研究者詳細

顔写真

フクシゲ　シンイチ
福重　真一
Shinichi Fukushige
所属
大学院医学系研究科　医科学専攻　内科病態学講座（糖尿病代謝・内分泌内科学分野）
職名
特任教授（研究）
学位

  • 博士(医学) （大阪大学）

学歴 1

  • 大阪大学　医学研究科　生理系

    ～ 1988年3月

委員歴 4

  • International Journal of Molecular Sciences　編集委員

    2020年10月 ～ 継続中

  • Scientifica　編集委員

    2012年1月 ～ 継続中

  • Epigenetic Diagnosis & Therapy　編集委員

    2014年3月 ～ 2018年12月

  • Genetics Research International　編集委員

    2010年6月 ～ 2015年12月

所属学協会 3

  • アメリカ癌学会(2000/04-)

  • 日本分子生物学会(1985/08-)

  • 日本癌学会(1996/03-)

研究キーワード 2

  • DNAミスマッチ修復

  • エピジェネティクスと発がん

研究分野 1

  • ライフサイエンス / 実験病理学 / 分子生物学

受賞 2

  1. 平成２３年度東北大学医学部奨学賞金賞

    2012年1月13日　東北大学医学部　癌におけるDNA高度メチル化を指標とするバイオマーカーの探索

  2. 宮城県医師会医学奨励賞

    2012年1月4日　宮城県医師会

論文 96

  1. Association between NLRP3 Inflammasome and Tumor-Node-Metastasis Staging in Prostate Cancer: Immunohistochemical Studies of Prostate Needle Biopsy and Radical Prostatectomy Specimens. 査読有り

    Toshiya Miyauchi, Shintaro Narita, Yuriko Saiki, Yukitsugu Kudo-Asabe, Akira Horii, Shinichi Fukushige, Tomonori Habuchi, Hiroshi Nanjo, Akiteru Goto

    The Tohoku journal of experimental medicine　2024年8月1日

    DOI： 10.1620/tjem.2024.J074 　

  2. TWIST1 is a prognostic factor for neoadjuvant chemotherapy for patients with resectable pancreatic cancer: a preliminary study. 査読有り

    Sho Fujiwara, Yuriko Saiki, Shinichi Fukushige, Mie Yamanaka, Masaharu Ishida, Fuyuhiko Motoi, Michiaki Unno, Akira Horii

    Surgery today　2023年2月10日

    DOI： 10.1007/s00595-023-02655-3 　

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    Recent advances in the development of chemotherapies have helped improve the prognosis of pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC). However, predicting factors for the outcomes of chemotherapies (either gemcitabine or S-1) have not yet been established. We analyzed the expression of 4 major epithelial-to-mesenchymal transition-inducing transcription factors in 38 PDAC patients who received adjuvant chemotherapy after radical resection to examine the association with patients' prognoses. The TWIST1-positive group showed a significantly poorer prognosis than the TWIST1-negative group for both the relapse-free survival (median survival time [MST] of 8.9 vs. 18.5 months, P = 0.016) and the overall survival (MST of 15.2 vs. 33.4 months, P = 0.023). A multivariate analysis revealed that TWIST1 positivity was an independent prognostic factor for a poor response to adjuvant chemotherapies (hazard ratio 2.61; 95% confidence interval 1.10-6.79; P = 0.029). These results suggest that TWIST1 can be utilized as an important poor prognostic factor for radically resected PDAC patients with adjuvant chemotherapy, potentially including neoadjuvant therapy using these agents.

  3. Long Non-Coding RNAs Associated with Mitogen-Activated Protein Kinase in Human Pancreatic Cancer 査読有り

    Tomohiko Ishikawa, Shinichi Fukushige, Yuriko Saiki, Katsuya Hirose, Takako Hiyoshi, Takenori Ogawa, Yukio Katori, Toru Furukawa

    Cancers　15　(1)　303-303　2023年1月2日

    出版者・発行元： MDPI AG

    DOI： 10.3390/cancers15010303 　

    eISSN：2072-6694

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    Long non-coding RNAs (lncRNAs) have emerged as a significant player in various cancers, including pancreatic cancer. However, how lncRNAs are aberrantly expressed in cancers is largely unknown. We hypothesized that lncRNAs would be regulated by signaling pathways and contribute to malignant phenotypes of cancer. In this study, to understand the significance of mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinase (MAPK/ERK), which is a major aberrant signaling pathway in pancreatic cancer, for the expression of lncRNAs, we performed comparative transcriptome analyses between pancreatic cancer cell lines with or without activation of MAPK. We identified 45 lncRNAs presumably associated with MAPK in pancreatic cancer cells; among these, LINC00941 was consistently upregulated by MAPK. The immediate genomic upstream region flanking LINC00941 was identified as a promoter region, the activity of which was found to be preferentially associated with MAPK activity via ETS-1 binding site. LINC00941 promoted cell proliferation in vitro. Moreover, TCGA data analysis indicated that high expression of LINC00941 was associated with poor prognosis of patients with pancreatic cancer. Transcriptomes comparing transcriptions between cells with and without LINC00941 knockdown revealed 3229 differentially expressed genes involved in 44 biological processes, including the glycoprotein biosynthetic process, beta-catenin-TCF complex assembly, and histone modification. These results indicate that MAPK mediates the aberrant expression of lncRNAs. LINC00941 is the lncRNA by MAPK most consistently promoted, and is implicated in the dismal prognosis of pancreatic cancer. MAPK-associated lncRNAs may play pivotal roles in malignant phenotypes of pancreatic cancer, and as such might represent both potentially valid therapeutic targets and diagnostic biomarkers.

  4. Combination therapy of lymphatic drug delivery and total-body irradiation in a metastatic lymph node and lung mouse model. 国際誌 査読有り

    Shota Sora, Ariunbuyan Sukhbaatar, Shinichi Fukushige, Shiro Mori, Maya Sakamoto, Tetsuya Kodama

    Cancer science　2022年9月3日

    DOI： 10.1111/cas.15562 　

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    Chemotherapy using a lymphatic drug delivery system (LDDS) targeting lymph nodes (LNs) in the early stage of metastasis has a superior antitumor effect to systemic chemotherapy. LDDS produces a higher drug retention rate and tissue selectivity in LNs. To expand the therapeutic coverage of LDDS from local treatment of metastatic LNs to prevention of distant metastases, the combination of treatment with therapies that enhance systemic tumor immune effects is an important therapeutic strategy. Recently, low-dose total-body irradiation (TBI) has been shown to activate immune responses and alter the tumor microenvironment. Here we show that combination therapy with TBI and LDDS improves the antitumor effect of metastatic LNs and lung metastasis. Tumor cells were inoculated into the subiliac LN to induce metastasis into the mouse proper axillary LN (PALN) and lung. Total-body irradiation was conducted on day 4 after inoculation using a gamma irradiator. LDDS was administrated into the accessory axillary LN to treat PALN. In vivo bioluminescence imaging system, high-frequency ultrasound system, and histology showed that combination therapy using TBI (total dose 1.0 Gy once) and the LDDS suppressed tumor growth in LNs and lung metastases and was more effective than using LDDS or TBI alone. Quantitative RT-PCR of spleens after combination therapy revealed increased expression of CD4, CD8, and IL-12b, indicating an activated immune response. The results show that combination therapy with TBI and LDDS is a method to improve the efficacy of LN metastases and distant metastases therapy and is a promising novel approach to treat cancer patients.

  5. Development of a system combining comprehensive genotyping and organoid cultures for identifying and testing genotype-oriented personalised medicine for pancreatobiliary cancers 国際誌 査読有り

    Masahiro Shiihara, Tomohiko Ishikawa, Yuriko Saiki, Yuko Omori, Katsuya Hirose, Shinichi Fukushige, Naoki Ikari, Ryota Higuchi, Masakazu Yamamoto, Takanori Morikawa, Kei Nakagawa, Hiroki Hayashi, Masamichi Mizuma, Hideo Ohtsuka, Fuyuhiko Motoi, Michiaki Unno, Yasunobu Okamura, Kengo Kinoshita, Toru Furukawa

    European Journal of Cancer　148　239-250　2021年5月

    出版者・発行元： Elsevier BV

    DOI： 10.1016/j.ejca.2021.01.047 　

    ISSN：0959-8049

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    BACKGROUND: Pancreatobiliary cancer is a highly aggressive tumour with a dismal prognosis. Personalised medicine represents a promising and effective therapeutic approach for this intractable disease. In this study, we aimed to establish a system for identifying and testing genotype-oriented targeted drugs for pancreatobiliary cancers by combining exome sequencing and organoid culture of primary tumours. METHODS: Tumour cells isolated from resected tumours were subjected to organoid cultures based on published protocols with modifications. Exome sequencing was performed on the primary tumours. Histopathological and molecular features of the primary tumours were validated in the corresponding organoids. Genotype-oriented candidate targeted drugs were identified from exome sequencing, and their efficacies were tested in the organoids. RESULTS: Organoid cultures succeeded in 30 of 54 (55.6%) cases. Six primary cancers of the biliary tract and gall bladder were subjected to exome sequencing, which revealed a variety of somatic mutations of genes involved in signalling pathways, epigenetic modifiers, genome maintenance and metabolic enzymes. Most of the organoids of these 6 cases showed identical histopathological features and genomic aberrations as those of the primary tumours. Some of the aberrations were candidates for targeted therapies. Integrin-linked kinase (ILK) was one such candidate target, and an ILK inhibitor was confirmed to suppress proliferation of patient-derived organoids. CONCLUSIONS: By combining exome sequencing and organoid culture, our model enabled to identify genotype-oriented targets for personalised medicine and to test efficacies of candidate targeted drugs in the organoids. The current proof-of-concept approach could increase therapeutic opportunities for patients with pancreatobiliary cancers.

  6. Aberrant Hypermethylation-Mediated Suppression of PYCARD Is Extremely Frequent in Prostate Cancer with Gleason Score ≥ 7. 国際誌 査読有り

    Toshiya Miyauchi, Masahiro Takahashi, Koji Mitsuzuka, Yuriko Saiki, Teppei Okubo, Paula M Vertino, Akiteru Goto, Yoichi Arai, Akira Horii, Shinichi Fukushige

    Disease Markers　2021　8858905-8858905　2021年

    DOI： 10.1155/2021/8858905 　

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    Epigenetic gene silencing by aberrant DNA methylation leads to loss of key cellular pathways in tumorigenesis. In order to analyze the effects of DNA methylation on prostate cancer, we established LNCaP-derived human prostate cancer cells that can pharmacologically induce global reactivation of hypermethylated genes by the methyl-CpG targeted transcriptional activation (MeTA) method. The MeTA suppressed the growth of LNCaP-derived cells and induced apoptosis. Microarray analysis indicated that PYCARD (PYD and CARD domain containing) encoding an apoptosis-inducing factor was upregulated by 65-fold or more after treatment with MeTA. We analyzed DNA methylation statuses using 50 microdissected primary prostate cancer tissues and found an extremely high frequency of tumor-specific promoter hypermethylation of PYCARD (90%, 45/50). Moreover, DNA methylation status was significantly associated with Gleason score (P = 0.0063); the frequency of tumor-specific hypermethylation was 96% (44/46) in tumors with Gleason score ≥ 7, whereas that in tumors with Gleason score 6 was 25% (1/4). Immunohistochemical analyses using these 50 cases indicated that only 8% (4/50) of cancerous tissues expressed PYCARD, whereas 80% (40/50) of corresponding normal prostate epithelial and/or basal cells expressed PYCARD. In addition, there was no relationship between PYCARD immunostaining and the Gleason score in cancerous tissue and surrounding normal tissue. Inducible expression of PYCARD inhibited cell proliferation by induction of apoptosis. These results suggest that aberrant methylation of PYCARD is a distinctive feature of prostate cancers with Gleason score ≥ 7 and may play an important role in escaping from apoptosis in prostatic tumorigenesis.

  7. Epigenetic inactivation of IRX4 is responsible for acceleration of cell growth in human pancreatic cancer. 国際誌 査読有り

    Kanchan Chakma, Zhaodi Gu, Yakefujiang Abudurexiti, Tatsuo Hata, Fuyuhiko Motoi, Michiaki Unno, Akira Horii, Shinichi Fukushige

    Cancer Science　111　(12)　4594-4604　2020年9月7日

    DOI： 10.1111/cas.14644 　

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    Epigenetic gene silencing by aberrant DNA methylation is one of the important mechanisms leading to loss of key cellular pathways in tumorigenesis. Methyl-CpG targeted transcriptional activation (MeTA) reactivates hypermethylation-mediated silenced genes in a different way from DNA demethylating agents. Microarray coupled with MeTA (MeTA-array) identified seven commonly hypermethylation-mediated silenced genes in 12 pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) cell lines. Among these, we focused on IRX4 (Iroquois homeobox 4) because IRX4 is located at chromosome 5p15.33 where one of PDAC susceptibility loci has been identified through genome-wide association study. IRX4 was greatly downregulated in all of the analyzed 12 PDAC cell lines by promoter hypermethylation. In addition, the IRX4 promoter region was found to be frequently and specifically hypermethylated in primary resected PDACs (18/28: 64%). Re-expression of IRX4 inhibited colony formation and proliferation in two PDAC cell lines, PK-1 and PK-9. In contrast, knockdown of IRX4 accelerated cell proliferation in an IRX4-expressing normal pancreatic ductal epithelial cell line, HPDE-1. Because IRX4 is a sequence-specific transcription factor, downstream molecules of IRX4 were pursued by microarray analyses utilizing tetracycline-mediated IRX4 inducible PK-1 and PK-9 cells; CRYAB, CD69, and IL32 were identified as IRX4-downstream candidate genes. Forced expression of these genes suppressed colony formation abilities for both PK-1 and PK-9. These results suggest that DNA methylation-mediated silencing of IRX4 contributes to pancreatic tumorigenesis through aberrant transcriptional regulation of several cancer-related genes.

  8. Methylation-mediated silencing of the LIM homeobox 6 (LHX6) gene promotes cell proliferation in human pancreatic cancer. 国際誌 査読有り

    Yakefujiang Abudurexiti, Zhaodi Gu, Kanchan Chakma, Tatsuo Hata, Fuyuhiko Motoi, Michiaki Unno, Akira Horii, Shinichi Fukushige

    Biochemical and Biophysical Research Communications　526　(3)　626-632　2020年4月2日

    DOI： 10.1016/j.bbrc.2020.03.120 　

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    Epigenetic gene silencing by aberrant DNA methylation leads to loss of key cellular pathways in tumorigenesis. DNA methylation-mediated silenced genes in pancreatic cancer were searched for using the methyl-CpG targeted transcriptional activation (MeTA) method, and LHX6 (LIM homeobox 6), a transcription factor involved in embryogenesis and head development, was selected as a strong candidate gene. LHX6 was downregulated in most of the pancreatic cancer cell lines (83%, 10/12), mainly through promoter hypermethylation and histone deacetylation. Furthermore, LHX6 was methylated in primary pancreatic cancer specimens (57%, 16/28) in a tumor-specific manner. Re-expression of LHX6 inhibited colony formation and proliferation in LHX6 low-expressing pancreatic cancer cell lines, PK-1 and PK-9. In contrast, knockdown of LHX6 accelerated cell proliferation in LHX6 high-expressing pancreatic cancer cell lines, PCI-35 and MIA PaCa-2. In order to analyze LHX6 downstream genes, we performed microarray analyses using LHX6 inducible PK-1 and PK-9 and found that LHX6 induction upregulated several genes that had tumor suppressive functions. Among these, we focused on TFPI2 (Tissue factor pathway inhibitor-2) and found that TFPI2 was greatly downregulated in all twelve pancreatic cancer cell lines. Our present results suggest that epigenetic inactivation of LHX6 plays an important role in pancreatic tumorigenesis by promoting cell proliferation through aberrant transcriptional regulation of several cancer-related genes.

  9. CD45+CD326+ Cells are Predictive of Poor Prognosis in Non-Small Cell Lung Cancer Patients. 国際誌 査読有り

    Kota Ishizawa, Mie Yamanaka, Yuriko Saiki, Eisaku Miyauchi, Shinichi Fukushige, Tetsuya Akaishi, Atsuko Asao, Takahiro Mimori, Ryota Saito, Yutaka Tojo, Riu Yamashita, Michiaki Abe, Akira Sakurada, Nhu-An Pham, Ming Li, Yoshinori Okada, Tadashi Ishii, Naoto Ishii, Seiichi Kobayashi, Masao Nagasaki, Masakazu Ichinose, Ming-Sound Tsao, Akira Horii

    Clinical cancer research : an official journal of the American Association for Cancer Research　25　(22)　6756-6763　2019年11月15日

    DOI： 10.1158/1078-0432.CCR-19-0545 　

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    PURPOSE: The epithelial-to-mesenchymal transition, the major process by which some cancer cells convert from an epithelial phenotype to a mesenchymal one, has been suggested to drive chemo-resistance and/or metastasis in patients with cancer. However, only a few studies have demonstrated the presence of CD45/CD326 doubly-positive cells (CD45/CD326 DPC) in cancer. We deployed a combination of cell surface markers to elucidate the phenotypic heterogeneity in non-small cell lung cancer (NSCLC) cells and identified a new subpopulation that is doubly-positive for epithelial and non-epithelial cell-surface markers in both NSCLC cells and patients' malignant pleural effusions. EXPERIMENTAL DESIGN: We procured a total of 39 patients' samples, solid fresh lung cancer tissues from 21 patients and malignant pleural effusion samples from 18 others, and used FACS and fluorescence microscopy to check their surface markers. We also examined the EGFR mutations in patients with known acquired EGFR mutations. RESULTS: Our data revealed that 0.4% to 17.9% of the solid tumor tissue cells and a higher percentage of malignant pleural effusion cells harbored CD45/CD326 DPC expressing both epithelial and nonepithelial surface markers. We selected 3 EGFR mutation patients and genetically confirmed that the newly identified cell population really originated from cancer cells. We also found that higher proportions of CD45/CD326 DPC are significantly associated with poor prognosis. CONCLUSIONS: In conclusion, varying percentages of CD45/CD326 DPC exist in both solid cancer tissue and malignant pleural effusion in patients with NSCLC. This CD45/CD326 doubly-positive subpopulation can be an important key to clinical management of patients with NSCLC.

  10. Expression of SNAIL in accompanying PanIN is a key prognostic indicator in pancreatic ductal adenocarcinomas. 国際誌 査読有り

    Fujiwara S, Saiki Y, Ishizawa K, Fukushige S, Yamanaka M, Sato M, Ishida M, Motoi F, Unno M, Horii A.

    Cancer Med　8　(4)　1671-1678　2019年

    DOI： 10.1002/cam4.2016 　

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    Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is the most lethal cancer, mainly because of its invasive and metastatic characteristics. Pancreatic intraepithelial neoplasia (PanIN) is one of the major precursor lesions of PDAC. Although epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) is known to play an important role for these malignant behaviors, the association between PanIN and EMT has not been clearly understood. Therefore, we explored possible molecules for regulation of EMT immunohistochemically. Using surgically resected specimens from 71 PDAC patients, expressions of SNAIL, SLUG, TWIST1, and ZEB1 were investigated in high-grade PanIN (HG-PanIN) and PDAC. Results demonstrated that PDAC accompanied by SNAIL-positive HG-PanIN showed a significantly better relapse-free survival (RFS) (median survival time (MST) of 11.3 months vs 4.4 months, P < 0.001) and overall survival overall survival (OS) (MST of 25.2 months vs 13.6 months, P < 0.001). In PDAC accompanied by SLUG-positive HG-PanIN, RFS and OS (P = 0.09 and P = 0.05) tended to have a better prognosis. In contrast, we could not find any significant prognostic benefits in the expression of TWIST1 or ZEB1 in PDAC accompanied by HG-PanIN. Our present results suggest that (1) EMT may play an important role in the development of PDAC from HG-PanIN, and (2) SNAIL may predict a distinct subgroup that shows a better prognosis.

  11. S100A10 upregulation associates with poor prognosis in lung squamous cell carcinoma. 査読有り

    Sato K, Saiki Y, Arai K, Ishizawa K, Fukushige S, Aoki K, Abe J, Takahashi S, Sato I, Sakurada A, Okada Y, Horii A.

    Biochem Biophys Res Commun　505　466-470　2018年9月

  12. NDRG2, suppressed expression associates with poor prognosis in pancreatic cancer, is hypermethylated in the second promoter in human gastrointestinal cancers 査読有り

    Akihiro Yamamura, Koh Miura, Hideaki Karasawa, Fuyuhiko Motoi, Yasuhiko Mizuguchi, Yuriko Saiki, Shinichi Fukushige, Makoto Sunamura, Chikashi Shibata, Michiaki Unno, Akira Horii

    BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS　484　(1)　138-143　2017年2月

    DOI： 10.1016/j.bbrc.2017.01.055 　

    ISSN：0006-291X

    eISSN：1090-2104

  13. Atrial natriuretic peptide induces peroxisome proliferator activated receptor γ during cardiac ischemia-reperfusion in swine heart. 査読有り

    Tomoyuki Suzuki, Yuriko Saiki, Akira Horii, Shinichi Fukushige, Shunsuke Kawamoto, Osamu Adachi, Masatoshi Akiyama, Koki Ito, Naoki Masaki, Yoshikatsu Saiki

    General thoracic and cardiovascular surgery　65　(2)　85-95　2017年2月

    DOI： 10.1007/s11748-016-0704-6 　

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    OBJECTIVES: Atrial natriuretic peptide is a cardiac atrium-derived hormone and its cardioprotective effects have recently been confirmed, but the actual mechanism underlying these effects has not been well elucidated. In this study, we proposed that atrial natriuretic peptide achieves its effects in part via peroxisome proliferator activated receptor γ, a nuclear receptor. METHODS: Hemodynamic data in swine heart ischemia-reperfusion model were measured under the conditions of no medication for control (Group N, n = 8) or that of carperitide (synthetic human atrial natriuretic peptide) systemic administration (Group A, n = 8). After 30 min of left anterior descending artery total occlusion and 4 h of reperfusion, peroxisome proliferator activated receptor γ mRNA and protein expressions in cardiac muscle were examined. The mRNA expression of Liver X receptor α, the downstream agent of peroxisome proliferator activated receptor γ, was also evaluated. Creatine kinase-myocardial band and Troponin T elevations after reperfusion were evaluated as markers of cardiac damage. RESULTS: The dP/dT decrease during reperfusion was ameliorated in Group A. Peroxisome proliferator activated receptor γ mRNA expression in Group A was significantly higher in ischemic area than that in Group N, although the difference was not significant in the marginal and non-ischemic areas. The peroxisome proliferator activated receptor γ protein expression in ischemic area was also significantly dominant in Group A. CONCLUSIONS: Atrial natriuretic peptide may achieve its cardioprotective effects in part via the activation of the peroxisome proliferator activated receptor γ pathway, particularly in central areas of ischemic lesions.

  14. Targeted TET oxidase activity through methyl-CpG-binding domain extensively suppresses cancer cell proliferation 査読有り

    Yasuhiko Mizuguchi, Yuriko Saiki, Akira Horii, Shinichi Fukushige

    CANCER MEDICINE　5　(9)　2522-2533　2016年9月

    DOI： 10.1002/cam4.830 　

    ISSN：2045-7634

  15. Single-dose rosuvastatin ameliorates lung ischemia-reperfusion injury via upregulation of endothelial nitric oxide synthase and inhibition of macrophage infiltration in rats with pulmonary hypertension 査読有り

    Satoshi Matsuo, Yuriko Saiki, Osamu Adachi, Shunsuke Kawamoto, Shinichi Fukushige, Akira Horii, Yoshikatsu Saiki

    JOURNAL OF THORACIC AND CARDIOVASCULAR SURGERY　149　(3)　902-909　2015年3月

    DOI： 10.1016/j.jtcvs.2014.10.030 　

    ISSN：0022-5223

    eISSN：1097-685X

  16. DNA methylation as a biomarker in cancer 招待有り 査読有り

    Shinichi Fukushige, Akira Horii

    Biomarkers in Disease: Methods, Discoveries and Applications: Biomarkers in Cancer　107-133　2015年1月1日

    出版者・発行元： Springer Netherlands

    DOI： 10.1007/978-94-007-7681-4_45 　

  17. Technological advances in epigenomics lead to a better understanding of inflammatory diseases, decitabine and H3K27me3. 国際誌 招待有り 査読有り

    Shinichi Fukushige, Akira Horii

    Epigenomics　7　(2)　133-6　2015年

    出版者・発行元： Future Medicine Ltd.

    DOI： 10.2217/epi.14.90 　

    ISSN：1750-192X 1750-1911

  18. S100A4 is frequently overexpressed in lung cancer cells and promotes cell growth and cell motility 査読有り

    Na Chen, Daisuke Sato, Yuriko Saiki, Makoto Sunamura, Shinichi Fukushige, Akira Horii

    BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS　447　(3)　459-464　2014年5月

    DOI： 10.1016/j.bbrc.2014.04.025 　

    ISSN：0006-291X

    eISSN：1090-2104

  19. Road to early detection of pancreatic cancer: Attempts to utilize epigenetic biomarkers 招待有り 査読有り

    Shinichi Fukushige, Akira Horii

    CANCER LETTERS　342　(2)　231-237　2014年1月

    DOI： 10.1016/j.canlet.2012.03.022 　

    ISSN：0304-3835

    eISSN：1872-7980

  20. Suppressed expression of NDRG2 correlates with poor prognosis in pancreatic cancer 査読有り

    Akihiro Yamamura, Koh Miura, Hideaki Karasawa, Kazuhiro Morishita, Keiko Abe, Yasuhiko Mizuguchi, Yuriko Saiki, Shinichi Fukushige, Naoyuki Kaneko, Tomohiko Sase, Hiroki Nagase, Makoto Sunamura, Fuyuhiko Motoi, Shinichi Egawa, Chikashi Shibata, Michiaki Unno, Iwao Sasaki, Akira Horii

    Biochemical and Biophysical Research Communications　441　(1)　102-107　2013年11月8日

    DOI： 10.1016/j.bbrc.2013.10.010 　

    ISSN：0006-291X 1090-2104

  21. DNA methylation in cancer: a gene silencing mechanism and the clinical potential of its biomarkers. 招待有り 査読有り

    Shinichi Fukushige, Akira Horii

    The Tohoku Journal of Experimental Medicine　229　(3)　173-85　2013年3月

    DOI： 10.1620/tjem.229.173 　

    ISSN：0040-8727

    eISSN：1349-3329

  22. S100A4, frequently overexpressed in various human cancers, accelerates cell motility in pancreatic cancer cells 査読有り

    Hitoshi Sekine, Na Chen, Keisuke Sato, Yuriko Saiki, Yuki Yoshino, Yukiko Umetsu, Guo Jin, Hiroki Nagase, Zhaodi Gu, Shinichi Fukushige, Makoto Sunamura, Akira Horii

    BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS　429　(3-4)　214-219　2012年12月

    DOI： 10.1016/j.bbrc.2012.10.048 　

    ISSN：0006-291X

  23. miR-34a is downregulated in cis-diamminedichloroplatinum treated sinonasal squamous cell carcinoma patients with poor prognosis 査読有り

    Takenori Ogawa, Yuriko Saiki, Kiyoto Shiga, Na Chen, Shinichi Fukushige, Makoto Sunamura, Hiroki Nagase, Sho Hashimoto, Kazuto Matsuura, Shigeru Saijo, Toshimitsu Kobayashi, Akira Horii

    CANCER SCIENCE　103　(9)　1737-1743　2012年9月

    DOI： 10.1111/j.1349-7006.2012.02338.x 　

    ISSN：1347-9032

  24. DCK is frequently inactivated in acquired gemcitabine-resistant human cancer cells 査読有り

    Yuriko Saiki, Yuki Yoshino, Hiroko Fujimura, Tatsuya Manabe, Yuki Kudo, Miki Shimada, Nariyasu Mano, Tomohiro Nakano, Yoonha Lee, Shinjiro Shimizu, Shinya Oba, Sho Fujiwara, Hideyuki Shimizu, Na Chen, Zhaleh Kashkouli Nezhad, Guo Jin, Shinichi Fukushige, Makoto Sunamura, Masaharu Ishida, Fuyuhiko Motoi, Shinichi Egawa, Michiaki Unno, Akira Horii

    BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS　421　(1)　98-104　2012年4月

    DOI： 10.1016/j.bbrc.2012.03.122 　

    ISSN：0006-291X

  25. Identification of epigenetically silenced genes in human pancreatic cancer by a novel method "microarray coupled with methyl-CpG targeted transcriptional activation" (MeTA-array) 査読有り

    Hideyuki Shimizu, Akira Horii, Makoto Sunamura, Fuyuhiko Motoi, Shinichi Egawa, Michiaki Unno, Shinichi Fukushige

    BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS　411　(1)　162-167　2011年7月

    DOI： 10.1016/j.bbrc.2011.06.121 　

    ISSN：0006-291X

  26. Microarray coupled with methyl-CpG targeted transcriptional activation (MeTA-array) identifies hypermethylated genes containing the stringent criteria of CpG islands at high frequency 査読有り

    Yuko Sato, Akira Horii, Shinichi Fukushige

    EPIGENETICS　6　(6)　752-759　2011年6月

    DOI： 10.4161/epi.6.6.15906 　

    ISSN：1559-2294

  27. Methyl-CpG targeted recruitment of p300 reactivates tumor suppressor genes in human cancer cells 査読有り

    Shinichi Fukushige, Emiko Kondo, Akira Horii

    BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS　379　(4)　1021-1026　2009年2月

    DOI： 10.1016/j.bbrc.2009.01.010 　

    ISSN：0006-291X

  28. Methyl-CpG targeted transcriptional activation allows re-expression of tumor suppressor genes in human cancer cells 査読有り

    Shinichi Fukushige, Emiko Kondo, Akira Horii

    BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS　377　(2)　600-605　2008年12月

    DOI： 10.1016/j.bbrc.2008.10.016 　

    ISSN：0006-291X

  29. Involvement of CREM in CYP1A1 induction through ligand-independent activation pathway of aryl hydrocarbon receptor in HepG2 cells 査読有り

    Eriko Sasamori, Shuji Shimoyama, Shinichi Fukushige, Hideaki Kikuchi

    ARCHIVES OF BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS　478　(1)　26-35　2008年10月

    DOI： 10.1016/j.abb.2008.07.021 　

    ISSN：0003-9861

  30. The interplay between hMLH1 and hMRE11: Role in MMR and the effect of hMLH1 mutations 査読有り

    Nianxi Zhao, Fengxue Zhu, Fenghua Yuan, Anoria K. Haick, Shinichi Fukushige, Liya Gu, Chengtao Her

    BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS　370　(2)　338-343　2008年5月

    DOI： 10.1016/j.bbrc.2008.03.082 　

    ISSN：0006-291X

  31. RET finger protein enhances MBD2-and MBD4-dependent transcriptional repression 査読有り

    Shinichi Fukushige, Emiko Kondo, Zhaodi Gu, Hideyuki Suzuki, Akira Horii

    BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS　351　(1)　85-92　2006年12月

    DOI： 10.1016/j.bbrc.2006.10.005 　

    ISSN：0006-291X

  32. The thymine DNA glycosylase MBD4 represses transcription and is associated with methylated p16(INK4a) and hMLH1 genes 査読有り

    E Kondo, ZD Gu, A Horii, S Fukushige

    MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY　25　(11)　4388-4396　2005年6月

    DOI： 10.1128/MCB.25.11.4388-4396.2005 　

    ISSN：0270-7306

  33. Comparative genomic hybridization and mutation analyses of sporadic schwannomas 査読有り

    T Ikeda, S Hashimoto, S Fukushige, H Ohmori, A Horii

    JOURNAL OF NEURO-ONCOLOGY　72　(3)　225-230　2005年5月

    DOI： 10.1007/s11060-004-2693-z 　

    ISSN：0167-594X

  34. The ability of Sgs1 to interact with DNA topoisomerase III is essential for damage-induced recombination 査読有り

    A Ui, M Seki, H Ogiwara, R Onodera, S Fukushige, F Onoda, T Enomoto

    DNA REPAIR　4　(2)　191-201　2005年2月

    DOI： 10.1016/j.dnareps.2004.09.002 　

    ISSN：1568-7864

  35. The role of chromosome 18 abnormalities in the progression of pancreatic adenocarcinoma 査読有り

    M Sunamura, LP Lefter, DG Duda, R Morita, H Inoue, T Yokoyama, T Yatsuoka, T Abe, S Egawa, T Furukawa, S Fukushige, M Oshimura, A Horii, S Matsuno

    PANCREAS　28　(3)　311-316　2004年4月

    DOI： 10.1097/00006676-200404000-00019 　

    ISSN：0885-3177

  36. DSCP1, a novel TP53-inducible gene, is upregulated by strong genotoxic stresses and its overexpression inhibits tumor cell growth in vitro 査読有り

    T Hata, T Ogawa, TA Yokoyama, S Fukushige, A Horii, T Furukawa

    INTERNATIONAL JOURNAL OF ONCOLOGY　24　(3)　513-520　2004年3月

    ISSN：1019-6439

  37. A yeast two-hybrid assay provides a simple way to evaluate the vast majority of hMLH1 germ-line mutations 査読有り

    E Kondo, H Suzuki, A Horii, S Fukushige

    CANCER RESEARCH　63　(12)　3302-3308　2003年6月

    ISSN：0008-5472

  38. Presence on human chromosome 10 of omeprazole-sensitivity gene whose product mediates CYP1A1 induction 査読有り

    H Kikuchi, S Fukushige, M Shibazaki, Y Shiratori

    CYTOGENETIC AND GENOME RESEARCH　97　(1-2)　51-57　2002年

    DOI： 10.1159/000064040 　

    ISSN：1424-8581

  39. The interacting domains of three MutL heterodimers in man: hMLH1 interacts with 36 homologous amino acid residues within hMLH3, hPMS1 and hPMS2 査読有り

    E Kondo, A Horii, S Fukushige

    NUCLEIC ACIDS RESEARCH　29　(8)　1695-1702　2001年4月

    DOI： 10.1093/nar/29.8.1695 　

    ISSN：0305-1048

  40. Isolation and characterization of the human gene homologous to the Drosophila headcase (hdc) gene in chromosome bands 6q23-q24, a region of common deletion in human pancreatic cancer 査読有り

    N Makino, T Yamato, H Inoue, T Furukawa, T Abe, T Yokoyama, T Yatsuoka, S Fukushige, S Orikasa, T Takahashi, A Horii

    DNA SEQUENCE　11　(6)　547-553　2001年

    DOI： 10.3109/10425170109041340 　

    ISSN：1042-5179

  41. Identification of three commonly deleted regions on chromosome arm 6q in human pancreatic cancer. (vol 25, pg 60, 1999)

    T Abe, N Makino, T Furukawa, H Ouyang, M Kimura, T Yatsuoka, T Yokoyama, H Inoue, S Fukushige, M Hoshi, Y Hayashi, M Sunamura, M Kobari, S Matsuno, A Horii

    GENES CHROMOSOMES & CANCER　29　(1)　88-88　2000年9月

    ISSN：1045-2257

  42. Not hMSH2 but hMLH1 is frequently silenced by hypermethylation in endometrial cancer but rarely silenced in pancreatic cancer with microsatellite instability 査読有り

    E Kondo, T Furukawa, K Yoshinaga, H Kijima, S Semba, T Yatsuoka, T Yokoyama, S Fukushige, A Horii

    INTERNATIONAL JOURNAL OF ONCOLOGY　17　(3)　535-541　2000年9月

    ISSN：1019-6439

  43. Frequent loss of copy number on the long arm of chromosome 21 in human esophageal squamous cell carcinoma 査読有り

    T Mayama, S Fukushige, R Shineha, T Nishihira, S Satomi, A Horii

    INTERNATIONAL JOURNAL OF ONCOLOGY　17　(2)　245-252　2000年8月

    ISSN：1019-6439

  44. Association of poor prognosis with loss of 12q, 17p, and 18q, and concordant loss of 6q/17p and 12q/18q in human pancreatic ductal adenocarcinoma 査読有り

    T Yatsuoka, M Sunamura, T Furukawa, S Fukushige, T Yokoyama, H Inoue, K Shibuya, K Takeda, S Matsuno, A Horii

    AMERICAN JOURNAL OF GASTROENTEROLOGY　95　(8)　2080-2085　2000年8月

    DOI： 10.1016/S0002-9270(00)00963-1 　

    ISSN：0002-9270

  45. p24/ING1-ALT1 and p47/ING1-ALT2, distinct alternative transcripts of p33/ING1 査読有り

    A Saito, T Furukawa, S Fukushige, S Koyama, M Hoshi, Y Hayashi, A Horii

    JOURNAL OF HUMAN GENETICS　45　(3)　177-181　2000年

    DOI： 10.1007/s100380050206 　

    ISSN：1434-5161

  46. Adenovirus-mediated delivery of the PTEN gene inhibits cell growth by induction of apoptosis in endometrial cancer 査読有り

    A Sakurada, H Hamada, S Fukushige, T Yokoyama, K Yoshinaga, T Furukawa, S Sato, A Yajima, M Sato, S Fujimura, A Horii

    INTERNATIONAL JOURNAL OF ONCOLOGY　15　(6)　1069-1074　1999年12月

    ISSN：1019-6439

  47. 膵癌で高頻度の欠失の見られた第6番染色体長腕の癌抑制遺伝子の解析

    井上 寛子, 牧野 直彦, 阿部 忠義, 古川 徹, 八岡 利昌, 横山 忠明, 福重 真一, 砂村 真琴, 武田 和憲, 堀井 明

    膵臓　14　(4)　340-340　1999年9月

    出版者・発行元： (一社)日本膵臓学会

    ISSN：0913-0071

    eISSN：1881-2805

  48. Identification of a 5-cM region of common allelic loss on 8p12-p21 in human breast cancer and genomic analysis of the hEXT1L/EXTR1/EXTL3 gene in this locus 査読有り

    A Suzuki, XY Shao, XQ Song, T Hanaoka, S Irie, M Kashiwada, G Samara, LG Close, T Aoki, M Fujimori, Y Ishikawa, M Hatori, M Hosaka, A Sakurada, M Sato, N Ohuchi, S Satomi, S Fukushige, A Horii, T Sato

    INTERNATIONAL JOURNAL OF ONCOLOGY　15　(3)　443-451　1999年9月

    ISSN：1019-6439

  49. 膵がんで高頻度に欠失している第12番染色体長腕の解析

    古川 徹, 八岡 利昌, Youssef Emile M, 福重 真一, 砂村 真琴, 堀井 明

    日本癌学会総会記事　58回　127-127　1999年8月

    出版者・発行元： (一社)日本癌学会

    ISSN：0546-0476

  50. Allelic imbalanceを指標にした膵癌の存在診断及び悪性度診断法の検討

    八岡 利昌, 古川 徹, 福重 真一, 木村 光宏, 阿部 忠義, 砂村 眞琴, 武田 和憲, 松野 正紀, 堀井 明

    日本癌学会総会記事　58回　127-127　1999年8月

    出版者・発行元： (一社)日本癌学会

    ISSN：0546-0476

  51. Identification of three commonly deleted regions on chromosome arm 6q in human pancreatic cancer 査読有り

    T Abe, N Makino, T Furukawa, H Ouyang, M Kimura, T Yatsuoka, T Yokoyama, H Inoue, S Fukushige, M Hoshi, Y Hayashi, M Sunamura, M Kobari, S Matsuno, A Horii

    GENES CHROMOSOMES & CANCER　25　(1)　60-64　1999年5月

    DOI： 10.1002/(SICI)1098-2264(199905)25:1<60::AID-GCC9>3.0.CO;2-Y 　

    ISSN：1045-2257

  52. Chromosome band 16q24 is frequently deleted in human gastric cancer 査読有り

    Y Mori, M Matsunaga, T Abe, S Fukushige, K Miura, M Sunamura, K Shiiba, M Sato, T Nukiwa, A Horii

    BRITISH JOURNAL OF CANCER　80　(3-4)　556-562　1999年5月

    DOI： 10.1038/sj.bjc.6690391 　

    ISSN：0007-0920

  53. The human PMS2L proteins do not interact with hMLH1, a major DNA mismatch repair protein 査読有り

    E Kondo, A Horii, S Fukushige

    JOURNAL OF BIOCHEMISTRY　125　(4)　818-825　1999年4月

    ISSN：0021-924X

  54. Infrequent somatic mutations of the p73 gene in various human cancers 査読有り

    S Han, S Semba, T Abe, N Makino, T Furukawa, S Fukushige, H Takahashi, A Sakurada, M Sato, K Shiibai, S Matsuno, Y Nimura, A Nakagawara, A Horii

    EUROPEAN JOURNAL OF SURGICAL ONCOLOGY　25　(2)　194-198　1999年4月

    DOI： 10.1053/ejso.1998.0626 　

    ISSN：0748-7983

  55. Cloning and characterization of the human UDP-N-acetylglucosamine: alpha-1,3-D-mannoside beta-1,4-N-acetylglucosaminyltransferase IV-homologue (hGnT-IV-H) gene 査読有り

    T Furukawa, EM Youssef, T Yatsuoka, T Yokoyama, N Makino, H Inoue, S Fukushige, M Hoshi, Y Hayashi, M Sunamura, A Horii

    JOURNAL OF HUMAN GENETICS　44　(6)　397-401　1999年

    DOI： 10.1007/s100380050186 　

    ISSN：1434-5161

  56. Isolation and characterization of the novel gene, TU3A, in a commonly deleted region on 3p14.3 -&gt; p14.2 in renal cell carcinoma 査読有り

    T Yamato, K Orikasa, S Fukushige, S Orikasa, A Horii

    CYTOGENETICS AND CELL GENETICS　87　(3-4)　291-295　1999年

    ISSN：0301-0171

  57. Loss of chromosome 18q is an early event in pancreatic ductal tumorigenesis 査読有り

    S Fukushige, T Furukawa, K Satoh, M Sunamura, M Kobari, M Koizumi, A Horii

    CANCER RESEARCH　58　(19)　4222-4226　1998年10月

    ISSN：0008-5472

  58. ヒト膵癌における6q21の500-kbの共通欠失領域の詳細な解析

    阿部 忠義, 牧野 直彦, 古川 徹, 福重 真一, 八岡 利昌, 砂村 真琴, 小針 雅男, 松野 正紀, 堀井 明

    日本癌学会総会記事　57回　133-133　1998年8月

    出版者・発行元： (一社)日本癌学会

    ISSN：0546-0476

  59. 膵臓癌における12q21上の共通欠失領域の解析

    エミール・M・ヨセフ, 古川 徹, 八岡 利昌, 福重 真一, 砂村 真琴, 小針 雅男, 松野 正紀, 堀井 明

    日本癌学会総会記事　57回　133-133　1998年8月

    出版者・発行元： (一社)日本癌学会

    ISSN：0546-0476

  60. 膵癌の発生・進展に関与する癌抑制遺伝子 12q22-q23.1の650-kbの共通欠失領域からの遺伝子同定

    八岡 利昌, 古川 徹, 阿部 忠義, 木村 光宏, 福重 真一, 砂村 眞琴, 小針 雅男, 松野 正紀, 堀井 明

    日本癌学会総会記事　57回　470-470　1998年8月

    出版者・発行元： (一社)日本癌学会

    ISSN：0546-0476

  61. Identification of a 910-Kb region of common allelic loss in chromosome bands 16q24.1-q24.2 in human lung cancer 査読有り

    M Sato, Y Mori, A Sakurada, S Fukushige, Y Ishikawa, E Tsuchiya, Y Saito, T Nukiwa, S Fujimura, A Horii

    GENES CHROMOSOMES & CANCER　22　(1)　1-8　1998年5月

    ISSN：1045-2257

  62. Infrequent genetic alterations of the PTEN gene in Japanese patients with sporadic prostate cancer 査読有り

    K Orikasa, S Fukushige, S Hoshi, S Orikasa, K Kondo, Y Miyoshi, Y Kubota, A Horii

    JOURNAL OF HUMAN GENETICS　43　(4)　228-230　1998年

    DOI： 10.1007/s100380050078 　

    ISSN：1434-5161

  63. Genomic analysis of DUSP6, a dual specificity MAP kinase phosphatase, in pancreatic cancer 査読有り

    T Furukawa, T Yatsuoka, EM Youssef, T Abe, T Yokoyama, S Fukushige, E Soeda, M Hoshi, Y Hayashi, M Sunamura, M Kobari, A Horii

    CYTOGENETICS AND CELL GENETICS　82　(3-4)　156-159　1998年

    ISSN：0301-0171

  64. Frequent gain of copy number on the long arm of chromosome 20 in herman pancreatic adenocarcinoma 査読有り

    S Fukushige, FM Waldman, M Kimura, T Abe, T Furukawa, M Sunamura, M Kobari, A Horii

    GENES CHROMOSOMES & CANCER　19　(3)　161-169　1997年7月

    DOI： 10.1002/(SICI)1098-2264(199707)19:3<161::AID-GCC5>3.0.CO;2-W 　

    ISSN：1045-2257

  65. A novel tandem repeat sequence located on human chromosome 4p: isolation and characterization. 国際誌

    M Kogi, S Fukushige, C Lefevre, S Hadano, J E Ikeda

    Genomics　42　(2)　278-83　1997年6月1日

    ISSN：0888-7543

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    In an effort to analyze the genomic region of the distal half of human chromosome 4p, to where Huntington disease and other diseases have been mapped, we have isolated the cosmid clone (CRS447) that was likely to contain a region with specific repeat sequences. Clone CRS447 was subjected to detailed analysis, including chromosome mapping, restriction mapping, and DNA sequencing. Chromosome mapping by both a human-CHO hybrid cell panel and FISH revealed that CRS447 was predominantly located in the 4p15.1-15.3 region. CRS447 was shown to consist of tandem repeats of 4.7-kb units present on chromosome 4p. A single EcoRI unit was subcloned (pRS447), and the complete sequence was determined as 4752 nucleotides. When pRS447 was used as a probe, the number of copies of this repeat per haploid genome was estimated to be 50-70. Sequence analysis revealed that it contained two internal CA repeats and one putative ORF. Database search established that this sequence was unreported. However, two homologous STS markers were found in the database. We concluded that CRS447/pRS447 is a novel tandem repeat sequence that is mainly specific to human chromosome 4p.

  66. Alternative splicing of hMSH2 in normal human tissues 査読有り

    Y Mori, H Shiwaku, S Fukushige, S Wakatsuki, M Sato, T Nukiwa, A Horii

    HUMAN GENETICS　99　(5)　590-595　1997年5月

    DOI： 10.1007/s004390050411 　

    ISSN：0340-6717

  67. Alternative splicing of GTBP in normal human tissues 査読有り

    Hiromi O. Shiwaku, Shigeru Wakatsuki, Yuriko Mori, Shinichi Fukushige, Akira Horii

    DNA Research　4　(5)　359-362　1997年

    出版者・発行元： Universal Academy Press Inc.

    DOI： 10.1093/dnares/4.5.359 　

    ISSN：1340-2838

  68. Frequent gains on chromosome arms 1q and/or 8q in human endometrial cancer 査読有り

    Akihiko Suzuki, Shinichi Fukushige, Satoru Nagase, Noriaki Ohuchi, Susumu Satomi, Akira Horii

    Human Genetics　100　(5-6)　629-636　1997年

    DOI： 10.1007/s004390050565 　

    ISSN：0340-6717

  69. Trapping of mammalian promoters by Cre-lox site-specific recombination. 国際誌 査読有り

    S Fukushige, J E Ikeda

    DNA research : an international journal for rapid publication of reports on genes and genomes　3　(2)　73-80　1996年4月30日

    ISSN：1340-2838

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    One of the challenges in human genome research is to identify the promoter sequences which play a key role in the regulation of gene expression. We report here a new promoter trapping system for use with mammalian cells comprised of the following three steps: 1) Cloning of DNA fragments into a promotertrapping vector, 2) integration of the trapping vector into a designated target in the mammalian genome using the Cre site-specific recombinase, and 3) screening of integrants for trapped promoter sequences by activation of the luciferase gene. To assess the efficiency of this system, lox trapping vectors containing sense tk promoter, antisense tk promoter, or a non-promoter sequence of the neo gene were employed. The resulting levels of luciferase activity of the site-specific integrants were measured directly. Luciferase activity of the integrants can be assayed under conventional culture conditions by simply replacing the culture medium with potassium phosphate buffer containing luciferin. Only those G418r colonies carrying the tk promoter in the normal orientation exhibited a 21-to 35-fold increase in luciferase activity over that of the other integrants. These results indicate that this system is an effective means of trapping promoter sequences from random mammalian genomic DNA fragments.

  70. Frameshift mutation at codon 642 of the hMLH1 gene in human endometrial cancer 査読有り

    S Fukushige, S Wakatsuki, S Nagase, A Horii

    HUMAN MUTATION　8　(4)　394-395　1996年

    DOI： 10.1002/(SICI)1098-1004(1996)8:4<394::AID-HUMU22>3.0.CO;2-X 　 10.1002/humu.1380080404 　

    ISSN：1059-7794

  71. Genomic targeting with a positive-selection lox integration vector allows highly reproducible gene expression in mammalian cells. 国際誌 査読有り

    S Fukushige, B Sauer

    Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America　89　(17)　7905-9　1992年9月1日

    ISSN：0027-8424

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    Stable transformants of mammalian cells from gene transfer often show extreme variability in expression of the introduced transgene. This occurs from the highly variable number of copies integrated into the genome and from position effects on gene expression due to random integration. We have eliminated both of these constraints on predictable gene expression by use of a lox recombination vector. The positive selection vector system is designed to directly select Cre-mediated DNA integration at a lox target previously placed into the genome of cultured mammalian cells. Proper targeting activates expression of a defective lox-neomycin phosphotransferase (neo) fusion gene target. With CHO cell lines containing this target, almost all of the selected transformants (54 of 56 independent G418-resistant colonies) were simple single-copy integrants of the targeting DNA. To monitor gene expression at a single chromosomal site, we used a beta-actin promoter-lacZ reporter construct. Independent G418-resistant colonies from site-specific integration of the reporter gene all showed nearly identical levels of beta-galactosidase activity when the reporter construct integrated at a particular chromosomal position. The same construct integrated at a second chromosomal position exhibited a slightly different level of activity, characteristic of that second position. These results show that Cre-mediated site-specific integration can facilitate the construction of isogenic cell lines and thereby permit reproducible gene expression in stably transformed cell lines.

  72. Construction of isogenic cell lines expressing human and rat angiotensin II AT1 receptors by Cre-mediated site-specific recombination.

    Sauer B, Baubonis W, Fukushige S, Santomenna L

    Methods: A Companion to Methods in Enzymol　4　143-149　1992年

  73. TECHNICAL STUDY ON ANALYSIS OF DOUBLE STAINED HUMAN-CHROMOSOMES 査読有り

    SI YOSHIMURA, M YAMAZAKI, K TAKAHARA, H SUGINO, N NAKAMURA, S FUKUSHIGE, T MUROTSU, K MATSUBARA

    FLOW CYTOMETRY AND IMAGE ANALYSIS FOR CLINICAL APPLICATIONS　933　89-94　1991年

  74. Endogenous retroviral LTR DNA sequences as markers for individual human chromosomes. 国際誌 査読有り

    N Nakamura, H Sugino, K Takahara, C Jin, S Fukushige, K Matsubara

    Cytogenetics and cell genetics　57　(1)　18-22　1991年

    ISSN：0301-0171

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    The human genome carries multiple copies of sequences related to endogenous retroviral genomes that include long terminal repeat (LTR) sequences. We used the LTR of one such viral genome, called HERV-A, as a probe in Southern analysis to examine the distribution profiles of the hybridizing DNA in the genomes of twelve human x rodent hybrid cell lines carrying one or a few human chromosomes, and in the DNA samples prepared from six sorted, individual chromosomes. The HERV-A sequence was found to be widely distributed among different chromosomes and the Southern patterns for chromosomes 5, the X, and the Y, each obtained in duplicate from independently prepared cell lines or sorted chromosomes, were matched. Chromosome-specific Southern profiles can be used to monitor chromosomes in hybrid cells or to characterize chromosome aberrations, such as deletions.

  75. Separation of DNA restriction fragments by high-performance ion-exchange chromatography on a non-porous ion exchanger. 国際誌 査読有り

    Y Kato, Y Yamasaki, A Onaka, T Kitamura, T Hashimoto, T Murotsu, S Fukushige, K Matsubara

    Journal of chromatography　478　(1)　264-8　1989年9月8日

  76. Two erbA homologs encoding proteins with different T3 binding capacities are transcribed from opposite DNA strands of the same genetic locus. 国際誌 査読有り

    N Miyajima, R Horiuchi, Y Shibuya, S Fukushige, K Matsubara, K Toyoshima, T Yamamoto

    Cell　57　(1)　31-9　1989年4月7日

    ISSN：0092-8674

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    Two erbA homologs, termed ear-1 and ear-7, are present in the human genome on chromosome 17. The two genes reside in the same genetic locus with overlapping exons and are transcribed from opposite DNA strands. In addition, the ear-7 mRNA is alternatively spliced to generate two protein isoforms, namely the ear71 and ear72 proteins. Nucleotide sequence analysis predicts that the ear71 protein is a human counterpart of the chicken c-erbA protein, a molecule closely related or identical to thyroid hormone receptor. Indeed, Scatchard analysis of proteins synthesized in vitro indicated very high affinity binding of T3 to the ear71 protein but not to the ear72 protein. Interestingly, the ear-1 gene product showed low, but appreciable, binding to T3, although its authentic ligand remains to be clarified.

  77. Assignment of human pepsinogen C (PGC) gene to chromosome 6. 国際誌 査読有り

    K Takahara, S Fukushige, T Murotsu, Y Ichihara, T Hayano, T Ishihara, K Takahashi, K Matsubara

    Cytogenetics and cell genetics　52　(1-2)　100-1　1989年

    ISSN：0301-0171

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    cDNA of rat pepsinogen C (PGC) hybridizes to, among others, a 3.2-kb band in Southern blot analysis of BamHI-cleaved human genomic DNA. This property was employed to localize the human PGC gene. Use of flow-sorted human chromosomes and 12 human x mouse somatic cell hybrid lines demonstrated that the gene is located on chromosome 6.

  78. Identification of two novel members of erbA superfamily by molecular cloning: the gene products of the two are highly related to each other. 国際誌 査読有り

    N Miyajima, Y Kadowaki, S Fukushige, S Shimizu, K Semba, Y Yamanashi, K Matsubara, K Toyoshima, T Yamamoto

    Nucleic acids research　16　(23)　11057-74　1988年12月9日

    ISSN：0305-1048

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    Two v-erbA-related genes, named ear-2 and ear-3, have been identified in the human genome and characterized by cDNA cloning. These genes are predicted to encode proteins that are very similar in primary structure to receptors for steroid hormones or thyroid hormone (T3). In addition, amino acid sequences of the ear-2 and ear-3 gene products are very similar each other especially at the DNA binding domain (86% homology) and at the putative ligand binding domain (76% homology). Northern hybridization with ear DNA probes of RNAs from various tissues of a human fetus reveals that the expression of ear-2 is high in the liver whereas the expression of ear-3 is relatively ubiquitous. Hybridization analysis of DNAs from sorted chromosomes shows that the ear-2 gene is located on chromosome 19 and ear-3 on chromosome 5, indicating that the two genes are clearly different from each other.

  79. Separation of oligonucleotides by high-performance ion-exchange chromatography on a non-porous ion exchanger. 国際誌 査読有り

    Y Kato, T Kitamura, A Mitsui, Y Yamasaki, T Hashimoto, T Murotsu, S Fukushige, K Matsubara

    Journal of chromatography　447　(1)　212-20　1988年8月5日

  80. Nucleotide sequence and chromosomal mapping of the human c-yes-2 gene. 査読有り

    K Semba, M Nishizawa, H Satoh, S Fukushige, M C Yoshida, M Sasaki, K Matsubara, T Yamamoto, K Toyoshima

    Japanese journal of cancer research : Gann　79　(6)　710-7　1988年6月

    ISSN：0910-5050

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    We molecularly characterized the second gene, c-yes-2, of two copies of yes-related genes which we previously found to contain in the human genome. First, nucleotide sequence analysis revealed that the c-yes-2 gene is a pseudogene of the c-yes-1 gene. Second, by using two independent methods, hybridization of both DNAs from sorted chromosomes and metaphase spreads with c-yes-2 DNA, we assigned the c-yes-2 gene to chromosome 22q11.2. This chromosomal localization is consistent with that given in our previous report. The failure of proper mapping in our experiment might have been caused by instability of hybrid cell clones.

  81. Primary structure of human pancreatic secretory trypsin inhibitor (PSTI) gene. 査読有り

    Horii A, Kobayashi T, Tomita N, Yamamoto T, Fukushige S, Murotsu T, Ogawa M, Mori T, Matsubara K

    Biochem Biophys Res Commun　149　(2)　635-641　1987年12月16日

    DOI： 10.1016/0006-291X(87)90415-3 　

  82. Chromosomal translocation and inverted duplication associated with integrated hepatitis B virus in hepatocellular carcinomas. 国際誌 査読有り

    T Tokino, S Fukushige, T Nakamura, T Nagaya, T Murotsu, K Shiga, N Aoki, K Matsubara

    Journal of virology　61　(12)　3848-54　1987年12月

    ISSN：0022-538X

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    Integrated hepatitis B virus (HBV) DNA is found in hepatocellular carcinomas which develop in HBV carriers. Presented here are the results of analyses of four integrants that show chromosomal rearrangements associated with the integrated HBV DNA. Two clones (p4 and C15) were found to have large inverted repeating structures, each consisting of HBV genome along with flanking cellular sequences. The structure must have arisen by duplication of the primary integrant, including the flanking cellular DNA, followed by recombination within the viral DNA. One of the two viral arms in each clone joins to the other viral arm at the "cohesive end region." Two clones (DA2-2 and DA2-6) were found to have integrated HBV sequences, each flanked by cellular DNAs from different chromosomes (chromosome X joined to 17 and chromosome 5 joined to 9). They must be the products of cellular DNA translocations using the integrated HBV DNA as the switch point. The viral DNA in each clone is a continuous stretch of a single virus genome with one end in the cohesive end region. These complex structures seem to have been produced by activation of the cohesive end of an integrant viral genome, followed by its recombination with another chromosomal DNA.

  83. Human gene coding for granulocyte-colony stimulating factor is assigned to the q21-q22 region of chromosome 17. 国際誌 査読有り

    N Kanda, S Fukushige, T Murotsu, M C Yoshida, M Tsuchiya, S Asano, Y Kaziro, S Nagata

    Somatic cell and molecular genetics　13　(6)　679-84　1987年11月

    ISSN：0740-7750

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    Granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF) is a member of colony stimulating factors which regulate the proliferation and differentiation of hematopoietic progenitor cells. A full-length cDNA clone coding human G-CSF was used as a hybridization probe to detect homologous sequence in human-mouse somatic cell hybrids, flow-sorted human chromosomes, and in situ human metaphase chromosomes. The results indicate that the gene encoding human G-CSF is on the q21-q22 region of chromosome 17, which is involved in translocation of t(15;17) (q23;21) in human acute promyelocytic leukemia.

  84. Isolation and characterization of the active cDNA of the human cell cycle gene (RCC1) involved in the regulation of onset of chromosome condensation. 国際誌 査読有り

    M Ohtsubo, R Kai, N Furuno, T Sekiguchi, M Sekiguchi, H Hayashida, K Kuma, T Miyata, S Fukushige, T Murotsu

    Genes & development　1　(6)　585-93　1987年8月

    ISSN：0890-9369

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    The human RCC1 gene was cloned after DNA-mediated gene transfer into the tsBN2 cell line, which shows premature chromosome condensation at nonpermissive temperatures (39.5-40 degrees C). This gene codes for a 2.5-kb poly(A)+ RNA that is well conserved in hamsters and humans. We isolated 15 cDNA clones from the Okayama-Berg human cDNA library, and found two that can complement the tsBN2 mutation with an efficiency comparable to that of the genomic DNA clone. The base sequences of these two active cDNA clones differ at the 5' proximal end, yet both have a common open reading frame, encoding a protein of 421 amino acids with a calculated molecular weight of 44,847 and with seven homologous repeated domains of about 60 amino acids. This human RCC1 gene was located to human chromosome 1 using sorted chromosomal fractions.

  85. Molecular gene mapping of human aldolase A (ALDOA) gene to chromosome 16. 国際誌 査読有り

    A Kukita, M C Yoshida, S Fukushige, M Sakakibara, K Joh, T Mukai, K Hori

    Human genetics　76　(1)　20-6　1987年5月

    ISSN：0340-6717

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    Mapping of human aldolase A (ALDOA) gene was performed by molecular hybridization techniques using a panel of human-mouse cell hybrids and sorted fractions of human metaphase chromosomes besides in situ hybridization. For the purpose, three kinds of DNA probes derived from the coding region (probe-1), the 3' noncoding region (probe-2), and the coding and 3' noncoding regions (probe-3) of human aldolase A cDNA clone, pHAAL116-3, were selectively employed. The results of RNA and DNA blot analyses indicated that the human ALDOA gene is located on chromosome 16. The in situ hybridization experiment also indicated that the ALDOA gene was localized to 16q22-q24.

  86. Purification of plasmid by high-performance gel filtration. 査読有り

    Yamasaki Y, Kato Y, Murotsu T, Fukushige S, Matsubara K

    J High Resolut Chromatogr Chromatogr Commun　10　45-46　1987年

  87. The yes-related cellular gene lyn encodes a possible tyrosine kinase similar to p56lck. 国際誌 査読有り

    Y Yamanashi, S Fukushige, K Semba, J Sukegawa, N Miyajima, K Matsubara, T Yamamoto, K Toyoshima

    Molecular and cellular biology　7　(1)　237-43　1987年1月

    ISSN：0270-7306

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    With v-yes DNA as the probe, a human cDNA library made from placental RNA was screened under relaxed conditions, and DNA clones derived from a novel genetic locus, termed lyn, were obtained. Nucleotide sequencing revealed that lyn could encode a novel tyrosine kinase that was very similar to mouse T-lymphocyte-specific tyrosine kinase p56lck and the v-yes protein as well as to the gene products of v-fgr and v-src. Northern hybridization analysis revealed that a 3.2-kilobase lyn mRNA was expressed in a variety of tissues of the human fetus. The pattern of lyn mRNA expression was different from those of related genes, such as yes and syn. Hybridization analysis of DNA from sorted chromosomes showed that the lyn gene is located on human chromosome 8 q13-qter.

  88. Molecular cloning of an oncogene from a human hepatocellular carcinoma. 国際誌 査読有り

    T Ochiya, A Fujiyama, S Fukushige, I Hatada, K Matsubara

    Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America　83　(14)　4993-7　1986年7月

    ISSN：0027-8424

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    A transforming DNA, named lca (for liver cancer), was obtained from a primary human hepatocellular carcinoma (HCC) in transformation assays using NIH 3T3 cells and a calcium phosphate coprecipitation method. High molecular weight DNA obtained from the HCC tissue was employed for this purpose. This transforming DNA had a linkage to the Alu sequence and was cloned in lambda phage for further studies. Restriction enzyme analyses showed that the minimal size of the lca transforming DNA is about 10 kilobase pairs and that its cleavage profiles are different from those of any one of the previously reported human transforming genes or retroviral oncogenes. No cross-hybridization was observed between these genes and the lca DNA. Southern blot analyses of DNAs from flow-sorted human chromosomes and human-mouse somatic cell hybrids indicated that the lca DNA is located on human chromosome 2. An independently obtained transforming DNA from another HCC exhibited identical restriction enzyme cleavage profiles. Thus, lca DNA is likely to represent a commonly encountered transforming DNA in HCC.

  89. Localization of a novel v-erbB-related gene, c-erbB-2, on human chromosome 17 and its amplification in a gastric cancer cell line. 国際誌 査読有り

    S Fukushige, K Matsubara, M Yoshida, M Sasaki, T Suzuki, K Semba, K Toyoshima, T Yamamoto

    Molecular and cellular biology　6　(3)　955-8　1986年3月

    ISSN：0270-7306

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    The c-erbB-2 gene is a v-erbB-related proto-oncogene which is distinct from the gene encoding the epidermal growth factor receptor. By using two independent methods, hybridization of both sorted chromosomes and metaphase spreads with cloned c-erbB-2 DNA, we mapped the c-erbB-2 locus on human chromosome 17 at q21, a specific breakpoint observed in a translocation associated with acute promyelocytic leukemia. Furthermore, we observed amplification and elevated expression of the c-erbB-2 gene in the MKN-7 gastric cancer cell line. These data suggest possible involvement of the c-erbB-2 gene in human cancer.

  90. Chromosomal assignment of human genes for gastrin, thyrotropin (TSH)-beta subunit and C-erbB-2 by chromosome sorting combined with velocity sedimentation and Southern hybridization. 国際誌 査読有り

    S Fukushige, T Murotsu, K Matsubara

    Biochemical and biophysical research communications　134　(2)　477-83　1986年1月29日

    ISSN：0006-291X

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    Human genes for gastrin, thyrotropin (THS)-beta subunit and c-erbB-2 were assigned to specific chromosomes using a single-laser cell sorter. For this purpose, condensed human chromosomes prepared from a karyotypically normal lymphoblastoid cell line were preliminarily fractionated by velocity sedimentation, and then sorted using a fluorescence-activated cell sorter. DNA was then extracted from the chromosomes, cleaved by restriction enzymes, and subjected to Southern hybridization using gene-specific radioactive probes. When the assignment of specific chromosomes was not possible due to chromosomal size overlapping, sorted chromosomes from cell lines carrying chromosomal translocation or from hybrid cells carrying known human chromosomes were used in addition. The results indicate that human genes for gastrin, TSH-beta, and c-erbB-2 are located on chromosomes 17, 1 and 17, respectively.

  91. Structure of human cholecystokinin gene and its chromosomal location. 国際誌 査読有り

    Y Takahashi, S Fukushige, T Murotsu, K Matsubara

    Gene　50　(1-3)　353-60　1986年

    ISSN：0378-1119

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    We have determined the entire structure of human cholecystokinin (CCK) gene, which is 7 kb in size and separated into three exons. S1 endonuclease analysis has shown two putative transcription initiation sites that are preceded by 'TATA' equivalent sequences located 39 bp and 35 bp upstream from these sites. The promoter region contains five 'G-C box'-like sequences, which are believed to be sp 1-binding sites. By chromosome sorting in combination with velocity sedimentation and Southern hybridization, the human cck gene was mapped on the short arm of human chromosome 3.

  92. Separation of large DNA restriction fragments by high-performance gel filtration on TSKgel DNA-PW. 国際誌 査読有り

    Y Kato, Y Yamasaki, T Hashimoto, T Murotsu, S Fukushige, K Matsubara

    Journal of chromatography　320　(2)　440-4　1985年3月1日

  93. A new packing for separation of DNA restriction fragments by high performance liquid chromatography. 国際誌 査読有り

    Y Kato, M Sasaki, T Hashimoto, T Murotsu, S Fukushige, K Matsubara

    Journal of biochemistry　95　(1)　83-6　1984年1月

    ISSN：0021-924X

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    TSK-GEL SW was found to be useful as a packing in high performance liquid chromatography for the separation of double-stranded DNA restriction fragments. DNA fragments smaller than 300 base pairs were separated as discrete peaks depending solely upon difference in chain length. The recovery of DNA fragments was higher than 90%.

  94. Operational variables in high-performance gel filtration of DNA fragments and RNAs. 国際誌 査読有り

    Y Kato, M Sasaki, T Hashimoto, T Murotsu, S Fukushige, K Matsubara

    Journal of chromatography　266　341-9　1983年8月26日

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    Double-stranded DNA fragments and ribosomal and transfer RNAs were measured by high-performance gel filtration on TSK-GEL G2000SW, G3000SW, G4000SW and G5000PW columns to investigate the separation range and resolution of these columns and the effects of eluent ionic strength and flow-rate on retention and resolution. These columns could separate double-stranded DNA fragments up to ca 1 X 10(6) and rRNAs up to ca 5 X 10(6) daltons in molecular weight. However, it was found that the selection of the column is very important to achieve optimum separation, depending on the molecular weight of the sample. Elution is delayed as the eluent ionic strength is increased. An eluent ionic strength of 0.3-0.5 seemed appropriate in most cases. Resolution is greatly increased as the flow-rate is decreased.

  95. Separation of DNA restriction fragments by high-performance ion-exchange chromatography. 国際誌 査読有り

    Y Kato, M Sasaki, T Hashimoto, T Murotsu, S Fukushige, K Matsubara

    Journal of chromatography　265　(2)　342-6　1983年8月19日

  96. Loading capacity in high performance gel filtration of nucleic-acid on TSK-GEL SW. 査読有り

    Kato Y, Hashimoto T, Murotsu T, Fukushige S, Matsubara K

    J High Resolut Chromatogr Chromatogr Commun　6　626-626　1983年

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MISC 34

  1. 膵癌細胞株においてシチジンデアミナーゼの発現増加はゲムシタビン耐性獲得に関与する

    日吉貴子, 斉木由利子, 佐々木彰之, 廣田嵩人, 平山明由, 曽我朋義, 福重真一, 堀井明

    日本癌学会学術総会抄録集(Web)　78th　2019年

  2. 前立腺腫瘍形成においてPYCARD遺伝子プロモーターのメチル化が高頻度に発生する

    福重 真一, 宮内 隼弥, 大久保 鉄平, 齋木 由利子, 高橋 正博, 三塚 浩二, 荒井 陽一, 堀井 明

    日本癌学会総会記事　76回　P-1153　2017年9月

    出版者・発行元： 日本癌学会

    ISSN： 0546-0476

  3. Targeted TET oxidase activity through methyl-CpG binding domain extensively suppresses cancer cell proliferation 査読有り

    Shinichi Fukushige, Yasuhiko Mizuguchi, Kanchan Chakma, Yuriko Saiki, Akira Horii

    CANCER RESEARCH　76　2522-2533　2016年7月

    DOI： 10.1158/1538-7445.AM2016-4432 　

    ISSN： 0008-5472

    eISSN： 1538-7445

  4. TET oxidase activity accumulated on methyl-CpG sites extensively upregulates methylated genes through DNA demethylation

    Shinichi Fukushige, Yasuhiko Mizuguchi, Akira Horii

    CANCER RESEARCH　74　(19)　2014年10月

    DOI： 10.1158/1538-7445.AM2014-396 　

    ISSN： 0008-5472

    eISSN： 1538-7445

  5. IFI27 and NOV, downstream regulated genes by S100A4, are playing important roles in pancreatic carcinogenesis

    Na Chen, Yuriko Saiki, Hitoshi Sekine, Makoto Sunamura, Shinichi Fukushige, Fuyuhiko Motoi, Shinichi Egawa, Michiaki Unno, Akira Horii

    CANCER RESEARCH　74　(19)　2014年10月

    DOI： 10.1158/1538-7445.AM2014-4993 　

    ISSN： 0008-5472

    eISSN： 1538-7445

  6. Highlights from the latest articles in epigenomics. 国際誌 査読有り

    Shinichi Fukushige, Akira Horii

    Epigenomics　6　(2)　171-3　2014年4月

    DOI： 10.2217/epi.14.2 　

  7. Rosvastatin Ameliorates Lung Ischemic-Reperfusion Injury via eNOS Upregulation and Inhibition of Macrophage Recruitment in Pulmonary Hypertensive Rat

    Satoshi Matsuo, Yuriko Saiki, Koki Ito, Yukihiro Hayatsu, Yusuke Suzuki, Shinichi Fukushige, Shunsuke Kawamoto, Akira Horii, Yoshikatsu Saiki

    CIRCULATION　128　(22)　2013年11月

    ISSN： 0009-7322

    eISSN： 1524-4539

  8. ゲムシタビン耐性ヒト癌細胞株におけるdeoxycytidine kinaseの不活化(Deoxycytidine kinase is frequently inactivated in acquired gemcitabine-resistant human cancer cells)

    齋木 由利子, 吉野 優樹, 福重 真一, 砂村 真琴, 石田 晶玄, 元井 冬彦, 江川 新一, 海野 倫明, 堀井 明

    日本癌学会総会記事　71回　237-237　2012年8月

    出版者・発行元： 日本癌学会

    ISSN： 0546-0476

  9. 大腸癌における新規癌抑制遺伝子NDRG2のエピジェネティックな発癌制御機構

    山村 明寛, 堀井 明, 三浦 康, 唐沢 秀明, 阿部 佳子, 内藤 剛, 小川 仁, 木内 誠, 矢崎 伸樹, 羽根田 祥, 渡辺 和宏, 大沼 忍, 佐瀬 友彦, 鈴木 秀幸, 斉木 由利子, 福重 真一, 柴田 近, 佐々木 巖

    日本大腸肛門病学会雑誌　64　(8)　537-537　2011年8月

    出版者・発行元： (一社)日本大腸肛門病学会

    ISSN： 0047-1801

  10. Identification of novel targets for aberrant methylation in pancreatic cancer by a newly developed method "methyl-CpG targeted transcriptional activation (MeTA)"

    Shinichi Fukushige, Hideyuki Shimizu, Yuko Sato, Akira Horii

    CANCER RESEARCH　70　2010年4月

    DOI： 10.1158/1538-7445.AM10-179 　

    ISSN： 0008-5472

    eISSN： 1538-7445

  11. Expression of the N-myc downstream-regulated gene 2 (NDRG2) is frequently suppressed by promoter hypermethylation in human gastrointestinal and pancreatic cancers

    Akihiro Yamamura, Koh Miura, Hideaki Karasawa, Keiko Abe, Yasuhiko Mizuguchi, Guo Jin, Zhaodi Gu, Shinichi Fukushige, Naoyuki Kaneko, Makoto Kinouchi, Toshinori Ando, Nobuki Yazaki, Naoki Tanaka, Tomohiko Sase, Chikashi Shibata, Iwao Sasaki, Akira Horii

    CANCER RESEARCH　70　2010年4月

    DOI： 10.1158/1538-7445.AM10-4933 　

    ISSN： 0008-5472

    eISSN： 1538-7445

  12. 癌抑制遺伝子NDRG2のエピジェネティックサイレンシングは消化器発癌を進行させる

    山村 明寛, 三浦 康, 木内 誠, 安藤 敏典, 矢崎 伸樹, 田中 直樹, 唐澤 秀明, 佐瀬 友彦, 木村 俊一, 福重 真一, Gu Zhaodi, 嶋 健太郎, 柴田 近, 堀井 明, 佐々木 巖

    日本外科学会雑誌　111　(臨増2)　384-384　2010年3月

    出版者・発行元： (一社)日本外科学会

    ISSN： 0301-4894

  13. 消化器癌においてNDRG2はプロモーターのメチル化によって発現抑制される(Promoter hypermethylation and reduced expression of NDRG2 in gastrointestinal cancers)

    山村 明寛, 三浦 康, 木内 誠, 安藤 敏典, 矢崎 伸樹, 田中 直樹, 唐澤 秀明, 佐瀬 友彦, 福重 真一, Gu Zhaodi, 柴田 近, 佐々木 巖, 堀井 明寛

    日本癌学会総会記事　68回　173-173　2009年8月

    出版者・発行元： 日本癌学会

    ISSN： 0546-0476

  14. Whole Genome Amplificationを利用した膵癌の遺伝子診断 査読有り

    阿部忠義, 砂村眞琴, 江川新一, 福山尚治, 元井冬彦, 福重真一, 堀井明, 海野倫明

    日本消化器外科学会雑誌　39　(7)　1180-1180　2006年7月

  15. PanIN病変,膵癌のWhole Genome Amplificationを用いたゲノム解析 査読有り

    阿部忠義, 砂村眞琴, 江川新一, 福山尚治, 元井冬彦, 福重真一, 堀井明, 海野倫明

    膵臓　21　(3)　249-249　2006年6月

  16. Fluorescence in situ hybridization analysis of breast cancer: Positive association between loss of 17p13 and HER2 overexpression 査読有り

    Mitsue Oguma, Takuya Moriya, Shinichi Fukushige, Takanori Ishida, Akira Horii, Noriaki Ohuchi

    FUTURE MEDICAL ENGINEERING BASED ON BIONANOTECHNOLOGY, PROCEEDINGS　489-+　2006年

    DOI： 10.1142/9781860948800_0053 　

  17. 膵液中の細胞を用いた膵癌の遺伝子診断 査読有り

    砂村眞琴, 福重真一, 堀井明, 阿部忠義, 松野正紀

    コンセンサス癌治療　2　(1)　46-49　2003年2月

  18. Isolation and characterization of the human gene homologous to the Drosophila headcase (hdc) gene in chromosome bands 6q23-q24, a region of common deletion in human pancreatic cancer 査読有り

    Naohiko Makino, Takashi Yamato, Hiroko Inoue, Toru Furukawa, Tadayoshi Abe, Tadaaki Yokoyama, Toshimasa Yatsuoka, Shinichi Fukushige, Seiichi Orikasa, Tsuneo Takahashi, Akira Horii

    Mitochondrial DNA　11　(6)　547-553　2001年

    DOI： 10.3109/10425170109041340 　

    ISSN： 1940-1736 1940-1744

  19. Allelic imbalanceを指標にした膵癌の存在診断・悪性度診断 招待有り

    八岡利昌, 福重真一, 堀井明

    消化器科　30　(1)　98-105　2000年1月

  20. 膵液中の細胞を用いた膵腫瘍の早期診断

    福重 真一, 堀井 明

    Cytometry research : 日本サイトメトリー学会機関誌　9　(1)　53-58　1999年6月25日

    ISSN： 0916-6920

  21. Comparative genomic hybridization(CGH) 膵液中の細胞を用いた膵腫瘍の早期診断 招待有り

    福重真一, 堀井明

    Cytometry Research　9　(1)　53-58　1999年6月

  22. WS1a-3 第18番染色体長腕の遺伝子異常は膵癌発生の初期変化である : 膵液中の細胞のFISH法による検討

    福重 真一, 砂村 眞琴, 小針 雅男, 松野 正紀, 堀井 明

    日本外科学会雑誌　100　54-54　1999年2月10日

    出版者・発行元： 一般社団法人日本外科学会

    ISSN： 0301-4894

  23. すいがんで高頻度に欠失している第12番染色体長腕の解析

    古川徹, 八岡利昌, YOUSSEF E M, 福重真一, 砂村真琴, 堀井明

    日本癌学会総会記事　58th　1999年

    ISSN： 0546-0476

  24. すい液中細胞利用によるすい腫ようの新たな遺伝子診断法の開発 染色体・遺伝子異常を指標としたすい腫ようの個性化の試み

    八岡利昌, 福重真一, 古川徹, 堀井明

    日本人類遺伝学会大会プログラム・抄録集　44th　1999年

  25. Allelic imbalanceを指標にしたすい癌の存在診断および悪性度診断の検討

    八岡利昌, 古川徹, 福重真一, 木村光宏, 阿部忠義, 砂村真琴, 武田和憲, 松野正紀, 堀井明

    日本癌学会総会記事　58th　1999年

    ISSN： 0546-0476

  26. ミスマッチ修復タンパクhPMS2およびそのファミリーメンバーhPMS2L群とhMLH1やその他のタンパクとの相互作用の解析

    福重 真一, 堀井 明

    日本分子生物学会年会プログラム・講演要旨集　21　373-373　1998年12月1日

  27. 膵腫瘍の診断において膵液中の細胞を用いたFISH法は有用である

    福重 真一, 古川 徹, 佐藤 賢一, 砂村 眞琴, 小針 雅男, 堀井 明

    日本癌学会総会記事　57　713-713　1998年8月

  28. W2-7 遺伝子解析に基づいた膵癌に対する新たな診療体系の確立(第52回日本消化器外科学会総会)

    砂村 眞琴, 木村 光宏, 阿部 忠義, 丁 良浩, 福山 尚治, 江川 新一, 小針 雅男, 堀井 明, 福重 真一, 古川 徹, 八岡 利昌, 横山 忠明, 濱田 洋文, 元井 冬彦, 吉田 陽子, 松野 正紀

    日本消化器外科学会雑誌　31　(6)　1314-1314　1998年6月1日

    出版者・発行元： 一般社団法人日本消化器外科学会

    ISSN： 0386-9768

  29. 膵癌のCGH解析 (組織培養工学)

    福重真一, 堀井明

    組織培養工学　23　(9)　339-344　1997年8月

  30. Genetic instabilityと発癌 マイクロサテライト不安定性と発癌 (血液・腫瘍科)

    福重真一, 堀井明

    血液・腫瘍科　34　(6)　431-438　1997年6月

  31. [Disruption of mismatch repair system in human cancers].

    S Fukushige, A Horii

    Nihon rinsho. Japanese journal of clinical medicine　54　(4)　1002-7　1996年4月

    ISSN： 0047-1852

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    It is known that transformation of normal cells to cancer cells is caused by the accumulation of successive mutations in oncogenes and/or tumor suppressor genes. Since four DNA mismatch repair genes (hMSH2, hMLH1, hPMS1 and hPMS2) have been identified as the cause of hereditary nonpolyposis colorectal cancer (HNPCC), the role of defective mismatch repair system in the development of sporadic cancers with microsatellite instability has also been discussed. Defects in mismatch repair genes would contribute to mutations in genes, including oncogenes and tumor suppressor genes, at an increased rate. Furthermore, recent investigations suggested that this mechanism was also involved in the development of multiple primary cancers as well.

  32. DNAミスマッチ修復遺伝子異常とreplication error(genomic instability) 発がんにおけるDNAミスマッチ修復遺伝子の異常の関与 (日本臨床)

    福重真一, 堀井明

    日本臨床　54　(4)　1002-1007　1996年4月

  33. Genetic alterations in human pancreatic cancer 査読有り

    A Horii, M Kimura, T Abe, S Fukushige, T Furukawa, M Sunamura, M Kobari, S Matsuno

    RECENT ADVANCES IN GASTROENTEROLOGICAL CARCINOGENESIS I　231-238　1996年

  34. A novel oncogene from a human hepatocellular carcinoma. 国際誌

    K Matsubara, T Ochiya, I Hatada, M Shiozawa, S Fukushige, M Araki, A Fujiyama, T Tsurimoto

    Princess Takamatsu symposia　17　133-41　1986年

    詳細を見る 詳細を閉じる

    Primary human hepatocellular carcinomas (HCC) were surveyed for oncogenes by transformation assays using NIH 3T3 cells and calcium phosphate coprecipitation method. One new transforming DNA, called lca (for liver cancer) was obtained, and its properties were studied in detail. The lca DNA, localized in a 10.5 kb DNA fragment, was assigned to human chromosome 2. It showed identical restriction enzyme cleavage profiles as its counterpart DNA obtained from normal tissue, indicating that there is no extensive DNA rearrangement associated with activation process of the lca DNA. The normal counterpart DNA shows no transforming activity. Recombinant genes of the laca and its normal counterpart made in vitro have allowed localization of the site of "activation" to a limited region of the 10.5 kb fragment. An independently obtained transforming DNA from another HCC exhibited identical restriction enzyme cleavage profiles. Thus, lca DNA is likely to represent a commonly encountered transforming DNA in HCC.

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書籍等出版物 2

  1. Biomarkers in Cancer

    Fukushige S, Horii A

    Springer　2015年

    ISBN: 9789400777446

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    DOI: 10.1007/978-94-007-7744-6_45-1

  2. Cytochromes P450, Biochemistry, Biophysics and Drug Metabolism. 13th International Conference on Cytochromes P450.

    Kikuchi H. Fukushige, S. Shibazaki, M. Sohel A, Takeuchi T

    Monduzzi Editore, Bologna (Italy)　2003年4月

講演・口頭発表等 60

  1. 膵癌細胞株においてシチジンデアミナーゼの発現増加はゲムシタビン耐性獲得に関与する

    日吉貴子、齋木由利子、佐々木彰之、廣田嵩人、平山明由、曽我朋義、福重真一、堀井 明

    第78回日本癌学会学術総会　2019年9月

  2. IRX1の異常メチル化は前立腺癌に高頻度で発生し、増殖を活性化する

    高橋正博、三塚浩二、伊藤明宏、堀井明、福重真一.

    第78回日本癌学会学術総会　2019年9月

  3. LHX6はエピジェネティックに不活性化される膵癌の癌抑制遺伝子候補である

    ヤクブアブドゥリシディ、堀井明、元井冬彦、海野倫明、福重真一

    第78回日本癌学会学術総会　2019年9月

  4. PYCARDは前立腺癌において異常にメチル化し、発現低下している

    福重真一、宮内隼弥、高橋正博、齋木由利子、大久保鉄平、三塚浩二、荒井陽一、堀井明

    第78回日本癌学会学術総会　2019年9月

  5. アポトーシス誘導遺伝子PYCARDは前立腺癌でDNA高度メチル化により発現抑制される

    宮内隼弥、高橋正博、大久保鉄平、齋木由利子、三塚浩二、荒井陽一、堀井明、福重真一.

    第108回日本病理学会総会　2019年5月

  6. DNA hypermethylation of IRX4 is a frequent event that may confer growth advantage to pancreatic cancer cells.

    Chakma K, Gu Z, Motoi F, Unno M, Horii A, Fukushige S

    108th American Association for Cancer Research Annual Meeting, Atlanta, GA, USA, 2019.　2019年3月

  7. Relationship between expression of S100A10 and prognosis in lung squamous carcinoma.

    佐藤公昭、齋木由利子、新井一守、石沢興太、福重真一、青木献広、櫻田晃、岡田克典、堀井明

    第77回日本癌学会学術総会　2018年9月

  8. ZNF750 gene promoter is aberrantly methylated in prostate cancer.

    高橋正博、三塚浩二、齋木由利子、堀井明、荒井陽一、福重真一.

    第77回日本癌学会学術総会　2018年9月

  9. IRX4, a hypermethylated gene in pancreatic cancer, regulates expression of a subset of cancer-related genes.

    福重真一、Zhaodi Gu、堀井明

    第77回日本癌学会学術総会　2018年9月

  10. Methylation of the PYCARD gene promoter is a highly frequent event in prostate tumorigenesis.

    福重真一、宮内隼弥、大久保鉄平、齋木由利子、高橋正博、三塚浩二、荒井陽一、堀井明

    第76回日本癌学会学術総会　2017年9月

  11. Methylation-mediated silenced PYCARD plays a key role in human prostate cancer.

    Fukushige S, Miyauchi T, Okubo T, Mitsuzuka K, Arai Y, Horii A:

    108th American Association for Cancer Research Annual Meeting, Washington DC, USA, 2017.　2017年

  12. Methylation-mediated silenced PYCARD plays a key role in human prostate cancer. 国際会議

    The 2017 Japan-NIH Joint Symposium, Sendai, Japan,　2017年2月15日

  13. DNA hypermethylation of IRX4 is a frequent event that may confer growth advantage to pancreatic cancer cells.

    福重真一、チャクマ・カンチャン、元井冬彦、海野倫明、堀井明.

    第75回日本癌学会学術総会　2016年10月

  14. Targeted TET oxidase activity through methyl-CpG binding domain extensively suppresses cancer cell proliferation.

    Fukushige S, Mizuguchi Y, Chakma K, Saiki Y, Horii A

    107th American Association for Cancer Research Annual Meeting, New Orleans, LA, USA, 2016.　2016年4月

  15. Targeted TET oxidase activity through methyl-CpG binding domain extensively suppresses cancer cell proliferation. 国際会議

    2016年4月

  16. Methyl-CpG targeted transcriptional activation (MeTA) induces apoptosis in LNCaP human prostate cancer cells by reactivating hypermethylated genes. 国際会議

    2016年2月

  17. DNMT-independent reactivation of hypermethylated genes induces growth suppression and apoptosis in LNCaP cells

    福重真一, 宮内隼也, 堀井明

    第74回日本癌学会学術総会　2015年10月8日

  18. Molecular characterization of oncogenic properties of S100A4 in pancreatic and lung cancers, and identification of PRDM2 and IFI27 as the candidate downstream genes 国際会議

    Akira Horii, Na Chen, Hitoshi Sekine, Nobukazu Tsukamoto, Takahiro Tabata, Yuriko Saiki, Shinichi Fukushige, Makoto Sunamura

    American Society of Human Genetics Annual Meeting 2014　2014年10月18日

  19. Methyl-CpG targeted DNA demethylation by TET hydroxylase activity suppresses the growth of cancer cells

    福重真一, 齋木由利子, 堀井明

    第73回日本癌学会学術総会　2014年9月25日

  20. S100A4 is frequently overexpressed in lung cancer cells and promotes cell motility

    陳娜, 齋木由利子, 砂村真琴, 福重真一, 堀井明

    第73回日本癌学会学術総会　2014年9月25日

  21. TET oxidase accumulated on methyl-CpG sites extensively upregulates methylated genes through DNA demethylation 国際会議

    Shinichi Fukushige, Yasuhiko Mizuguchi, Akira Horii

    105th American Association for Cancer Research Annual Meeting　2014年4月5日

  22. IFI27 and NOV, downstream regulated genes by S100A4, are playing important roles in pancreatic carcinogenesis 国際会議

    Na Chen, Yuriko Saiki, Hitoshi Sekine, Makoto Sunamura, Shinichi Fukushige, Fuyuhiko Motoi, Shinichi Egawa, Michiaki Unno, Akira Horii

    105th American Association for Cancer Research Annual Meeting　2014年4月5日

  23. TET1蛋白のヒドロキシラーゼ活性はエピジェネティックに転写抑制された遺伝子の再活性化を引き起こす

    福重真一, 水口康彦, 堀井明

    第72回 日本癌学会学術総会　2013年10月3日

  24. S100A4の下流で制御されるIFI27、NOVの膵癌の発生、進展における役割の解析

    陳娜, 齋木由利子, 砂村真琴, 福重真一, 元井冬彦, 江川新一, 海野倫明, 堀井明

    第72回 日本癌学会学術総会　2013年10月3日

  25. MeTA-array, a useful method to identify genes transcriptionally silenced by tumor-specific hypermethylation in cancer. 国際会議

    Fukushige S, Horii A

    104th American Association for Cancer Research Annual Meeting　2013年4月6日

  26. ヒト癌において腫瘍特異的な高度メチル化により転写抑制された遺伝子のMeTA-arrayによる効率的探索法の開発

    福重真一, 堀井明

    第７１回日本癌学会学術総会　2012年9月19日

  27. ゲムシタビン耐性ヒト癌細胞株におけるdeoxycytidine kinaseの不活化

    齋木由利子, 吉野優樹, 福重真一, 砂村真琴, 石田晶玄, 元井冬彦, 江川新一, 海野倫明, 堀井明

    第７１回日本癌学会学術総会　2012年9月19日

  28. miR-34a発現低下は鼻副鼻腔癌におけるシスプラチン化学療法の予後規定因子である

    小川武則, 齋木由利子, 志賀清人, 松浦一登, 加藤健吾, 西條茂, 小林俊光, 福重真一, 堀井明

    第７１回日本癌学会学術総会　2012年9月19日

  29. メチルCpG配列を標的とする転写活性化とマイクロアレイの組み合わせはヒトがんにおける低メチル化遺伝子の同定を可能にする

    福重真一, 陳娜, 堀井明

    第７０回日本癌学会学術総会　2011年10月3日

  30. 大腸癌における新規癌抑制遺伝子NDRG2のエピジェネティックな発癌制御機構

    山村明寛, 堀井明, 三浦康, 唐沢秀明, 阿部佳子, 内藤剛, 小川仁, 木内誠, 矢崎伸樹, 羽根田祥, 渡辺和宏, 大沼忍, 佐瀬友彦, 鈴木秀幸, 斉木由利子, 福重真一, 柴田

    第74回大腸癌研究会　2011年1月21日

  31. ヒトがんにおいて各メチルCpG結合ドメインは異なるメチル化遺伝子を標的とする能力をもつ

    福重真一, 堀井明

    第６９回 日本癌学会学術総会　2010年9月22日

  32. 癌抑制遺伝子NDRG2のエピジェネティックサイレンシングは消化器発癌を進行させる

    山村明寛, 三浦康, 阿部佳子, 福重真一, 斉木由利子, 木内誠, 安藤敏典, 唐沢秀明, 金子直征, 佐瀬友彦, 柴田近, 佐々木巌, 堀井明

    第６９回 日本癌学会学術総会　2010年9月22日

  33. メチル化で発現抑制された遺伝子を特定する新規の方法「MeTA」の膵癌解析への応用

    清水秀幸, 福重真一, 堀井明

    第99回 日本病理学会総会　2010年4月27日

  34. Identification of novel targets for aberrant methylation in pancreatic cancer by a newly developed method “methyl-CpG targeted transcriptional activation (MeTA). 国際会議

    Fukushige, S, Shimizu, H, Sato, Y, Horii, A

    101st American Association for Cancer Research Annual Meeting　2010年4月17日

  35. S100A4 regulates tumor growth, motility, and invasion in pancreatic cancer. 国際会議

    Sekine, H, Tabata, T, Tsukamoto, N, Yamamura, A, Abe, K, Yoshino, Y, Sato, K, Chen, N, Umetsu, Y, Sato, D, Gu, Z, Fukushige, S, Shima, K, Motoi, F, Egawa, S, Sunamura, M, Horii, A

    101st American Association for Cancer Research Annual Meeting　2010年4月17日

  36. Expression of the N-myc downstream-regulated gene 2 (NDRG2) is frequently suppressed by promoter hypermethylation in human gastrointestinal and pancreatic cancers. 国際会議

    Yamamura, A, Miura, K, Karasawa, H, Abe, K, Mizuguchi, Y, Jin, G, Gu, Z, Fukushige, S, Kaneko, N, Kinouchi, M, Ando, T, Yazaki, N, Tanaka, N, Sase, T, Shibata, C, Sasaki, I, Horii, A

    101st American Association for Cancer Research Annual Meeting　2010年4月17日

  37. 癌抑制遺伝子NDRG2のエピジェネティックサイレンシングは消化器発癌を進行させる

    山村明寛, 三浦康, 木内誠, 安藤敏典, 矢崎伸樹, 田中直樹, 唐澤秀明, 佐瀬友彦, 木村俊一, 福重真一, Zhaodi Gu, 嶋健太郎, 柴田近, 堀井明, 佐々木巌

    第110回日本外科学会定期学術集会　2010年4月8日

  38. Identification of epigenetically silenced genes by the novel methyl-CpG-targeted transcriptional activation method in human pancreatic cancer. 国際会議

    Hideyuki Shimizu, Yuko Sato, Akira Horii, Shinichi Fukushige

    The 8th AACR/JCA Joint Conference　2010年2月5日

  39. Identification of epigenetically silenced genes by methyl-CpG targeted transcriptional activation in pancreatic cancer.

    Shinichi Fukushige, Hideyuki Shimizu, Akira Horii

    第68回 日本癌学会学術総会　2009年10月1日

  40. Methyl-CpG targeted transcriptional activation identifies transcriptionally silenced genes by DNA hypermethylation.

    Yuko Sato, Akira Horii, Shinichi Fukushige

    第68回 日本癌学会学術総会　2009年10月1日

  41. S100A4 regulates cell growth and motility in pancreatic cancer cells

    Hitoshi Sekine, Nobukazu Tsukamoto, Takahiro Tabata, Yuki Yoshino, Yukiko Umetsu, Zhaodi Gu, Daisuke Sato, Kentaro Shima, Shinichi Fukushige, Fuyuhiko Motoi, Shinichi Egawa, Makoto Sunamura, Akira Horii

    第68回 日本癌学会学術総会　2009年10月1日

  42. Promoter hypermethylation and reduced expression of NDRG2 in gastrointestinal cancers

    Akihiro Yamamura, Koh Miura, Makoto Kinouchi, Toshinori Andou, Nobuki Yazaki, Naoki Tanaka, Hideaki Karasawa, Tomohiko Sase, Shinichi Fukushige, Zhaodi Gu, Chikashi Shibata, Iwao Sasaki, Akira Horii

    第68回 日本癌学会学術総会　2009年10月1日

  43. Methyl-CpG targeted transcriptional activation in human cancer cells 国際会議

    Shinichi Fukushige

    Japan-Denmark Joint Workshop "Molecular Cancer Research"　2009年1月19日

  44. Methyl-CpG targeted p300 recruitment reactivates the expression of epigenetically silenced tumor suppressor genes

    Shinichi Fukushige, Akira Horii

    the 67th Annual Meeting of the Japanese Cancer Association　2008年10月28日

  45. がん抑制遺伝子のエピジェネティックサイレンシングはヒストン修飾の改変によって再活性化される

    福重真一, 近藤恵美子, 堀井 明

    第30回日本分子生物学会年会・第80回日本生化学会大会　2007年12月11日

  46. Changes in histone modifications reactivate the expression of epigenetically silenced tumor suppressor genes in cancer cells 国際会議

    Shinichi Fukushige, Emiko Kondo, Akira Horii

    The American Society of Human Genetics 57th Annual Meeting　2007年10月23日

  47. Changes in histone modifications reactivate the expression of epigenetically silenced tumor suppressor genes

    Shinichi Fukushige, Emiko Kondo, Akira Horii

    第６６回 日本癌学会学術総会　2007年10月3日

  48. GSTP1遺伝子の再発現におけるヒストン脱アセチル化酵素阻害の役割

    福重真一, 近藤恵美子, 堀井明

    第65回日本癌学会学術総会　2006年9月28日

  49. メチルCpG結合蛋白MBD2、MBD4を介した転写抑制におけるRET finger proteinの役割

    近藤恵美子, Zhaodi Gu, 堀井明, 福重真一

    第65回日本癌学会学術総会　2006年9月28日

  50. Whole Genome Amplificationを利用した膵癌の遺伝子診断

    阿部忠義, 砂村眞琴, 江川新一, 福山尚治, 元井冬彦, 福重真一, 堀井明, 海野倫明

    第61回日本消化器外科学会定期学術総会　2006年7月13日

  51. PanIN病変、膵癌のWhole Genome Amplificationを用いたゲノム解析

    阿部忠義, 砂村眞琴, 江川新一, 福山尚治, 元井冬彦, 福重真一, 堀井明, 海野倫明

    第37回日本膵臓学会大会　2006年6月29日

  52. Ret finger protein mediates MBD2- and MBD4-dependent transcriptional repression. 国際会議

    Fukushige, S, Gu, Z, Kondo, E, Horii, A

    97th American Association for Cancer Research Annual Meeting　2006年4月1日

  53. 癌関連遺伝子の高度メチル化プロモーターにおけるMBD4蛋白の役割

    福重 真一, 近藤 恵美子, Zhaodi Gu, 堀井 明

    第６４回 日本癌学会学術総会　2005年9月14日

  54. メチルCpG結合蛋白を介した転写抑制におけるRet finger proteinの役割

    Zhaodi Gu, 近藤 恵美子, 堀井 明, 福重 真一

    第６４回 日本癌学会学術総会　2005年9月14日

  55. Cre-lox遺伝子挿入系を用いたp53ミスセンス変異の解析

    近藤 恵美子, 堀井 明, 福重 真一

    第６４回 日本癌学会学術総会　2005年9月14日

  56. 高度メチル化プロモーター領域へのMBD4蛋白の関与

    福重真一, 近藤恵美子, Zhaodi Gu, 堀井明

    第63回 日本癌学会学術総会　2004年9月29日

  57. メチルCpGを介した転写抑制におけるMBD4とその相互作用蛋白RFPの関与

    近藤恵美子, Zhaodi Gu, 堀井明, 福重真一

    第63回 日本癌学会学術総会　2004年9月29日

  58. メチルCpG結合蛋白MBD4による転写抑制活性

    福重 真一, 近藤 恵美子, 堀井 明

    第２６回 日本分子生物学会年会　2003年12月10日

  59. メチルCpG結合蛋白MBD4の転写抑制活性

    福重 真一, 近藤 恵美子, 堀井 明

    第６２回 日本癌学会総会　2003年9月25日

  60. hMLH1のN末に相互作用する蛋白のスクリーニング

    近藤 恵美子, 堀井 明, 福重 真一

    第６２回 日本癌学会総会　2003年9月25日

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共同研究・競争的資金等の研究課題 20

  1. 前立腺癌の転移におけるZNF750―TWIST1経路の解明

    福重 真一

    提供機関：Japan Society for the Promotion of Science

    制度名：Grants-in-Aid for Scientific Research

    研究種目：Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

    研究機関：Tohoku University

    2024年4月1日 ～ 2027年3月31日

  2. 前立腺癌診断に向けたDNAメチル化を標的とするリキッドバイオプシー技術の開発

    福重 真一, 三塚 浩二

    提供機関：Japan Society for the Promotion of Science

    制度名：Grants-in-Aid for Scientific Research

    研究種目：Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

    研究機関：Tohoku University

    2021年4月1日 ～ 2024年3月31日

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    本研究では、1) 前立腺癌における4種の高メチル化遺伝子（PYCARD、ZNF750、SLC30A2、IRX1）の腫瘍形成における役割を解明すること、2)これら4種のDNAメチル化を標的とするリキッドバイオプシー技術を開発し、前立腺癌の早期診断への可能性や予後との関連を調べることを目的とした。 本年度は、まず、３種の前立腺癌細胞株（DU 145、LNCaP、PC-3）に４種の遺伝子（PYCARD、ZNF750、SLC30A2、IRX1）の発現ベクターを導入し、コロニー形成能を調べた。その結果、４種すべての遺伝子でいずれの前立腺癌細胞株でもコロニー形成が抑制された。次に、LNCaP前立腺癌細胞株にTet遺伝子発現誘導系を導入し、PYCARD、ZNF750、IRX1遺伝子をそれぞれ発現誘導したところ、いずれも細胞増殖が抑制された。一方、正常前立腺細胞株RWPE-1を用いZNF750、IRX1、SLC30A2遺伝子のノックダウンをしたところ、siZNF750、siSLC30A2では細胞増殖が亢進した。これらの結果は、ZNF750、SLC30A2の発現が前立腺細胞の増殖に関わっていることを示唆した。 また、ホルマリン固定、パラフィン包埋した前立腺癌手術標本48症例からマイクロダイセクションにより正常部と腫瘍部を分取し、DNAを抽出後、qMSP（定量メチル化特異的PCR）により正常部と腫瘍部におけるPYCARD、ZNF750、IRX1遺伝子のプロモーター領域のメチル化を検討した。その結果、PYCARDで83%（40/48）、ZNF750で90%（43/48）、IRX1で71%（32/45）の症例で腫瘍においてメチル化が正常に比べ亢進していることが明らかとなった。TCGAパブリックデータでもこれら4遺伝子の前立腺癌での高メチル化、発現低下が見られ、我々のデータを支持する結果となった。

  3. DNAメチル化を標的とするリキッドバイオプシーを用いた膵癌診断技術の開発

    顧 兆悌, 元井 冬彦, 畠 達夫, 福重 真一

    提供機関：Japan Society for the Promotion of Science

    制度名：Grants-in-Aid for Scientific Research

    研究種目：Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

    研究機関：Tohoku University

    2019年4月1日 ～ 2022年3月31日

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    本研究では、我々が独自に開発した高メチル化遺伝子探索法MeTAにより膵癌特異的に高率にメチル化され、転写抑制される6遺伝子のDNAメチル化を標的とするリキッドバイオプシーの技術開発を検討した。膵癌を含めた膵疾患患者の血漿2 mLから得られたcfDNA量は平均17.4 ngであり、高分子のバンドラダーを検出できなかった。現時点でのDNAメチル化の検出は難しいが、血漿サンプリング法やメチル化DNA濃縮法などの検討が必要である。一方、MeTAで同定されたLHX6遺伝子の解析から高メチル化による転写抑制は膵癌細胞の増殖に重要な役割を果たすことを明らかにした。

  4. アポトーシス誘導遺伝子PYCARDの前立腺腫瘍形成における役割の解明

    福重 真一

    提供機関：Japan Society for the Promotion of Science

    制度名：Grants-in-Aid for Scientific Research

    研究種目：Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

    研究機関：Tohoku University

    2018年4月1日 ～ 2022年3月31日

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    前立腺癌モデルマウスを用い、ヒト前立腺癌において高頻度メチル化異常を示すPYCARD遺伝子の前立腺癌の発生、進展における役割を明らかにすることを目的とした。個体数が少ないため、結論を得るにはさらなる解析が必要であるが、前立腺特異的Ptenノックアウトマウスでは、Pycard遺伝子型が前立腺癌の前癌病変、腫瘍サイズに影響を及ぼす可能性がある。 一方、ヒト前立腺癌組織を用いた解析結果よりPYCARDの不活化は、前癌病変ですでに生じている可能性があること、PYCARDの異常なDNAメチル化は、グリソンスコア7以上の前立腺癌の際立った特徴であることが示唆された。

  5. DNA脱メチル化技術を用いた前立腺癌細胞増殖に関与する高度メチル化遺伝子の探索

    福重 真一

    提供機関：Japan Society for the Promotion of Science

    制度名：Grants-in-Aid for Scientific Research

    研究種目：Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

    研究機関：Tohoku University

    2015年4月1日 ～ 2018年3月31日

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    DNAメチル化は、癌関連遺伝子発現を抑制し、高い増殖能力、不死化、浸潤、転移など癌の特徴に影響を及ぼす。我々は、ゲノムワイドなDNAメチル化遺伝子再活性化が前立腺癌細胞株LNCaPの増殖を著しく抑制し、アポトーシスを誘導することを見出した。アポトーシス誘導因子としてPYCARDを見出し、マイクロダイセクションした前立腺癌臨床検体を用い、高率にPYCARDプロモーター領域の癌特異的メチル化を見出した（46/51: 90%）。また、LNCaPにおけるPYCARD発現はアポトーシスを誘導した。これらの結果は、PYCARDの高度メチル化が前立腺癌の腫瘍形成において重要な役割を果たすことを示唆する。

  6. がん細胞におけるＤＮＡ脱メチル化技術の開発と早期診断バイオマーカー探索への応用

    福重 真一

    提供機関：Japan Society for the Promotion of Science

    制度名：Grants-in-Aid for Scientific Research

    研究種目：Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

    研究機関：Tohoku University

    2012年4月1日 ～ 2015年3月31日

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    本研究では、メチルCpG結合ドメイン（MBD）とTET1蛋白の触媒ドメイン（TET1-CD）からなる融合遺伝子を用いることによってゲノムワイドにメチル化遺伝子を脱メチル化し、再活性化する方法を開発した。本法は、癌細胞で高度メチル化により転写抑制された遺伝子を簡便に探索し、同定することに役立つ。本法を前立腺癌および大腸癌細胞株に適用したところ、癌細胞の増殖抑制が引き起こされた。これらの結果は、DNAメチル化が癌細胞の増殖促進に働くこと、また、その原因遺伝子のメチル化がバイオマーカーとして利用できる可能性を示している。

  7. がんにおけるDNA高度メチル化を指標としたバイオマーカーの探索

    福重 真一

    提供機関：Japan Society for the Promotion of Science

    制度名：Grants-in-Aid for Scientific Research

    研究種目：Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

    研究機関：Tohoku University

    2009年 ～ 2011年

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    がんにおいてプロモーター領域の高度メチル化により転写抑制された遺伝子を網羅的に探し出す新しい方法-MeTA法と遺伝子発現マイクロアレイを組み合わせた"MeTA-array"という方法-を開発した。本法により同定された遺伝子はプロモーター領域に高密度のCpGアイランドを含むという特徴をもつ。この方法を膵がんに適用し、診断・治療のバイオマーカーとしての可能性をもつがん特異的高度メチル遺伝子を同定した。

  8. がん関連遺伝子のエピジェネティックサイレンシングにおけるMBD蛋白の機能解析

    福重 真一

    提供機関：Japan Society for the Promotion of Science

    制度名：Grants-in-Aid for Scientific Research

    研究種目：Grant-in-Aid for Scientific Research (B)

    研究機関：Tohoku University

    2006年 ～ 2007年

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    がん関連遺伝子のエピジェネティックな転写制御には、プロモーター領域に存在するCpG配列の高度メチル化とメチルCpG結合ドメイン(MBD)蛋白を介したヒストン修飾の変化が大きく関与する。本研究ではMBD蛋白による転写制御メカニズムの解明を目指し、1)MBD4の相互作用蛋白の解析、および、2)MBD依存性の転写再活性化を指標とするMBD制御遺伝子の探索をおこなった。 まず、MBD2、 MBD4の転写抑制に新たな因子、RFPが関与することを見出した。RFPはMBD2、MBD4の転写抑制活性を増強することから、RFPが高レベルで発現する精子形成、胚発生、腫瘍形成などの時期でメチルCpG配列を介した転写抑制において重要な働きをしている可能性が示唆された。 また、プロモーター領域の高度メチル化によりDNA修復遺伝子MLH1の転写抑制が見られるヒト胎児腎細胞株HEK293Tに対し、MBDにNFkBの転写活性化ドメインを繋いだDNAコンストラクト(NFkB(AD)-MBD)を導入したところ、MLH1の転写再活性化が見られた。この反応は、MBD依存的であり、プロモーター領域におけるDNAメチル化に変化は見られなかった。NFkB(AD)-MBDによるがん関連遺伝子の転写再活性化は、これまで解析した4つの細胞株、計10遺伝子ですべて観察されることから一般的な現象と考えられる。さらに、NFkB(AD)-MBDを導入したHEK293T細胞を用いたマイクロアレイ解析によりCDH1など多くのがん関連遺伝子に転写レベルの上昇が見られた。したがって、本方法によりMBD蛋白を介しエピジェネティックな転写制御を受けるがん関連遺伝子を網羅的に検出することが可能と考えられる。

  9. 安定なRNA干渉を可能にするステーブル細胞株作製技術の開発

    福重 真一

    2005年 ～ 2006年

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    本研究ではCre-lox遺伝子挿入系を用い、ゲノム上の特定部位(前もって導入したlox部位)に二本鎖のsiRNAを発現するコンストラクトを正確に単一コピー挿入することによって、確実にRNA干渉をおこなう細胞株の作製を目的とした。 本年度は、Ltk-細胞に単一コピーのlox位を含む細胞株、73-14を用い、マウスRet finger protein (RFP)に対するRNA干渉コンストラクトをCre-lox遺伝子挿入系により導入したステーブル細胞株を作製し、その効果を解析した。まず、73-14にRFPのRNA干渉コンストラクトを含むloxターゲティングベクターとCre発現プラスミドをトランスフェクションし、G418での薬剤選択により14個の組換え体を得た。これらの組換え体からゲノムDNAを抽出し、種々のPCRで組換え部位、RNA干渉コンストラクトの存在を確認した。次に、ネオマイシン耐性遺伝子をプローブとしてサザンハイブリダイゼーションをおこない、14クローンすべてがゲノム中のlox部位に正確にRFPのRNA干渉コンストラクトをもつことを確認した。さらに、ターゲティングベクター中のCMVプロモーターをプローブとしサザンハイブリダイゼーションをおこない、14クローン中、11クローンが単一コピーの組換え体であり、残り3クローンは2コピー以上の組換え体であることが判明した。 ウエスタンブロティング法により14クローンのRFP干渉による蛋白レベルでの変化を解析した結果、どのクローンでも親株に比べ約50%のノックダウンが観察された。興味深いことにRNA干渉コンストラクトを2コピー以上もつ3個の組換え体でも単一コピーをもつ残り11個の組換え体とノックダウン率に大きな違いが見出せなかった。このことは、コピー数よりもRNA干渉を引き起こすshRNAの塩基配列を変える方がより効果的にRNA干渉をおこなえる可能性を示すと考えられる。

  10. メチルCpG結合蛋白MBD4とRFP蛋白を介した転写抑制メカニズムの解明

    近藤 恵美子, 福重 真一

    提供機関：Japan Society for the Promotion of Science

    制度名：Grants-in-Aid for Scientific Research

    研究種目：Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

    研究機関：Tohoku University

    2005年 ～ 2006年

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    がん関連遺伝子のプロモーター領域に見られるCpG配列のメチル化は、遺伝子を不活化する機構の一つであり、発がんの主要なプロセスを担っている。メチルCpG結合(MBD)蛋白は、がん関連遺伝子の高度メチル化プロモーターに特異的に結合し、転写抑制複合体をリクルートする。本研究では、1)MBD4の転写抑制機構を明らかにすること、2)MBD4の相互作用蛋白として単離されたRFPとMBD4の関係を明らかにすることによって、DNAメチル化を介したがんの発生、進展のメカニズムを探ることを目的とした。 本研究では、これまでDNA修復蛋白と考えられてきたメチルCpG結合蛋白MBD4に他のMBD蛋白同様、転写を抑制する活性があることを見出した。MBD4は、メチルCpG配列に結合し、直接、HDAC1、Sin3Aなどのコリプレッサーをリクルートすることによって、ピストンの脱アセチル化を促し、転写を抑制する。がん関連遺伝子CDKN2A、MLH1のメチル化プロモーターにMBD4が特異的に結合するという事実は、MBD4がこれらの遺伝子の転写抑制になんらかの形で関与していることを強く示唆する。また、MBD4とその相互作用蛋白RFPの結合は、転写抑制活性を増強することから、RFPが高レベルで発現する精子形成、胚発生、腫瘍形成などの時期でメチルCpG配列を介した転写抑制において重要な働きをしている可能性が示唆され、今後の研究の進展が期待される。

  11. 胚細胞変異体を用いたDNAミスマッチ修復蛋白hMLHIの機能解析

    福重 真一

    提供機関：Japan Society for the Promotion of Science

    制度名：Grants-in-Aid for Scientific Research

    研究種目：Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

    研究機関：Tohoku University

    2001年 ～ 2002年

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    DNAミスマッチ修復(MMR)遺伝子、hMLH1の胚細胞変異は、遺伝性非腺腫症性大腸癌(HNPCC)の主要な原因である。また、その異常の約30%がミスセンス変異であるという特徴をもつ。そのため、これらのミスセンス変異が本当に病気の原因であるのか、それとも単なる多型なのかを評価することが重要である。本研究で、われわれは、これらの点を明らかにする簡便で効率の良いアッセイ法を開発することに成功した。まず、ICG-HNPCCのデ-タベ-ス(http://www.nfdht.nl)を検索し123種のhMLH1ミスセンス変異を選択した。次に、hPMS2あるいは、hEXO1をbaitとして、two-hybrid assayをおこなった結果、78%(18/23)で野生型に比べ、β-ガラクトシダーゼ活性の著しい低下を検出した。また、β-ガラクトシダーゼ活性の低下が見られなかった5つのミスセンス変異のうち、2つは多型であることが判明した。一方、すでに報告のある9種のアミノ酸の変化を伴う多型については、野生型とほぼ同じβ-ガラクトシダーゼ活性を示すことが明らかとなった。さらに、hPMS2との相互作用領域の一部あるいは、大部分を含む11種のフレームシフト変異、3種のナンセンス変異、1種のin-frame deletionについても解析をおこない、同様に、著しく低いβ-ガラクトシダーゼ活性を示すことを見出した。これらをまとめると、87%(33/38)のhMLH1胚細胞変異がtwo-hybrid assayによって評価できることになる。さらなる解析の結果、これらの異常は、hMLH1蛋白のN末およびC末での構造異常によるものであることが明らかになった。したがって、この方法はhMLH1胚細胞変異、特に、評価の難しいミスセンス変異の簡便で正確な診断を可能にする。

  12. 膵癌の発生・進展に関与する遺伝子異常の解析

    堀井 明, 星 雅人, 福重 真一

    提供機関：Japan Society for the Promotion of Science

    制度名：Grants-in-Aid for Scientific Research

    研究種目：Grant-in-Aid for Scientific Research (B)

    研究機関：Tohoku University

    2000年 ～ 2001年

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    膵癌における高頻度欠失領域と予後との関係を検討し、3か所(12q、17p、18q)か予後不良と相関することを明らかにした。膵の前がん病変として考えられる粘液産成膵腫瘍(IPMT)では18qの欠失が高頻度に見られたが、SMAD4には全く異常が見られなかった。また、膵癌株に正常18番染色体を導入すると、SMAD4の異常の有無に無関係に増殖抑制効果が見られた。このことから、18qにはSMAD4以外にも癌抑制遺伝子が局在し、この機能の喪失が膵癌発生の初期変化として重要であると考えられた。12qにはKRASのルートでERKに特異的に脱リン酸化作用を示すDUSP6が局在する。膵のdysplasia/cisではDUSP6の発現の増強が見られるのに対し、浸潤癌では発現が高度に抑制され、特に低分化型の癌において顕著であった。アデノウイルスベクターにDUSP6遺伝子を組み込み、膵癌細胞に導入し強制発現させると細胞増殖は抑制され、アポトーシスが誘導された。本遺伝子を用いた遺伝子治療が可能であるとの可能性を示している。BAI1(brain specific angiogenesis inhibitor 1)は本来脳で特異的に発現し血管新生抑制作用があるが、これを膵癌細胞に導入すると血管新生が抑制され、腫瘍細胞の増殖は抑制された。tumor dormancyによる遺伝子治療の可能性がある。多くの腫瘍において異常が報告されている1p36-p35領域においてBACによるcontigを作成し解析を進めた。同領域のRIZ遺伝子はタンパクコード領域にマイクロサテライトがあり、各種がんにおいて異常を検討したところ、胃癌、大腸癌、子宮内膜癌などのMSI陽性の癌のみならず、これまでMSI陽性であっても標的遺伝子が不明であった膵癌においても、本遺伝子の異常が同定された。本遺伝子は、1pの標的遣云子である可能性がある。

  13. 巨大DNA断片の移入による発がん関連遺伝子の単離

    古川 徹, 砂村 眞琴, 福重 真一, 堀井 明, 渋谷 和彦

    提供機関：Japan Society for the Promotion of Science

    制度名：Grants-in-Aid for Scientific Research

    研究種目：Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

    研究機関：Tohoku University

    1999年 ～ 2000年

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    膵がんでは染色体1p,6q,9p,12q,17p,18qにヘテロ接合性の喪失(LOH)が高頻度に認められる。これらLOHの領域には機能喪失性の異常を来して膵がんの発生、進展に関与しているがん抑制遺伝子が存在する可能性が高い。本研究はこれら欠失領域を含む巨大DNA断片を用意し、それを欠失を示すがん細胞に導入し、腫瘍抑制効果を確認した上で発現遺伝子の探索から欠失領域に存在するがん抑制遺伝子を見い出すことを目的とした。欠失領域を含む巨大DNA断片を見い出すために酵母人工染色体(YAC)、細菌人工染色体(BAC)のマッピングを行った。6q,12q,上の欠失領域を完全にカバーするYAC,BACコンティグを完成させた。6q21上の最小欠失領域は500-kbのYACに含まれ、BAC3個によりカバーされるが、さらに周辺の領域を含む、BAC10個よりなる物理的距離1-Mb相当のBACコンティグを完成させた。本領域にはexpressed sequence tag(EST)が42個含まれることを明らかにした。このコンティグはWeb上http://www-alis.tokyo.jst.go.jp/HGS/plmap.pl?PIID=14で公開している。12q21上の欠失領域は1.5-MbのYAC2個、平均140-kbのBAC21個でカバーされる。同部位において新規のsequence tagged sites(STS)を40個同定し、ESTを10個マッピングした。欠失領域をカバーするクローンから新規遺伝子を幾つか単離し解析した。また、移入する膵がん細胞の遺伝的性質を知るために既知の腫瘍関連遺伝子について異常の有無を解析した。18qの欠失が比較的早期の膵腫瘍病変で認められることを明らかにした。18q複数のクローンをとってその表現型の解析、移入染色体のマッピング、候補がん抑制遺伝子の解析を行った。18番染色体を移入することにより18番染色体上及びそれに関連すると考えられる遺伝子群の発現回復が認められ、in vitroでの増殖抑制効果、in vivoでの造腫瘍性抑制効果が認められた。

  14. ヒト癌の発生,進展に関与する遺伝子異常の解析

    堀井 明, 福重 真一

    提供機関：Japan Society for the Promotion of Science

    制度名：Grants-in-Aid for Scientific Research

    研究種目：Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

    研究機関：Tohoku University School of Medicine

    1999年 ～ 1999年

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    1.膵癌において高頻度欠失の見られる領域のうち3箇所(12q,17p,18q)の染色体欠失が予後不良と相関することを明らかにした。また,膵の発癌過程で初期変化と考えられる18qにおいて,同領域のSMAD4遺伝子がホモ欠失している膵癌株に正常遺伝子を導入しても増殖能は抑制されなかった。一つの遺伝子異常が初期変化であり,かつ予後不良因子である可能性も否定できないが,上記結果を考え合わせると,18qにはSMAD4以外にもがん抑制遺伝子が局在する可能性がある。 2.子宮内膜癌では,高頻度に遺伝子異常があるPTEN遺伝子を用いた遺伝子治療を試みた。in vitroでは腫瘍細胞の増殖を抑制できたが,ヌードマウス移植癌では腫瘍縮小効果が見られず,実用化には更なる検討を要するものと考えられた。 3.非小細胞肺癌では,10qの高頻度欠失と同領域のDMBT1の異常が癌の発生・進展過程で重要な働きをしている高い可能性を見いだした。 4.神経芽細胞腫では14qの高頻度欠失領域の同定,1p32の高頻度欠失と同領域の相互転座点の同定を行った。それぞれ責任遺伝子単離へ向けて更なる解析を進めている。

  15. 遺伝子異常を指標とした膵癌の合理的な診断・治療法の開発 癌の個性に応じた診療体系の確立

    松野 正紀, 堀井 明, 砂村 真琴, 福重 真一, 古川 徹, 渋谷 和彦, 小針 雅男

    提供機関：Japan Society for the Promotion of Science

    制度名：Grants-in-Aid for Scientific Research

    研究種目：Grant-in-Aid for Scientific Research (A)

    研究機関：Tohoku Uniersity

    1998年 ～ 1999年

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    1.これまでに膵がんにおいて高頻度に欠失を同定した6染色体領域のうち12q,17p,18qの3箇所の欠失が予後不良と有意な相関を示すことを示した。17pはp53遺伝子の領域,18qは,SMAD4遺伝子の近傍である。 2.18qの欠失領域の標的遺伝子と考えられるSMAD4遺伝子のtwo-hitの異常のある膵癌細胞株に正常SMAD4遺伝子を導入してもがん細胞の増殖抑制効果は見られなかった。そのため,SMAD4遺伝子の異常は,増殖そのものに寄与するのではなく,発がん過程において,それ以外の何らかの機構での関与があるものと考えられる。ところで,18qの欠失が膵の発がん過程において初期変化であることを前年度までに明らかにしているが,本研究では18qの欠失が予後不良因子でもあることを示した。同領域にはSMAD4以外にもがん抑制遺伝子が存在し,一方の異常が初期変化,もう一方(恐らくSMAD4)の異常が予後不良因子である可能性が考えられる。 3.6q,12qにおいては,共通欠失領域をそれぞれ3箇所,2箇所同定し,6qの1箇所と12qの2箇所においては,欠失領域をカバーするBACによるコンティグを作成し,遺伝子を複数単離・解析した。12q21のDUSP6遺伝子,12q24のTDG遺伝子は多数の膵癌細胞株で発現抑制,あるいは消失が見られ,遺伝子発現が無くなることが発がん・進展過程に関与している可能性があるものと考えられ,現在,更なる解析を進めている。 4.MMP阻害剤やIL-12により腫瘍の血管新生が抑制されることを示し,腫瘍の増殖制御への応用の可能性を示した。また,p53の異常のあるがん細胞においてのみ増殖できるようた改変したアデノウイルスを作成し,膵癌の治療への応用の可能性を示した。

  16. DNA除去修復機構とその修復欠損の分子病態

    田中 亀代次, 関 周司, 安井 明, 花岡 文雄, 福重 真一, 山泉 克

    1996年 ～ 1999年

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    田中は、A群色素性乾皮症蛋白質、A及びB群コケイン症候群蛋白質、さらには、RNA polymerase IIと結合し、「転写と共役したヌクレオチド除去修復」及び転写機構に関与するXAB2蛋白質を同定し、XAB2が含まれる蛋白質複合体を精製した。質量分析法により、その構成因子をコードする遺伝子を同定した。マウスXAB2遺伝子をクローニングしてのち、XAB2遺伝子のノックアウトは胎児致死をもたらすことを明らかにした。RLGS法により、c-mycによるアポトーシス抑制に関わる転写因子がXPA欠損マウスの皮膚癌細胞で高発現していることを見つけた。花岡は、XP-V群の損傷DNA複製欠損を相補する蛋白質をHeLa細胞核抽出液より精製し、シクロブタン型ピリミジン2量体を乗り越えて正しく複製できる新規のDNAポリメラーゼであることを明らかにした。5例のXP-V群患者細胞において変異が確認されたことから、これがXPV責任遺伝子であることを証明した。安井は、8-オキソグアニンと誤対合したアデニンを切り出すヒトhMYH蛋白質が、ミトコンドリアと核に存在することを見つけた。また、光回復酵素のマウスホモログが日周リズムに必須の蛋白であることを示した。関は、大腸菌endonuclease IIIの哺乳類ホモログNTHL1遺伝子と結節性硬化症遺伝子TSC2とは、head to headで近接して存在し、両遺伝子の転写は基本的には両方向性のコアプロモーターで調節されていることを明らかにした。山泉は、電離放射線照射後のp53蛋白質セリン15のリン酸化がその安定化・活性化に重要であることを明らかにした。また、DDB2遺伝子に変異を持つXP-E群患者を見出し、この患者細胞ではピリミジン2量体の修復は正常だが6-4光産物の修復に遅れが認められることから、DDB2が6-4光産物の後期の修復に関与している可能性を示唆した。福重は、遺伝性非腺腫症性大腸癌の家系に見られる59種のhMLH1胚細胞変異のうち、50種でhMLH1-hPMS2相互作用の強い阻害を観察し、これがミスマッチ修復機構破壊の主な原因と考えた。

  17. 環状酵母人工染色体(YAC)移入による癌抑制遺伝子の同定

    福重 真一

    1997年 ～ 1998年

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    本研究は、遺伝子機能の欠損を原因とする疾患において、その原因遺伝子単離へのアプローチとして、欠損遺伝子を含むと考えられる環状のYACDNA断片を作製後、細胞に導入し、病態が修正されるかどうか検討することにある。本年度は、まず、マイクロサテライトマーカーを用いたアレロタイプ解析により膵癌の癌抑制遺伝子の候補領域として、第6番染色体長腕における共通欠失領域を3箇所同定し、その中でも最も高頻度(69%)のLOHを認めた領域(D6S449-D6S283)を6q21の500-kbに絞り込むことに成功した。また、胃癌、肺癌においてもアレロタイプ解析により16q24に共通欠失領域を見出した。次に、昨年まで検討していたCre-lox部位特異的組換えにより、環状のYACクローンを得るという方法から、より直接的で簡便な方法としてTransformation Associated Recombination(TAR)法によりヒトのゲノムDNAからマイクロサテライトマーカー周辺の塩基配列の情報だけを頼りに共通欠失領域を含む環状YACクローンを得ることを考案した。TAR法ではYACベクターに共通欠失領域を決める2つのマーカー周辺の塩基配列を挿入し、ヒトゲノムDNAと共に酵母細胞に導入し、酵母の高率な相同組換えを利用して2つのマーカー間のクローニングを行なう。しかしながら、今現在、期待されるYACクローンを得るに至っていない。その原因として、マイクロサテライトマーカー周辺の知られている塩基配列が200-300bpと短いため、酵母において特異的な領域での相同組換えの頻度が低いことが考えられる。マーカー周辺の塩基配列を決定し、より長いユニークなDNA断片をベクターに挿入するなどの改良を加えることが今後の課題である。

  18. 膵癌の発生,進展に関与する癌抑制遺伝子の同定

    堀井 明, 福重 真一, 砂村 真琴

    提供機関：Japan Society for the Promotion of Science

    制度名：Grants-in-Aid for Scientific Research

    研究種目：Grant-in-Aid for Scientific Research (B)

    研究機関：Tohoku University

    1995年 ～ 1996年

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    まず,100例を越える膵癌患者に由来する癌組織を収集し,組織学的に正常細胞の混入が50%以下のものを選び,その癌部と健常部の組織からDNAを抽出した。ひきつづき,全染色体領域にわたりマイクロサテライトマーカーのPCR法による染色体欠失を検索した。また,12個の膵癌細胞株と6個の膵癌原発組織(正常細胞の混入の少ないもの)に由来するDNAを用い,comparative genomic hybridization (CGH)法,fluorescence in situ hybridization (FISH)法により染色体領域のコピー数の異常を検討した。その結果,6か所の高頻度(30%以上)の欠失領域(1p,6q,9p,12q,17p,18q)と2か所の増幅領域(8q,20q)を検出し,これらの領域に癌遺伝子・癌抑制遺伝子が局在する可能性を示唆した。 欠失領域のうち,9pはMTS1,17pはp53,18qはDPC4が欠失の標的遺伝子と考えられた。われわれは,この3か所以外の領域から特に12qを選び,マイクロサテライトマーカーをふやして,さらに詳細な欠失地図を作成したところ,約1cMの共通欠失領域を同定し得た。この領域は既にYACクローン,BACクローンによりカバーしており,現在コスミドへサブクローニングし,コスミドコンティグを作成する作業を進めている。 増幅領域のうち8qはc-mycの領域と重なっていた。また,20qに関しては,コピー数の増加は2倍程度であったが,乳癌でも同領域の増幅が報告されており,共通の遺伝子異常が両者の発癌に関わっている可能性がある。 DNAミスマッチ修復異常の下流に位置する遺伝子異常としてtransforming growth factor(TGF)β receptor type II(RII)遺伝子とinsulin-like growth factor II receptor(IGFIIR)遺伝子における異常の検索を行い,大腸癌,胃癌ではRIIとIGFIIRの両方の異常がみられ,子宮体癌ではIGFIIRの異常がみられるが,膵癌ではいずれの遺伝子にも異常がみられないことを明らかにした。これらの事実から,膵における発癌メカニズムは大腸癌,胃癌,子宮体癌等とは異なっていることが示唆された。

  19. ヒト染色体の分離と細胞への導入

    福重 真一

    1987年 ～ 1988年

  20. デュアルレーザーを利用した染色体ソーティング技術の開発

    松原 謙一, 室津 知明, 落合 孝広, 福重 真一, 釣本 敏樹, 松原 謙一

    提供機関：Japan Society for the Promotion of Science

    制度名：Grants-in-Aid for Scientific Research

    研究種目：Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research

    研究機関：Osaka University

    1986年 ～ 1988年

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    ヒト染色体の構造を理解するため、【○!1】染色体の分離技術、【○!2】大量分取技術の開発を行った。まず、シングルレーザー方式のセルソーターを用い、24種類のヒト染色体を10〜12の画分に分離することができた。これを利用し、正常細胞、転座染色体を含む細胞、ヒト-げっ歯類の雑種細胞から染色体画分を分取しDNAを抽出後、調べたいヒト遺伝子をプローブとしてサザンハイブリダイゼーションを行い、新たに単離された16個の遺伝子についてその染色体上の位置を決定した。次に装置をデュアルレーザー方式に改良し、各染色体の分解能を上げることを試みた。ヒト染色体試料はDNA中のAT塩基対に親和性を示すヘキスト33258(HO)とGC塩基対に親和性を示すクロモマイシンA3(CA)の2種類の蛍光色素で二重染色し、レーザー光の励起波長を351.1〜363.8nmと457.9nmに調整した。HOによる蛍光は420〜560nmを、CAによる蛍光は560nm以上を回収し、それぞれの蛍光強度を二次元に展開した結果、24種類のヒト染色体を21グループにまで分離することができた。このうち、第1、2、3、4、5、6、13、16、17、18、19、20、21、22、Y染色体の計15種類の染色体については完全に単離することが可能となった。さらに、ヒト細胞からの単離が困難な染色体に関しては、ヒト-ハムスターの雑種細胞から調製した染色体試料をデュアルレーザー方式セルソーターで解析することにより、完全に単離できることが示唆された。これにより24種類すべてのヒト染色体を単離する道が開けた。また、ソーティングの速度を上げる手段としてショ糖密度勾配遠心により大まかに分画した試料をソーティングの材料として使用した。各画分には染色体粗抽出液中に混在する細胞の破片や核の大部分が除去されているため、染色体試料をそのままセルソーターにかける場合に比べ、ソーティングに要する時間は1/5〜1/10に短縮できた。

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その他 2

  1. がんにおけるDNAメチル化異常へのMBD蛋白の関与

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    DNAメチル化は遺伝子の転写抑制に密接に関連するエピジェネティック変化であり、がんではがん抑制遺伝子の高メチル化、がん遺伝子の低メチル化ががんの発生・進展に大きな影響を及ぼす。遺伝子転写抑制の主要なメカニズムとしてメチルCpG結合（MBD）蛋白の遺伝子メチル化プロモーターへの結合、ヒストン脱アセチル化酵素などヒストン修飾蛋白のリクルートが重要であると考えられる。MBD蛋白にはMBD1〜4、MeCP2の計５種類が存在するが、それぞれの塩基配列特異性や遺伝子特異性についてはまだ十分な情報がない。本研究では、我々が開発したMeTA-array（microarray coupled with methyl-CpG targeted transcriptional activation）という方法を駆使し、がん細胞においてそれぞれのMBD蛋白により転写抑制されるメチル化候補遺伝子を同定し、臨床検体におけるメチル化状況を検討する。すでに12種の膵がん細胞株とコントロールとして正常膵管上皮細胞株にMBD2のMBDを用いたMeTA-arrayを適用し、半数の膵がん細胞株に共通に見られる高メチル化候補遺伝子31種と低メチル化候補遺伝子19種を同定した。数種の高メチル化候補遺伝子の解析から臨床検体でも、高メチル化が高頻度で見られることが判明し、MeTA-arrayの有用性が示された。これらの解析を他のMBDを用いたMeTA-arrayでも同様に進めて行く。また、MBD蛋白のノックダウン等の手法を用い、各メチル化遺伝子の転写抑制にこれらがどのような役割を果たしているのか明らかにしていく。

  2. がん早期診断へ向けたメチル化miRNA遺伝子による遺伝子診断セットの開発

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    【目的】がんの診断マーカーとなるメチル化miRNA遺伝子の効率的な探索法の開発と診断への応用を目的とする。【内容】膵がんを例として、メチルCpG配列を標的とする転写活性化（MeTA）とmiRNAのマイクロアレイを組み合わせ、３種の膵がん細胞株でメチル化miRNA遺伝子が得られる効率を調べる。また、すべての細胞で共通に発現異常を示すメチル化miRNA遺伝子を見つけ、多段階発がん過程におけるメチル化時期を決定し、診断への応用の可能性を検討する。