝安, 一條秀憲, 田村眞理

    第65回日本癌学会学術総会　2006/09/28

  49. JNK regulates the BMP-pathway by binding to and phosphorylating the BMP receptor, BMP2 International-presentation

    Kudo T, Kobayashi t, Li MG, Ito M, Yoshioka K, Miyamto K, Ichijo H, Miyazono M, Tamura S

    Gordon Research Conferences on Growth Factor Signalling　2006/07/16

  50. Protein phosphatase 2Cbeta and epsilon suppress the RANKL/RANK signaling pathway International-presentation

    Miyoshi, N, Tamura, S, Kobayashi, T, Woo, J-T, Nagai, K, Ohnishi, M

    IUBMB 2006　2006/06/18

  51. Localization of PP2Cepsilon to ER and its association with VAPA. International-presentation

    Saito, S, Kusano, R, Saito, J, Matsui, H, Echigo, S, Tamura, S, Kobayashi, T

    IUBMB 2006　2006/06/18

  52. Possible involvement of PP2Cepsion in the regulation of cellular energy balance: A study of PP2Cepsion gene knockout mice International-presentation

    Kusano, R, Saito, S, Saito, J, Shimauchi, H, Watanabe, T, Matsui, Y, Kobayashi, T, Tamura, S

    IUBMB 2006　2006/06/18

  53. Regulation of the NF-kB pathway by ISG15 conjugation. International-presentation

    Takauchi, T, Kobayaashi, T, Tamura, S, Yokosawa, H

    IUBMB 2006　2006/06/18

  54. JNK regulates the BMP-Smad signaling pathway by binding to and phosphorylating the BMP receptor, BMPRII. International-presentation

    Kodo, T, Kobayashi, T, Li, M-G, Ito, M, Matsumoto, K, Ichijo, H, Tamura, S

    IUBMB 2006　2006/06/18

  55. PP2Cepsilonの細胞内局在とVAPAとの会合

    斉藤聡子, 松井裕之, 草野理恵, 斉藤淳一, 越後成志, 田村眞理, 小林孝安

    第3回東北大学バイオサイエンスシンポジウム　2006/05/29

  56. PP2CepsilonはAMPKの脱リン酸化を介してエネルギー代謝を制御する

    草野理恵, 斉藤聡子, 斉藤淳一, 島内英俊, 渡邊利雄, 松居靖久, 小林孝安, 田村眞理

    第3回東北大学バイオサイエンスシンポジウム　2006/05/29

  57. BMP受容体BMPRIIの翻訳後修飾によるBMPシグナル制御機構の解析

    工藤忠明, 小林孝安, 李明光, 伊藤道彦, 善岡克次, 松本邦弘, 一條秀憲, 宮園浩平, 田村眞理

    第3回東北大学バイオサイエンスシンポジウム　2006/05/29

  58. プロティンホスファターゼ2Cファミリーによるストレス応答シグナル伝達経路の制御

    小林孝安, 齋藤淳一, 鳥海晋之介, 田村眞理

    日本生化学会東北支部例会　2006/05/14

  59. JNKの新規核外基質の同定：PP2Czetaはストレス依存的にJNKによってリン酸化される

    粟野健二郎, 齋藤淳一, 鳥海晋之介, 越後成志, 田村眞理, 小林孝安

    第28回日本分子生物学会年会　2005/12/07

  60. Funtional regulation of BMP Receptor Type II by the BMP dependent ASK1 / JNK signaling

    工藤忠明, 小林孝安, 逸見健明, 伊藤道彦, 吉岡克次, 松本邦宏, 一條秀憲, 宮園浩平, 田村眞理

    第78回日本生化学会大会　2005/10/19

  61. PP2CzetaおよびPP2Cepsilonによるストレス応答シグナル伝達路の制御メカニズム

    小林孝安, 齋藤淳一, 鳥海晋之介, 粟野健二郎, 田村眞理

    第2回日本プロティンホスファターゼ研究会　2005/08/03

  62. マウスプロテインホスファターゼ2Cbeta (PP2Cbeta)遺伝子は初期発生に必須である

    佐々木雅人, 大西素子, 田代 文, 丹羽仁史, 宮崎純一, 小林孝安, 田村眞理

    第2回日本プロティンホスファターゼ研究会　2005/08/03

  63. JNKはBMP receptorII Ｃ末端領域に結合しリン酸化によりその機能を調節する

    工藤忠明, 小林孝安, 逸見健明, 一條秀憲, 宮園浩平, 田村眞理

    BMP研究会　2005/07/24

  64. PP2Cdelta Acts as a Positive Regulator of the TNFalpha-ASK1 Signaling Pathway International-presentation

    Toriumi S, Saito J, Awano K, Shimauchi H, kobAyashi T, Tamura S

    EuroPhosphatase 2005　2005/07/08

  65. JNKの新規核外基質の同定 PP2Czetaはストレス依存的にJNKによりリン酸化される

    粟野健二郎, 佐々木雅人, 斉藤淳一, 鳥海晋之介, 越後成志, 田村眞理, 小林孝安

    第2回東北大学バイオサイエンスシンポジウム　2005/05/14

  66. プロティンホスファターゼによるSAPK情報伝達経路の制御

    小林孝安

    第34回東北大学加齢医学研究所シンポジウム　2005/02/24

  67. PP2CepsikonによるASK1シグナル伝達路の制御機能

    斉藤淳一, 鳥海晋之介, 佐々木雅人, 粟野健二郎, 草野理恵, 一條秀憲, 佐々木啓一, 小林孝安, 田村眞理

    第27回日本分子生物学会年会　2004/12/08

  68. プロティンホスファターゼ2CdeltaによるSAPKシグナル伝達路の制御機能

    鳥海晋之介, 斉藤淳一, 佐々木雅人, 粟野健二郎, 斉藤聡子, 金子裕史, 島内英俊, 小林孝安, 田村眞理

    第27日本分子生物学会年会　2004/12/08

  69. Spatial regulation of the JNK signaling pathway by BMP receptor II.

    工藤忠明, 小林孝安, 李明光, 伊藤道彦, 善岡克次, 一條秀憲, 宮園浩平, 田村眞理

    第27回日本分子生物学会年会　2004/12/08

  70. 多重シグナル伝達経路によるプロティンホスファターゼPP2Czetaのリン酸化の制御

    粟野健二郎, 小林孝安, 佐々木雅人, 斉藤淳一, 鳥海晋之介, 越後成志, 田村眞理

    第77回日本生化学会大会　2004/10/13

  71. BMPレセプターIIによるJNKシグナル伝達経路の空間的制御

    工藤忠明, 小林孝安, 一條秀憲, 宮園浩平, 田村眞理

    第63日本癌学会学術総会　2004/09/10

  72. 多機能バイオシグナリングモジュールとしてのストレス応答シグナル伝達路の制御機構

    田村眞理, 工藤忠明, 李明光, 佐々木雅人, 小林孝安

    第1回東北大学バイオサイエンスシンポジウム　2004/05/14

  73. BMPレセプターIIによるJNKシグナル伝達経路の空間的制御

    工藤忠明, 小林孝安, 田村眞理

    第1回東北大学バイオサイエンスシンポジウム　2004/05/14

  74. BMPレセプターIIによるJNKシグナル伝達経路の空間的制御

    工藤忠明, 小林孝安, 田村眞理

    東北大学バイオサイエンスシンポジウム　2004/05/14

  75. Elucidation of physiological function of protein phosphatase 2Cbeta International-presentation

    Sasaki M, Li MG, Toriumi S, Saito J, Kobayashi T, Tamura S

    6th International Conference on Protein Phosphatases　2004/02/10

  76. 新規PP2Cbeta欠損マウスおよびPP2CbetaノックダウンES細胞の解析

    佐々木雅人, 大西素子, 田代文, 丹羽仁史, 宮崎純一, 小林孝安, 田村眞理

    第26回日本分子生物学会年会　2003/12/05

  77. Regulation of the IL1-induced signaling pathways by a novel member of protein phosphatase 2C family(PP2Cepsilon).

    李明光, 鳥海晋之介, 斉藤淳一, 小林孝安, 田村眞理

    第76回日本生化学会大会　2003/10/15

  78. P19胚性腫瘍細胞の神経分化誘導の制御機構

    小林孝安, 田村眞理

    第62回日本癌学会学術総会　2003/09/20

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Research Projects 25

  1. 糖鎖工学基盤に基づいたコンドロイチン硫酸による神経分化促進機構の解明

    柿崎 育子, 小林 孝安, 山口 真範

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 基盤研究(B)

    Institution: 弘前大学

    2022/04/01 - 2025/03/31

    More details Close

    本研究では，コンドロイチン硫酸のE構造によって神経細胞への分化がなぜ促進されるか，コンドロイチン硫酸鎖中にE構造がどのように配置することが分化促進に重要であるかを明らかにすることを目的としている。そのために，今年度は，以下の計画を実施した。 １）E構造による神経細胞への分化促進に関わる分子の探索：幹細胞の性質をもつマウス胚性腫瘍細胞株P19細胞に対し，all-trans-レチノイン酸で神経系細胞へと分化誘導した。この分化のモデル培養系にコンドロイチン硫酸Eを添加して，各タイムポイントで細胞から調製したRNA試料を用いて実施したDNAマイクロアレイの結果より、E構造依存性に発現が変動した遺伝子群をピックアップした。発現変動が認められた分子およびその下流でシグナル伝達に関わる分子について，定量的リアルタイムPCR ，イムノブロット，などの分析法で裏付けを行った。DNAマイクロアレイの結果から予想された細胞内のシグナル伝達経路に関与する分子に対し，イムノブロット法を用いてタンパク質レベルでの発現変動とリン酸化の変動についての解析を行った。 ２）E構造をもつ解析ツールの作製：分化促進に必要なE構造のコンドロイチン硫酸鎖中での配置を調べるために，解析ツールとしてのコンドロイチン硫酸誘導体を作製した。これまでの実験結果から，受容体との結合にはある程度の糖鎖長が必要であることが推定されたので，酵素を用いた糖鎖工学技術により，長い糖鎖の末端にまずはE構造よりも難易度の低い構造のコンドロイチン硫酸糖鎖を導入した。作製したコンドロイチン硫酸誘導体の分離条件と構造の評価法を決定した。一方で，E構造を固定した分化促進用の培養デバイスの作製を目指し，まずはE構造よりも難易度の低い構造の糖鎖の培養基材への固定の条件検討を行った。化学的な固定反応後の培養基材の分析により，基材表面に確かに糖鎖が固定されていることが証明された。

  2. 糖鎖工学基盤に基づいたコンドロイチン硫酸による神経分化促進機構の解明

    柿崎 育子, 小林 孝安, 山口 真範

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 基盤研究(B)

    Institution: 弘前大学

    2022/04/01 - 2025/03/31

  3. 脂肪酸合成を支配する転写因子SREBP-1cの新たな制御メカニズムの解明

    小林 孝安

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 基盤研究(C)

    Institution: 東北大学

    2019/04/01 - 2023/03/31

    More details Close

    本年度は、昨年度の成果を元に実験を行い以下のような成果を得た。 （1）酵母2HYBスクリーニングでPPM1Lと会合すると考えられる部位(ヒトSREBP1cの341-535 残基)には、AMPKによるリン酸化され活性抑制に関与するSer残基(Ser372)と、GSK3 beta依存性にリン酸化され、E3リガーゼFbw7依存性タンパク質分解に関与するThrおよびSer残基（Thr402およびSer406）が含まれている。あらかじめdual-specificity tyrosine phosphorylated and regulated protein kinase2 (DYRK2)でリン酸化させた後、GSK3betaによる反応を行うことにより最大限にリン酸化レベルを亢進させたSREBP1タンパク質を、昆虫細胞で発現させたマウスPPM1Lで処理したところ、脱リン酸化が観察された。一方、活性を持たない変異体（D302A）では脱リン酸化が観察されなかった。 (2) PPM1Lの細胞における機能を明らかにする一端として、いくつかの培養細胞株においてCRISPR/Cas9法を用いてノックアウト（KO）細胞を作製し、これまでHEK293細胞のKO細胞の細胞培養ディッシュへの接着性が野生株と比較し亢進していることを見出していたが、WB法にて細胞と細胞外マトリックスの結合に関わる接着因子であるインテグリンの発現を調べたところ、KO細胞において複数のインテグリン分子の発現が亢進していることが明らかとなった。この発現上昇はKO細胞にPPM1Lを発現させると消失した。このことよりPPM1Lがインテグリンの発現の調節に関わっていることが示唆された。

  4. Mechanism involved in resistance to diet-induced obesity observed in protein phosphatase PPM1L knockout mice.

    Kobayashi Takayasu

    Offer Organization: Japan Society for the Promotion of Science

    System: Grants-in-Aid for Scientific Research

    Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

    Institution: Tohoku University

    2015/04/01 - 2018/03/31

    More details Close

    Obesity is major risk factor for diabetes and cardiovascular diseases. In an earlier study using quantitative trait loci (QTL) analysis in mice, protein phosphatase Ppm1l was identified as a gene connected to obesity and other metabolic syndrome traits (Chen et al, 2008), but the underlying mechanism remains unclear. PPM1L-KO mice were protected against high fat diet-induced obesity. This was partly due to diminished food intake. PPM1L-KO mice exhibit morphological abnormalities in the central nerve system including reduction of striatum, corpus callosum and anterior commissure, suggesting that defect of neural network in CNS may result in reduced appetite. Using recently described proximity-dependent biotin labeling (BioID) technique, a number of nuclear envelope associated proteins were identified as interacting partner of PPM1L.

  5. Targeted disruption of the mouse protein phosphatase PPM1L gene leads to structural abnormalities in the brain.

    Tamura Shinri, KOBAYASHI TAKAYASU

    Offer Organization: Japan Society for the Promotion of Science

    System: Grants-in-Aid for Scientific Research

    Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

    Institution: Tohoku University

    2013/04/01 - 2016/03/31

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    To explore function of protein phosphatase PPM1L in vivo, we disrupted the mouse gene by gene targeting. The mutant mice were backcrossed with two different inbred strains (C57/BL6 and CBA), but only homozygous mutant mice on CBA background survived to adulthood. The PPM1L-/- mice showed impaired fine motor coordination and balance in the beam walking assay while Y-maze test did not reveal any specific alterations in their learning memory. Histological analyses revealed that PPM1L-/- mice exhibit morphological abnormalities in the central nerve system including reduction of striatum, corpus callosum and anterior commissure. Histochemical analyses suggest that these structural abnormalities are caused by failure of elongation of axons but not by cell death of neurons. These results suggest that PPM1L may play important role during neural development.

  6. Mechanism of regulation of ER stress sensor by protein phosphatases

    KOBAYASHI Takayasu

    Offer Organization: Japan Society for the Promotion of Science

    System: Grants-in-Aid for Scientific Research

    Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

    Institution: Tohoku University

    2012/04/01 - 2015/03/31

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    PPM1L (formerly PP2Cε) was originally identified as a negative regulator of stress-activated protein kinase signaling pathways, in which PPM1L represses the activity of TGFβ-activated kinase 1 (TAK1) and apoptosis regulating kinase 1 (ASK1), two mitogen-activated protein kinase kinase kinases. Recently, I demonstrated that PPM1L is an endoplasmic reticulum (ER)-resident transmembrane protein and obtained the evidence that it is involved in regulation of transfer of ceramide between ER and Golgi. In this project, I examined whether PPM1L was involved in regulation of ER stress response. Overexpression of PPM1L in cells reduced ER-stress dependent phosphorylation of ER stress sensor IRE1. However, knockdown of PPM1L did not affect level of phosphorylation of IRE1. These results suggested that other protein phosphatase(s) may be involved in regulation of ER stress response.

  7. Regulation of stress activated protein kinase pathway by protein phosphatase 2C

    TAMURA Shinri, KOBAYASHI Takayasu

    Offer Organization: Japan Society for the Promotion of Science

    System: Grants-in-Aid for Scientific Research

    Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

    Institution: Tohoku University

    2010 - 2012

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    In this study we identified acyl CoA binding domain containing 3 (ACBD3) as a binding partner of PPM1L and suggested that ACBD3 recruits PPM1L to the ER-Golgi membrane contact site. We also demonstrated that PPM1L interacts with GOLD(Golgi dynamics) domain that exists in several proteins involved in Golgi function.

  8. 小胞体ストレス応答制御の分子メカニズム

    小林 孝安

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 基盤研究(C)

    Institution: 東北大学

    2010 - 2012

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    小胞体ストレスが、糖尿病、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症などの発症や病態進行に関わることが明らかにされている。小胞体ストレスを感知するセンサーのうち、IRE1とPERKは、膜貫通型のプロテインキナーゼで、活性化に分子間自己リン酸化が必要である。活性化されたこれらのセンサーは、転写因子を介して適応反応を誘導し、小胞体の恒常性を保つよう働く。 本研究課題では、小胞体ストレス応答制御におけるプロテインホスファターゼの役割について検討を行い、これまでに小胞体に存在するPP2Cε(PPM1L)が、哺乳動物に存在する3種類の小胞体ストレスセンサーのうちIRE1を特異的に脱リン酸化することを見出した。また、PP2Cεは小胞体に局在するscaffoldタンパク質であるVAPAを介してIRE1に結合することも見出した。プロテインホスファターゼ2C （Protein phosphatase 2C, PP2C）ファミリーは、真核生物のセリン・スレオニンホスファターゼで、哺乳動物においては、14種類のPP2C遺伝子が同定されている。それぞれのメンバーは、ユニークな非触媒ドメインを持ち、異なった基質特異性や細胞内局在を示す。PP2CのメンバーであるPP2Cεは、膜貫通ドメインを持つ膜タンパク質で、細胞質側に触媒ドメインを配した形で小胞体膜に局在するという、セリン・スレオニンホスファターゼとしては、大変ユニークな存在様式を持っている。これらの知見に基づき細胞レベル、動物個体レベルでの意義をさらに深く明らかにすることは、小胞体ストレスの制御メカニズムを明らかにする上で意義があると考えられた。

  9. メカニカルストレスによる骨組織のリモデリングの分子機構

    田村 眞理, 小林 孝安

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 特定領域研究

    Institution: 東北大学

    2008 - 2009

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    メカニカルストレスは骨代謝に必須の役割を果たしており、骨形成および骨吸収両者の制御因子である。しかし、メカニカルストレスが生化学的情報として受容される機構や、細胞内シグナル伝達およびそのアウトプットについての詳細は未だ不明な点が多い。我々はこれまでにメカニカルストレスにより、ASK1(a MAPKKK)/JNK経路を介してFn14が、ASK1/p38経路を介してMCP-3が発現誘導を受けていることを明らかにしてきた。今回さらに別のMAPKKKであるTAK1を介する経路が活性化されていることを見出した。阻害剤やsiRNAを用いた実験から、TAK1がメカニカルストレス負荷による細胞内へのCaイオン流入によりCaMKIIを介して活性化され、さらにその下流ではJNK、p38及びNF-kappaBの少なくとも3経路が活性化されることが明らかになった。また、活性化されたJNK、p38及びNF-kappaBが協調的に、サイトカインIL-6の発現誘導を促すことを見出した。さらに、メカニカルストレスにより、前述のFn14、MCP-3を含め様々な炎症関連遺伝子の発現誘導が引き起こされるが、これらの発現誘導にもTAK1経由が関与していることが明らかになりつつある。IL-6、Fn14及びMCP-3はいずれも破骨細胞の分化を誘導する作用を示すことが示唆されており、これらの結果から、ASK1と同様にTAK1が骨リモデリングの制御因子としての役割を担うことが示唆された。

  10. 癌細胞の生存と死の制御機構

    田村 眞理, 小林 孝安

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 特定領域研究

    Institution: 東北大学

    2008 - 2009

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    プロテインホスファターゼ2C(PP2C)は、真核生物の主要なセリン・スレオニンホスファターゼファミリーの一つで、哺乳動物では14種類のPP2C遺伝子が確認されている。ストレス応答シグナル伝達路(SAPK経路)はMKKK、MKKおよびSAPK(JNK及びp38)による三段階の連続したリン酸化反応からなるカスケードで、活性化されたSAPKが転写因子を始めとするさまざまなタンパク質のリン酸化を介して、細胞の増殖や分化など多様な細胞応答を引き起こす。このシグナル経路が適切に作動するには、各段階におけるリン酸化による活性化とプロテインボスファターゼによる負の制御のバランスが必須であるが、PP2Cファミリーのメンバーは、負の制御因子として重要な役割を担っていることが明らかとされている。 PP2CファミリーのメンバーであるPP2Cζ(zeta)は、JNKやp38によってリン酸化されうるセリン・プロリン(SP)/スレオニン・プロリン(TP)配列が複数集中した特徴的な領域を有している。このことより、JNKやp38の基質となる可能性を考え、まずin vitroにおいてリン酸化を受けるかを検討したところ、PP2CζがJNKの良い基質となることが明らかとなった。リン酸化部位は、質量分析および変異体を用いた実験によりSer92とThr205と同定された。これらの部位は、培養細胞での強制発現系においても、ストレス依存的にJNKによってリン酸化された。続いて、これらのリン酸化がPP2Cζの機能に与える影響を検討した結果、Ser^<92>のリン酸化がボスファターゼ活性の抑制を引き起こすことが明らかとなった。PP2Cファミリーの多くが転写制御という比較的long termの制御を受けていることが分かっているが、本研究はPP2Cが翻訳後修飾というshort termの制御を受ける初めての例を示したものである。

  11. メカニカルストレスに対する骨組織応答の分子機構

    田村 眞理, 小林 孝安

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 特定領域研究

    Institution: 東北大学

    2006 - 2007

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    骨組織への適度のメカニカルストレスの負荷は、骨芽細胞の増殖、分化及び骨基質の産生を誘導し、骨組織のリモデリングに重要な役割を果たすことが知られている。我々は培養骨芽細胞に加えるメカニカルストレスが、骨組織のリモデリング関連のシグナル伝達や遺伝子の発現に与える影響について検討を行ってきた。これまでに、培養骨芽細胞(MC3T3E1細胞)に様々な強度の伸展刺激を負荷し、SAPKシステムの構成因子であるJNK及びp38の活性化に与える影響について検討を行った。その結果、伸展刺激の強度や持続時間によって、JNK及びp38が異なった活性化パターンを示すことを見出した。伸展率12%の場合、刺激開始後5分でJNKとp38の活性化が観察されるが、JNKの活性化は、刺激に伴う細胞外からのCa^<2+>の流入がMAPKKKファミリーの一員であるASK1を活性化し、これが下流のMKK4を活性化することにより誘導されることが示された。しかしながら同時に起こるp38の活性化は、JNKの活性化とは異なる機構によることが示唆された。さらに、伸展率4%の場合にだけ特異的に、刺激開始後120分にp38の活性化が観察されたが、この時、JNKの活性化は見られなかった。これらの結果から、刺激の強度や持続時間の違いによって、異なったパターンで活性化されるJNKやp38の下流で、それぞれ、固有の遺伝子群の転写制御が誘導され、骨組織のリモデリングに様々な影響を与える可能性が示唆された。そこで、この点を検証するためにマイクロアレイを用いて、それぞれの刺激条件下で、JNKやp38の下流でおこる遺伝子発現の変動の網羅的な解析に着手した。これまでの予備的な解析の結果、伸展率12%の刺激開始後5分で観察されるJNKあるいはp38の活性化の下流で発現が誘導される遺伝子群は、相互に大幅に異なっていることが示唆された。

  12. プロテインホスファターゼ2Cによる癌細胞死の制御

    田村 眞理, 小林 孝安

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 特定領域研究

    Institution: 東北大学

    2006 - 2007

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    癌細胞の特異な形質である無限増殖能を支える分子基盤の一つとして、細胞の生と死の制御システムの破綻が挙げられる。細胞の生存と死の制御には様々なシグナル伝達システムが関与しているが、その中でストレス応答プロテインキナーゼシグナル伝達路(SAPKシステム)は細胞のアポトーシス誘導のシステムとして主要な役割を担っている。我々は、SAPKシステムの破綻が細胞の癌化を引き起こすことに着目し、SAPKシステムの多様な制御機構の解明が細胞の癌化のメカニズムの理解につながるとの視点に立って、主にプロテインホスファターゼ2CファミリーによるSAPKシステムの制御機構についての研究を進めてきた。TNFαやH_2O_2によって誘導されるアポトーシスシグナルはSAPKシステムを構成するMKKKの一種であるASK1を介して下流に伝達されることが既に報告されている。本研究で我々は、PP2CδとPP2Cεが、それぞれ、ASK1の活性化および不活性化因子としての役割を担う事を見出した。しかも、無刺激状態ではPP2CεがASK1と会合し、脱リン酸化によりASK1を不活性な状態に維持するが、TNFα刺激によりPP2CεがASK1から解離し、これに代わってPP2Cδが会合することによりASK1が活性化されることを示す結果を得た。これらの結果は、PP2CεとPP2CδがSAPKシステムの時間的制御に関わることを示唆している。

  13. Regulation of stress-activated protein kinase signaling pathway by protein phosphatase 2C (PP2C)

    KOBAYASHI Takayasu, TAMURA Shinri

    Offer Organization: Japan Society for the Promotion of Science

    System: Grants-in-Aid for Scientific Research

    Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

    Institution: Tohoku University

    2002 - 2006

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    (1) PP2Cε precipitates in negative regulation of TAK1 and ASK1 Ectopic expression of PP2Cε in mammalian cells represses the activity of TAK1 and ASK1, two mitogen-activated protein kinase kinase kinases. PP2Cε keeps these kinases in an inactive state in quiescent cells by associating with and dephosphorylating them. PP2Cε associated with TAK1 and ASK1 in quiescent cells, but the association was transiently suppressed in response to treatment of the cells with IL-1 and H_2_O_2, respectively, which activate these respective kinases. On the basis of these results we proposed that PP2Cε regulates TAK1 and ASK1 pathways by a common regulatory mechanism. (2) PP2Cδ (ILKAP) participates in positive regulation of ASK1 In contrast to PP2Cε, PP2Cδ (ILKAP) acts as a positive regulator of TNF induced SAPK signaling. Transient expression of PP2Cδ (ILKAP) in 293 cells enhanced TNF induced activation of JNK and p38. PP2Cδ (ILKAP) associated with ASK1 and this association was enhanced in response to TNF treatment. These results suggested that PP2Cδ (ILKAP) may dephosphorylate inhibitory phosphorylation site(s) of ASK1. (3) JNK negatively regulates PP2Cζ PP2Cζ, a PP2C family member that is enriched in testicular germ cells, is phosphorylated at Ser92 and Thr202/205 by JNK but not by p38 or ERK both in vivo and in vitro. We show that phosphorylation of PP2Cζ at Ser92 but not at Thr202/205 repressed its phosphatase activity.

  14. Molecular mechanisms of response of living body to environmental stress

    TAMURA Shinri, KOBAYASHI Takayasu

    Offer Organization: Japan Society for the Promotion of Science

    System: Grants-in-Aid for Scientific Research

    Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)

    Institution: Tohoku University

    2002 - 2004

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    1.We investigated the role(s) of PP2Cε in the regulation of IL-1 signaling pathways. Ectopic expression of PP2Cε inhibited the IL-1-and TAK1-induced activation of mitogen-activated protein kinase kinase 4 (MKK4)-c-Jun N-terminal kinase or MKK3-p38 signaling pathway. PP2Cε dephosphorylated TAK1 in vitro. Co-immunoprecipitation experiments indicated that PP2Cε associates stably with TAK1 and attenuates the binding of TAK1 to MKK4 or MKK6. Ectopic expression of a phosphatase-negative mutant of PP2Cε, PP2Cε (D/A), which acted as a dominant negative form, enhanced both the association between TAK1 and MKK4 or MKK6 and the TAK1-induced activation of an AP-1 reporter gene. The association between PP2Cε and TAK1 was transiently suppressed by IL-1 treatment of the cells. Taken together, these results suggest that, in the absence of IL-1-induced signal, PP2Cε contributes to keeping the TAK1 signaling pathway in an inactive state by associating with and dephosphorylating TAK1. 2.We investigated the physiologic functions of PP2Cβ using a gene knockout technique in mice. We found that most PP2Cβ^<Δ/Δ> embryos die between the two-and eight-cell stages, whereas PP2Cβ^<Δ/Δ> ES cells are viable, suggesting that relatively high PP2Cβ expression is required for the early stages of pre-implantation development. PP2Cβ knockdown studies using ES cells revealed that serum-induced activation of p38, but not JNK, ERK, or Akt, was enhanced further by decreased PP2Cβ expression. Since p38 has been implicated in the negative regulation of mitosis in early pre-implantation embryos, these observations raise the possibility that cell division at early cleavage stages might be severely disturbed due to the enhanced activity of p38 in PP2Cβ^<Δ/Δ> embryos. 3.We have shown that BMPRII, a BMP type II receptor, associates with JNK through its unique carboxyl-terminal region, which contains a putative JNK binding domain. BMPRII was also able to bind to MKK4, MKK7 and ASK1. BMP2 treatment of cells induced the recruitment of JNK to BMPRII and activated the ASK1 signaling module associated with BMPRII. These results suggest that BMPRII participates in the spatial regulation of the ASK1-JNK signaling pathway as a cell-membrane associated scaffolding protein.

  15. P19胚性腫瘍細胞分化誘導のシグナル伝達路

    田村 眞理, 小林 孝安

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 特定領域研究

    Institution: 東北大学

    2002 - 2004

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    1.我々はこれまで、P19細胞の神経分化の過程で、TAK1-MKK4-JNKシグナル伝達路の活性化が必須の役割を果たすこと及びPP2Cεが分化の抑制因子としての役割を担うことを報告してきた。今回、分化の過程で、TAK1の活性化因子のTAB1とTAB2が、それぞれ、細胞質及び細胞核においてTAK1の活性化を担うことを示唆する結果を得た。また、JNKの核外における機能を探索し、BMPRIIの細胞内のC末領域がASK1-MKK4/7-JNKと会合することを見出した。 2.神経分化過程において、セリン/スレオニン残基のリン酸化レベルが変動するタンパク質として同定されたyes associated protein (YAP)ついての解析を行った結果、分化誘導前はYAPのセリン残基がリン酸化されているが、分化誘導刺激により急速にリン酸化レベルが低下することが判明した。 3.我々がP19細胞の内胚葉分化に必須の役割を果たすシグナリング分子として同定したSKAP55Rが、分化誘導刺激後24時間以内にその作用を発揮すること及びSKAP55Rのチロシン残基のリン酸化が分化誘導に伴って亢進することを見出した。

  16. Role of serum and glucocorticoid-regulated protein kinase (SGK) on insulin signaling pathway

    KOBAYASHI Takayasu

    Offer Organization: Japan Society for the Promotion of Science

    System: Grants-in-Aid for Scientific Research

    Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

    Institution: Tohoku University

    2001 - 2002

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    1. Identification of SGK1 interacting protein In order to identify protein(s) which interact with SGK1, two hybrid screen was carried out using human brain cDNA library. Adaptor protein Mint2 which possesses two PDZ domains and phosphotyrosine binding domain (PBD) was identified. SGK1 interacted with PDZ domain which exists at C-terminal but not with N-terminal PDZ domain and PBD. The interaction of SGK1 and Mint2 proteins was increased by treatment of cells with hydrogen peroxide, one of the activator of SGK1. 2. Involvement of SGK isoforms in regulation of K+ channels SGK1 was originally identified as a glucocoticoid sensitive gene. Subsequently SGK1 was shown to activate ion channels including K+ channel. Recently two homologous kinases, SGK2 and SGK3 have been cloned. To elucidate the role of SGK isoforms on regulation of K+ channel, effect of expression of these isoforms on electrical properties of renal epithelial cells. Transfection of SGK1, SGK2 or SGK3 increased the voltage-gated K+ current indicating strong stimulating effect of all three isoforms of SGK on K.+ channels.

  17. PP2CによるSAPKシグナル伝達路の制御機構

    田村 眞理, 小林 孝安

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 特定領域研究(C)

    Institution: 東北大学

    2001 - 2001

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    目的 SAPKシグナル伝達路は細胞の分化、アポトーシスやストレス応答に関わる主要なシグナル伝達路である。SAPKシステムは少なくとも3段階の連続したプロテインキナーゼ反応により構成されるが、それぞれのステップにおいて、プロテインホスファターゼによる負の制御を受ける事により、システム全体としての精緻な調節が行われると考えられる。本研究ではSAPKシグナル伝達路のプロテインホスファターゼによる制御機構を解明することを目的とする。具体的には、プロテインホスファターゼ2Cβ(PP2Cβ)欠損ES細胞を用いた解析により、PP2CβのSAPKシステムの制御因子としての生理的意義を明らかにすることを目的とする。さらに、最近我々がクローニングに成功した3つの新規のPP2CファミリーメンバーがSAPKシステムの制御に関わる可能性について検討する。 結果 PP2Cβ欠損ES細胞を用いた解析 SAPRKシグナル伝達路におけるPP2Cβの生理的意義を詳細に解析する目的で、PP2Cβ遺伝子を破壊したES細胞を作製した。ES細胞の野生株とPP2Cβ(-/-)株にアニソマイシンやUVによるストレスを負荷し、内因性のMKK4のリン酸化レベルを比較したところ、いずれのストレス刺激の場合もPP2Cβ(-/-)株のMKK4のリン酸化レベルは野生株に比べて亢進していた。ES細胞の解析と並行させて、PP2Cβ遺伝子ノックアウトマウスの作製も進めてきたが、これまでにgerm line transmissionが確認された。 新規PP2C遺伝子のクローニングと解析 ESTクローニングにより3種類の新規のPP2Cファミリーメンバー(ε,ζ,η)をコードするcDNAを単利した。これらのクローンのORFはいずれもPP2Cファミリー特有のモチーフを有しており、大腸菌で発現させたリコンビナントタンパク質はいずれもMg^<2+>/Mn^<2+>依存性でオカダ酸抵抗性のホスファターゼ活性を示した。293細胞における発現システムを用いて、IL-1依存性のSAPKシステムの活性に対するPP2Cε,ζ,ηの影響を調べたところ、ηにおいてPP2Cβと同様の抑制効果を観察した。

  18. Molecular mechanism of response of living body to environmental stress

    TAMURA Shinri, KOBAYASHI Takayasu, HIRAGA Akira, TAKAI Toshiyuki

    Offer Organization: Japan Society for the Promotion of Science

    System: Grants-in-Aid for Scientific Research

    Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)

    Institution: Tohoku University

    1998 - 2001

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    Protein phosphatase 2C (PP2C) is implicated in the negative regulation of tress-activated protein kinase (SAPK) cascades in yeast and mammalian cells. In this study, we determined the role of PP2Cβ-1, a major isoform of mammalian PP2C, in the TAK1 signaling pathway, a SAPK cascade that is activated by interleukin-1 (IL-1), transforming growth factor-β or stress. Ectopic expression of PP2Cβ-1 inhibited the TAK1-mediated mitogen-activated protein kinase kinase 4 (MKK4)-c-Jun N-terminal kinase (JNK) and MKK6-p38 signaling pathways. In vitro, PP2Cβ-1 dephosphorylated and inactivated TAK1. Co-immunoprecipitation experiments indicated that PP2Cβ-1 associates with the central region of TAK1. A phosphatase-negative mutant of PP2Cβ-1, PP2Cβ-1(R/G), acted as a dominant negative mutant, inhibiting dephosphorylation of TAK1 by wild-type PP2Cβ-1 in vitro. In addition, ectopic expression of PP2Cβ-1(R/G) enhanced IL-1-induced activation of an AP-1 reporter gene. Collectively, these results indicate that PP2Cβ negatively regulates the TAK1 signaling pathway by direct dephosphorylation of TAK1.

  19. PP2CによるSAPKシグナル伝達路の制御機構

    田村 眞理, 小林 孝安, 平賀 章

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 特定領域研究(C)

    Institution: 東北大学

    2000 - 2000

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    SAPKシグナル伝達路は細胞の分化、アポトーシスやストレス応答に関わる主要なシグナル伝達路である。我々はこれまで、プロテインホスファターゼによるSAPKシステムの制御機構の解明を目的に研究を進め、プロテインホスファターゼ2Cβ(PP2Cβ)がMAPKKKの一種であるTAK1と会合し、これを直接脱リン酸化して不活性化することにより、下流へのシグナルの流れを抑制することを報告した。これを受けて本研究では、PP2CβとTAK1の会合の特異性について検討し、さらに、PP2Cβのドミナントネガティブ型がTAK1シグナル伝達路に与える影響について検討を加えた。 まず、PP2Cβがリン酸化型のTAK1にのみ結合するのか否かを検討する為に、TAK1の自己リン酸化部位のセリンを他のアミノ酸に置換した変異体を293細胞で発現させ、PP2Cβとの会合の有無を免疫共沈の手法で調べたところ、変異体TAK1も野生型と同様にPP2Cβと会合することが判明した。次に、PP2CβとTAK1の会合の特異性について検討したところ、PP2Cのもう一方のアイソフォームであるPP2CαはTAK1とは会合せず、また、TAK1以外のSAPKシステムの構成因子(MEKK3、MKK4、MKK6、JNKおよびp38)はPP2Cβと会合しないことが判明した。293細胞のIL-1刺激によりTAK1の活性化を介してAP1およびNFκBの活性化が起こることが報告されている。そこで、PP2CβがIL-1によるAP1およびNFκBの活性化に影響を与えるか否かをレポーター遺伝子を用いて検討したところ、PP2Cβの発現によって、いずれの活性化も部分的に抑制された。さらに、PP2Cβのドミナントネガティブ変異体はIL-1によるAP1の活性化をさらに上昇させることが判明した。

  20. マウス精母細胞におけるプロテインホスファターゼ2Cの特異的発現の意義

    田村 眞理, 小林 孝安

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 重点領域研究

    Institution: 東北大学

    1996 - 1996

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    我々はこれまでに、PP2Cには6種類のアイソフォーム(α, β-1, β-2, β-3, β-4およびβ-5)が存在することを明らかにした。これからのうちαとβは異なった遺伝子産物であり、βの5種類のアイソフォームは単一のpre-mRNAからの選択的スプライシングの産物である。また,これまでの研究の結果,マウス精巣の第1減数分裂パキテン期の精母細胞において、PP2Cβ-3, -4および-5の発現が著しく上昇することが明らかになった。そこで、今回、精母細胞におけるPP2Cβ遺伝子の発現制御機構の解明を目的に、PP2CβゲノムDNAのクローンングと構造解析およびRT-PCRを用いた転写産物の解析を行った。その結果、翻訳開始点を含むエクソン(IV)の上流に3つのエクソン(I, II, III,)が存在し、新生児マウス精巣(精巣細胞のみを含む)ではIIVを含む転写産物のみが検出されたのに対し、成獣マウス精巣の転写産物では、II, III, IVエクソンの読みとりが行われた。さらに、Iエクソンの上流には構成的発現に関与すると考えられるプロモーター活性が検出された。以上の結果から、IIエクソンの上流に精巣特異的発現に関わるプロモーターが存在することが示唆され、現在その解析を進めている。 PP2Cの6種類のアイソフォームの機能の解析を目的に、HAタッグをPP2CのN末端に付加したキメラタンパク質のCOS7細胞での発現システムを確立した。抗HA抗体による免疫染色により、発現されたPP2Cの細胞内局在を調べたところ、いずれのアイソフォームも、主に細胞核い局在することが判明した。また、6種類のアイソフォームのうちPP2Cαのみが細胞内でリン酸化され、その部位がC末端領域のセリン残基であること、および、PP2Cαのリン酸化レベルが、培養中に添加したオカダ酸によって2倍に上昇することが明らかになった。以上のことから、PP2Cαを介する新規の脱リン酸カスケードの存在が示唆された。

  21. Joint Study on the Mechanism of Insulin Action

    TAMURA Shinri, ABE Sumiko, YANAGAWA Yuchio, KOBAYASHI Takayasu, COHEN Philip, LYNCH Kevin.R, LARNER Joseph

    Offer Organization: Japan Society for the Promotion of Science

    System: Grants-in-Aid for Scientific Research

    Category: Grant-in-Aid for international Scientific Research

    Institution: Tohoku University

    1995 - 1996

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    In this study we performed a biochemical study on the elucidation of the domain structure of PP2C molecule and on the effect of chyloinositol glycan (CIG), which has been proposed to be an insulin mediator by Dr.Joseph Larner of University of Virginia and other groups, on the enzyme activities of the PP2C isoforms and the mutant molecules derived from PP2Cbeta-1. We constructed the plasmids of the wild type of PP2C isoforms and the various deletion mutants and point mutants of PP2Cbeta-1 for expression in E.coli cells. We purified the rocombinant proteins from the E.coli cell extracts and determined the protein phosphatase activities. Deletion of up to 78 amino acids from the carboxy-terminal end did not affect the enzyme activity, whereas deletion of 100 amino acids totally eliminated the activity. On the other hand, deletion of 11 amino acids from the amino-terminal end caused a 97% loss of enzyme activity and further deletions caused a total loss of activity. Substitution of any of the 6 specific amino acids (E38, E60, H62, R179, R200 and E243) among the 16 tested in this study caused 98-100% loss of enzyme activity. These observations suggested that PP2Cbeta is composed of at least two distinct functional domains, an amino-terminal catalytic domain of about 310 amino acids and the remaining carboxy-terminal domain, which is involved in determination of substrate specificity. Then, we determined the effect of CIG on the enzyme activities of wild type PP2C isoforms and the deletion mutants and point mutants. It is has been established that a high concentration (Ka for Mg^<2+>,1mM) of Mg^<2+> is required for the standard assay of PP2C activity. However, full activity was obtained even if the Mg^<2+> concentration was as low as 50muM when CIG was co-present in the assay mixture. This stimulatory effct of CIG was observed with all the six PP2C isoforms. The presence of CIG stimulated the activities of the deletion mutants and the point mutants as far as they had Mg^<2+> -dependent protein phosphatase activities. However, the mutants, which did no have Mg^<2+> -dependent activity, did not show any activity even in the presence of CIG.These results suggest that CIG acts as an activator of PP2C isoforms and that the point of action of CIG is in the catalytic domain of PP2C molecule.

  22. 新しいスクリーニング法を用いたタンパク質リン酸化・脱リン酸化の調節機構の解明

    小林 孝安

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 奨励研究(A)

    Institution: 東北大学

    1995 - 1995

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    哺乳類のタンパク質ホスファターゼ2C型(以下PP2Cと略す)を大腸菌で過剰発現させると、おそらく大腸菌の2-コンポーネントシステムで重要なヒスチジン残基が脱リン酸化されるために生育が著しく阻害される。本研究の目的は、この性質を利用してtwo-hybridsystemに代わる相互作用タンパク質の新しいスクリーニング法を開発することである。しかしながら、実際に試みてみた結果、本法に関して次のような問題点があることが分った。 (1)本法は過剰発現させたPP2Cによる阻害作用を抑圧するような第二の遺伝子を導入することによってPP2Cを生理的に阻害しているタンパク質を見いだそうとするものであった。しかしながらPP2Cを大腸菌で発現された場合、大部分のtransformantの生育は阻害されるもののある頻度で生育が阻害されずコロニーを形成するようなものが出てきてしまった。従って本法が円滑に施行されるためには完全にコロニー形成が抑制されるような宿主の選択が必要と考えられる。 (2)第二の問題点は、宿主として組み換え不能なrecA株を用いているにも関わらず、第二のプラスミドを導入したのちに、あらかじめ導入しておいた発現ベクターとの間で組み換えを起こしてしまう点にある。その結果PP2Cの発現量が低下してコロニーを形成し、偽のコロニーを形成してしまうことが分かった。この場合も第一の問題点と同様、宿主の育成とともに適切なプラスミドの設計が不可欠である。 以上の問題点を克服すべくさらに検討を進めている。

  23. 高発現致死ミュータントを用いたタンパク質リン酸化・脱リン酸化の解析

    小林 孝安

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 奨励研究(A)

    Institution: 東北大学

    1994 - 1994

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    プロテインホスファターゼ2C(PP2C)発現プラスミドを持った酵母細胞にUVを生存率が40%となるように照射し変異処理を施した。これをPP2C非発現条件でコロニーを形成させたのち、PP2Cの発現を誘導する寒天プレートにレプリカしその生育を観察したところ、PP2C非発現条件下では成育できるが、PP2C発現条件では生育できなくなったクローンが6個得られた(PP2C高発現致死ミュータント)。次に、これらを野生株と接合させ、2倍体を形成し、その表現形を観察したところ、そのうちの1個が優性変異であり、残りの5個は、劣性変異であることがわかった。そこで劣性変異である5個のクローンをお互いに接合させたところ、5個はそれぞれ別の相補群に属することがわかった。得られたクローンの一つ(♯36)は、ホモで接合させると胞子形成異常を示した。同クローンはグリセロールを炭素源とした培地で正常に生育することから、単なる呼吸系の欠損ではないと思われ、現在同クローンについてPP2C発現条件下での生育を指標として、その遺伝子をクローニングすることを試みている。すなわち、遺伝子ライブラリーを導入したのち、PP2C発現条件下で生育できる株を選択することにより、目的とする遺伝子を得られると考えられる。

  24. 分化・増殖の制御におけるプロテインホスファターゼ2Cの機能に関する細胞工学的解析

    田村 眞理, 小林 孝安

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: 重点領域研究

    Institution: 東北大学

    1994 - 1994

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    我々はこれまでに、ラット及びマウスのPP2CαcDNA、およびマウスPP2Cβの5種類のイソフォーム(PP2Cβ-1,-2,-3,-4および-5)をコードするcDNAを単離し、それらの解析を行ってきた。その結果、PP2CαおよびPP2Cβは異なった遺伝子産物であること、およびPP2Cβの5種類のイソフォームは、単一のpre-mRNAからの選択的スプライシングによって生ずることが判明した。それらのスプライシング部位は同じであり、スプライシングの結果生ずる5種類のイソフォームは、C末端の十数個のアミノ酸配列のみが異なっていた。 ノーザン解析の結果、PP2CαおよびPP2Cβ-1のmRNAシグナルは、マウスの諸臓器に普遍的に発現していた。これに対し、PP2Cβ-2は脳と心筋のみに、またPP2Cβ-3,-4および-5は精巣と小腸のみに選択的に発現していた。特異抗体を用いたマウス脳の免疫組織染色の結果、PP2CαおよびPP2Cβ-1はニューロンとグリアの両方に発現しているのに対し、PP2Cβ-2はニューロンにのみ発現していることが明らかとなった。また、マウス胚性幹細胞や胚性始原生殖細胞では、PP2Cβ-1のmRNAシグナルが強いのに対し、PP2Cβ-3,-4および-5のシグナルは極めて低レベルであった。これに対し、精巣では、それらのシグナルの強度が逆転していた。さらに精巣のin situハイブリダイゼーションの結果、PP2Cβ-3,-4および-5のシグナルは、精細管内部の生殖細胞に検出された。以上の結果から、これらのイソフォームは精子形成の制御に関わっている可能性が示唆された。

  25. 骨格筋細胞の分化におけるタンパク質ホスファターゼの機能

    田村 眞理, 小林 孝安, 近藤 尚武

    Offer Organization: 日本学術振興会

    System: 科学研究費助成事業

    Category: がん特別研究

    Institution: 東北大学

    1992 - 1992

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    1.タイプ2C_βプロテインホスファターゼcDNAのクローニング。 今回我々は、タイプ2Cプロテインホスファターゼ(PP2C)の2つのサブタイプ(2C_αおよび2C_β)のうち、2C_βの全長をコードするマウスcDNAクローン(pTK-1)を単離した、pTK-1は390個のアミノ酸より成るタンパク質をコードしており、活性なタンパク質の大腸菌での発現にも成功した。またノーザン解折の結果、pTK-1とハイブリダイズする2種類のmPNA(3.5kbおよび3.0kb)がマウスの各種臓器に普通的に観察されたが、比較的、脳、心臓および骨格筋で発現量が多かった。またP19細胞がレチノイン酸処理によって神経細胞に分化する過程で、特に、3.5kbのmRNAの量の増加が観察された。骨格筋の分化過程における、これらのmRNAの量的変動の有無については現在検討中である。 2.タイプ2C_αプロテインホスファターゼのリン酸化。 酵母細胞をPP2C_αの発現ベクターでトランスフォームし、 ^<32>Piでインオンベートしたところ、発現されたPP2C_αのセリン残基のリン酸化が観察された。一方精製したPP2C_αをカゼインキナーゼIIでリン酸化させたところ、PP2C_α1モルあたり1.5モルのリン酸を取り込みが観察された。リン酸化アミノ酸はセリンであった。さらにリン酸化ペプチドマッピングにより、in vivoおよびin vivitroでのリン酸化部位は同一であることが強く示唆された。以上の結果から、PP2C_αは酵母細胞内でカゼインキナーゼIIによりリン酸化された可能性が示唆された。PP2C_αのリン酸化の生理的意味については現在検討中である。

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